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多拷贝重组HBsAg质粒的构建及在毕赤酵母中的高效表达被引量：15: 2008年; 目的通过构建多拷贝数表达质粒,获得高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株。方法通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达盒(5′AOX-HBsAg-TT)重复导入载体,构建多拷贝数表达质粒。通过电转化、15L规模发酵和纯化,获得纯化HBsAg颗粒,并对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数间的关系进行分析。结果多拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDS-PAGE、Western blot检测,显示出良好的特异性,电镜观察证明表达产物能够自发装配成22nm类病毒颗粒(VLP),其表达量与拷贝数呈正相关,拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响,HBsAg制备的免疫原能有效刺激小鼠产生保护性抗体。结论含多拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母HBsAg表达量。; 何成蔡蓓蓓楼觉人; 关键词：乙型肝炎表面抗原毕赤酵母

校企合作模式下的细胞工程教学改革被引量：1: 2018年; 本文从生物产业的快速发展对高校人才培养提出新要求出发,介绍了校企合作模式下细胞工程课在教学内容、教材编写、项目教学和实践教学环节等方面的教学改革实践,通过增加企业案例、工程项目实践和企业工程师进课堂等教学活动,促进了学生专业知识技能和人文素质提高,也促进教师的产学研相结合能力提高,是一种有益的高校课程教学模式。; 陈亮黄海周树敏何成王娇邓志瑞; 关键词：细胞工程校企合作教学改革实践教学

胰高血糖素样肽-1衍生物的聚乙二醇定点修饰及其产物性质分析: 2021年; 目的用马来酰亚胺活化的相对分子质量40000的聚乙二醇(MAL-PEG40K)定点修饰胰高血糖素样肽-1衍生物(glucagon like peptide-1analogue,GLP-1a),并分析修饰产物部分性质。方法采用MAL-PEG40K定点修饰GLP-1a,强阳离子交换层析分离纯化修饰混合物,SDS-PAGE及反相高压液相色谱法(RP-HPLC)检测修饰产物MAL-PEG40KGLP-1a纯度,报告基因法检测其体外活性,动物急性降血糖试验检测其体内生物学活性。结果MAL-PEG40K-GLP-1a经SDS-PAGE及RP-HPLC分析,纯度分别为95%和98.1%,体外活性保留率为22.9%,体内具有显著降血糖作用且药效时间明显延长。结论制备的MAL-PEG40K-GLP-1a药学性质获得显著改善,有望开发为安全、长效的新型GLP-1受体激动剂。; 秦荣浦田石华江筠刘敏何成杨宇峰楼觉人; 关键词：报告基因生物学活性

构建高拷贝数重组表达质粒在毕赤酵母高产量表达HBsAg中的应用: 目的：通过构建高拷贝数表达质粒获得稳定高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株。方法：通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达盒(5'AOX.HBsAg-TT)重复导入载体,构建成...; 何成蔡蓓蓓楼觉人; 关键词：乙型肝炎表面抗原毕赤酵母重组表达质粒; 文献传递

毕赤酵母表达RANKL-HBsAg作为治疗性骨质疏松症疫苗的研究: 目的:用毕赤酵母表达的RANKL-HBsAg免疫小鼠,诱导其产生针对RANKL的中和抗体,考察免疫血清对于RANKL/RANK信号通路的阻断作用以及RANKL-HBsAg免疫后对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型症状的影响...; 何成楼觉人; 关键词：乙肝表面抗原毕赤酵母骨质疏松症; 文献传递

高拷贝表达重组乙肝表面抗原的毕赤酵母及其制法和应用: 本发明提供了一种表达乙肝表面抗原的酵母细胞，所述酵母细胞中整合有表达乙肝表面抗原的构建物，所述构建物含有2－15个串联排列的乙肝表面抗原表达盒，各表达盒包括以下元件：(a)起始信号元件AOX；(b)乙肝表面抗原基因；(c...; 何成楼觉人; 文献传递

NF-κB受体激活因子配体在大肠杆菌中的表达、纯化及其活性被引量：2: 2011年; 目的在大肠杆菌中表达并纯化NF-κB受体激活因子配体(Receptor activator of NF-κB ligand,RANKL),并检测其生物学活性。方法 PCR扩增RANKL基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-RANKL,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析目的蛋白的表达和表达形式。表达产物经镍离子柱亲和层析、阴离子交换层析及阳离子交换层析进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度,Western blot检测其反应原性,BCA试剂盒测定蛋白浓度,并经MTT法及RAW264.7细胞分化试验测定其生物学活性。结果重组表达质粒pET-28a-RANKL经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组RANKL蛋白相对分子质量约为20 000,部分以包涵体形式存在;经纯化后纯度可达98.8%,可与相应抗体反应形成特异条带,蛋白浓度为56.72μg/ml,体外活性试验显示,RANKL具有良好的生物学活性。结论成功原核表达了RANKL,纯化的重组RANKL具有生物学活性,为骨代谢调控机制的研究及相关药物的开发提供了材料。; 杨忠东何成; 关键词：大肠杆菌原核细胞基因表达生物活性

毕赤酵母表达RANKL-HBsAg作为治疗性骨质疏松症疫苗的研究: 目的用毕赤酵母表达的RANKL-HBsAg免疫小鼠,诱导其产生针对RANKL的中和抗体,考察免疫血清对于RANKL/RANK信号通路的阻断作用以及RANKL-HBsAg免疫后对OPG基因敲除小鼠骨质疏松症模型症状的影响。...; 何成楼觉人; 关键词：乙肝表面抗原毕赤酵母骨质疏松症; 文献传递

构建高拷贝数重组表达质粒在毕赤酵母高产量表达HBsAg中的应用: 目的：通过构建高拷贝数表达质粒获得稳定高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株。方法：通过对单拷贝表达质粒进行改造，将表达盒(5'AOX-HBsAg-TT)重复导入...; 何成蔡蓓蓓楼觉人; 关键词：表面抗原毕赤酵母工程菌; 文献传递

混合补料诱导高拷贝重组毕赤酵母高效表达X-HBsAg被引量：5: 2010年; 目的对高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg的诱导策略进行优化。方法在摇瓶中分别诱导1、4、8拷贝数的重组毕赤酵母,ELISA检测X-HBsAg的表达量;在15L发酵罐中对8拷贝的重组毕赤酵母进行诱导表达,分别考察甘油浓度对菌体比生长速率的影响、过渡阶段混合补料对菌体生长及细胞相对活性的影响、诱导阶段比生长速率对目的蛋白表达的影响以及诱导阶段混合补料对目的蛋白表达的影响。结果 8拷贝的重组毕赤酵母在摇瓶中诱导表达的X-HBsAg量明显高于1和4拷贝重组子。优化的发酵诱导策略为:初始补加甘油阶段控制甘油浓度在15g/L;过渡阶段采用甲醇与甘油混合补料,控制甘油浓度在限制性浓度以下;诱导阶段采用甲醇与甘油混合诱导X-HBsAg表达,诱导初始阶段控制比生长速率在0.015/h以上,中后期在0.002/h左右;发酵92h,X-HBsAg的表达量比单纯甲醇诱导提高约67%。结论混合补料诱导较单纯甲醇诱导策略更有利于高拷贝重组毕赤酵母表达X-HBsAg。; 王龙刚王宇凯何成楼觉