何昀
- 作品数：47 被引量：94H指数：5
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 邻苯二甲酸二(2-乙基已基)酯致隐睾大鼠表皮生长因子受体表达的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在隐睾组织中是否存在改变及可能发挥的作用。方法:妊娠SD大鼠随机分为3组,即正常对照组、玉米油对照组和邻苯二甲酸二乙基已基酯(DEHP)实验组,每组10只。玉米油溶剂对照组和DEHP实验组自妊娠第12.5日到妊娠第19.5日分别持续每日经口给予玉米油或DEHP(500 mg/kg)1 ml灌胃,正常对照组不作任何处理。收集出生后20 d的雄性仔鼠睾丸,采用免疫组织化学及Western blotting方法检测EGFR在睾丸组织中的表达。结果:正常对照组和玉米油对照组EGFR的表达无统计学差异(P>0.05);DEHP诱导隐睾组隐睾睾丸组织中EGFR表达与2个对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,雄性隐睾子代睾丸组织中EGFR表达增加,可能与隐睾引起的远期不育有关。
- 刘东尧吴盛德何文飞何昀陈柏林龙春兰魏光辉
- 关键词：隐睾不育
- 全反式维甲酸诱导肝癌细胞Hepa1-6成熟和分化过程中的自噬被引量：4
- 2018年
- 目的探讨不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6成熟分化及细胞自噬水平的影响。方法以小鼠肝癌细胞Hepa1-6为研究对象,分别给予0.1、1、10μmol/L浓度的ATRA处理,荧光定量PCR和Western blot检测肝细胞相关标志基因的表达,吲哚菁绿(ICG)及过碘酸-希夫(PAS)染色检测小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟功能,透射电镜观测细胞连接及自噬小体,选择最适的ATRA作用浓度;Western blot检测自噬相关标志蛋白的表达,ptf LC3质粒转染细胞后共聚焦观察自噬流变化,检测自噬流是否通畅。结果相较于空白对照组,ATRA可呈浓度依赖性抑制肝前体标志蛋白AFP的表达,并促进肝细胞成熟标志ALB、CK18、TAT和Apo B的表达,ICG及PAS染色提示阳性细胞数明显增多;透射电镜结果显示ATRA诱导组的紧密连接和细胞骨架明显增多,可见高尔基复合体以及较多的自噬小体和自噬溶酶体。均以10μmol/L组最为显著,作为最适终浓度。自噬相关标志蛋白LC3-II、Beclin-1、RAB7、P62的表达不同程度增高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显增加(P<0.05),激光共聚焦可见10μmol/LATRA处理组细胞胞浆内绿色亮点的自噬小体及红色亮点的自噬溶酶体均较对照组明显增多。结论 ATRA可诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟分化,并促进细胞自噬水平增高。
- 方姝煜崔洁洁龚梦嘉何昀张敬芳毕杨
- 关键词：原发性肝癌全反式维甲酸自噬细胞分化
- Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭被引量：6
- 2018年
- 目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法 Real-time PCR及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-si Twist腺病毒感染细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。Ad-Twist及Ad-si Twist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在骨肉瘤细胞中Twist的基础表达显著高于C3H10细胞(P<0.05),其中在143B细胞表达最高,MG63细胞次之,TE85细胞中最低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-si Twist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞中Twist的m RNA及蛋白水平的表达(P<0.05)。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低(P<0.05)。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力(P<0.05)。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生长,信号明显弱于对照组。结论 Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。
- 何昀方姝煜毕杨何通川王佚洪思琦
- 关键词：骨肉瘤TWIST增殖迁移
- 全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖、迁移、侵袭的影响及其机制被引量：3
- 2016年
- 目的探讨不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及肝癌细胞间质标志蛋白和miR200家族的表达情况。方法以Hepa1-6小鼠肝癌细胞为研究对象,给予0、0.1、1.0和10.0μmol/L终浓度的ATRA处理,结晶紫染色检测细胞增殖,锥虫蓝拒染实验计数活细胞。Hoechst检测细胞凋亡,划痕实验检测迁徙能力,Transwell实验检测侵袭能力,荧光定量PCR(real-time PCR)法检测间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin和0和10μmol/L ATRA处理后的miR200家族的mRNA表达。结果 ATRA处理后Hepa1-6细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05),间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin的表达明显下调(P<0.05),ATRA的浓度越高,这些作用越明显。10μmol/L ATRA处理后miRNA200a-3p,200c-3p,141-3p显著上调。结论 ATRA呈浓度依赖性促进肿瘤细胞Hepa1-6凋亡,抑制其增殖、迁移及侵袭能力,这可能与ATRA上调microRNA200家族,抑制细胞的间质表型有关。
- 崔洁洁龚梦嘉何昀毕杨
- 关键词：肝肿瘤细胞全反式维甲酸迁移MICRORNA
- 稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株的构建被引量：3
- 2010年
- 目的构建稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株。方法PCR扩增获得ALB启动子，并与pBGLuc连接获得携带ALB启动子及荧光素酶报告基因的pBGLuc—ALB质粒，脂质体转染质粒到不同细胞，ALB—GLuc活性检测功能。构建逆转录病毒，感染HP14．5肝干细胞株获得携带ALB启动子及荧光素酶报告基因的稳定细胞株，经Dex、HGF体外诱导后第3、6、9、12天ALB—GLuc检测荧光素酶活性，免疫荧光检测ALB的表达。结果PCR、酶切及测序结果显示ALB启动子正确插入至荧光素酶GLuc基因上游，HEK293、HP14．5、LC14d及Hepa1-6细胞中ALB—GLuc活性与免疫荧光结果一致。HP14．5ALB—Gluc稳定细胞株在高浓度的稻瘟菌素中存活，免疫荧光结果显示Dex、HGF诱导后细胞中ALB的表达逐渐增强，并与ALB—Gluc活性升高一致。结论成功构建了稳定表达ALB启动子及荧光素酶报告基因的肝干细胞株，为研究肝干细胞的体外成熟分化提供了重要的细胞手段。
- 张维玉何昀毕杨
- 关键词：肝干细胞荧光素酶报告基因
- 小干扰RNA抑制L2RYC细胞MDR1表达及逆转对长春新碱的耐药性被引量：2
- 2012年
- 目的研究携带多药耐药基因(MDR1)小干扰RNA(siMDR1)的真核表达质粒对L2RYC卵黄囊瘤细胞株中MDR1基因及蛋白表达的抑制效果,并观察siMDR1作用前后细胞对长春新碱(VCR)耐药性的变化。方法设计4对特异性针对大鼠MDR1的siRNA序列,分别与pSES-HUS质粒重组获得pSES-siMDR1真核表达质粒,通过脂质体转染到L2RYC细胞中,用实时荧光定量PCR及Western blot检测转染后MDR1的mRNA及蛋白表达。转染后的细胞中再加入不同浓度的VCR,用MTT法检测吸光度,并计算出各组半数抑制浓度(IC50)值。结果 4对siMDR1分别转染均能不同程度地抑制L2RYC细胞MDR1基因表达,pool组MDR1的相对表达量最低(0.396±0.080);MDR1蛋白表达也能被有效抑制;经不同siMDR1转染的细胞加入VCR后细胞增殖被抑制,IC50降低,pool组最显著为(1.632±0.423)mg/L,与其余各组比较有明显差异(P<0.05)。结论 pSES-siMDR1真核表达质粒能有效抑制MDR1基因和蛋白的表达,MDR1表达被抑制后L2RYC细胞对VCR的敏感性增加。
- 何昀刘东尧温晟李明勇王强华燚魏光辉
- 关键词：多药耐药基因卵黄囊瘤长春新碱
- 携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体的构建与结构鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体,优化目前的肝细胞永生化。方法去除eGFP终止子taa的pSEB-HUS质粒为逆转录病毒基础质粒。先将SV40T及其启动子hEFH亚克隆至pSEB-HUS,再将LoxP位点插入至pSEB-SV40T质粒的抗性基因Blasticidin上游获得pSEB-LoxP-SV40T质粒。同时将CD自杀基因定向克隆至pSEB-HUS的eGFP下游;然后设计一段HSV-tk自杀基因引物,在上游引物的5′端加入方向一致的LoxP序列。PCR获得TK基因后,定向克隆至CD下游获得pSEB-CD-TK,最后将pSEB-CD-TK上的双自杀基因亚克隆至pSEB-LoxP-SV40T质粒上得到携带双自杀基因及SV40T的质粒。结果PCR及酶切鉴定均证实两个自杀基因及SV40T正确克隆至逆转录病毒质粒中,目的基因序列与GenBank报道一致,两个LoxP位点方向相同。结论成功构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体。
- 毕杨何昀黄佳祎张琴王瑜伟赵迎泽冯涛
- 关键词：自杀基因SV40T抗原
- AP2α重组腺病毒质粒的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2012年
- 目的构建转录因子AP2α(Activator protein 2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstem cells,MSCs),并检测其表达。方法从大鼠PC12细胞总RNA中PCR扩增AP2α基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrace-TOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-AP2α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达;Real-time PCR及Western blot检测AP2α的表达。结果 pAdtrace-AP2α质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1 400 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中;重组腺病毒pAd-AP2α在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×108pfu/ml;感染MSCs 48 h可观察到60%以上的RFP阳性细胞,经Real-time PCR及Western blot鉴定,感染后72 h,MSCs中AP2α的表达显著增高(P<0.01)。结论成功构建了携带转录因子AP2α的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs,增强MSCs中AP2α的表达。
- 毕杨龚敏何昀张赟陈洁陈洁
- 关键词：腺病毒载体骨髓间充质干细胞
- 转录因子Twist的siRNA筛选、腺病毒构建及功能检测被引量：4
- 2010年
- 目的 筛选特异性沉默人的Twist基因的siRNA序列,构建siTwist腺病毒并在MG63及143B骨肉瘤细胞中进行功能鉴定.方法 体外退火获得4组siTwist双链DNA序列,克隆至含有Twist基因的pSOS-Twist质粒中获得pSOS-siTwist质粒,脂质体转染HEK293细胞,GFP检测筛选有功能的siTwist片段,将筛选出的siTwist序列构建腺病毒,感染143B骨肉瘤细胞.通过RT-PCR、Western 印迹检测Twist的表达.siTwist与Twist腺病毒共感染MG63骨肉瘤细胞,细胞计数及细胞侵袭实验检测siTwist对Twist的抑制作用.结果 在HEK293细胞中,4组siTwist中有2组GFP的表达明显降低,且siTwist腺病毒能抑制143B骨肉瘤细胞中内源性的Twist表达,Twist腺病毒能促进MG63骨肉瘤细胞的增殖和转移,而两组siTwist与Twist共感染组MG63细胞的增殖及迁徙率均明显低于Twist组（P〈0.05）.结论 筛选出两对特异性沉默Twist基因的siRNA片段,并成功构建腺病毒,转染细胞后能有效抑制内源性和外源性的Twist表达,为研究Twist在骨肉瘤细胞增殖和转移中的作用及具体机制提供了有效的分子工具.
- 何昀毕杨刘星袁心刚魏光辉
- 关键词：TWIST基因腺病毒小干扰RNA
- 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导隐睾对SD幼鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[D(i2-ethylhexy1)phthalate,DEHP]作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中生殖细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只。玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组自妊娠第12.5～19.5天分别每日灌胃玉米油(2 ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药。取各组出生后第20天的雄性幼鼠睾丸组织,采用Q-PCR法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2基因的水平,流式细胞术检测睾丸生殖细胞的凋亡情况。结果 DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸组织中Bax基因mRNA的水平显著高于两对照组(P<0.000 1),Bcl-2基因mRNA的水平显著低于两对照组(P<0.01);DEHP诱导隐睾组幼鼠睾丸生殖细胞凋亡百分率显著高于两对照组(P<0.000 1)。结论孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,且隐睾鼠睾丸生殖细胞凋亡率增加,隐睾子代睾丸组织中凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有改变,推测其改变可能参与了生殖细胞的凋亡过程,并可能与隐睾继发的远期不育有关。
- 刘东尧吴盛德华燚何文飞何昀陈柏林龙春兰魏光辉
- 关键词：隐睾生殖细胞细胞凋亡BAX基因BCL-2基因
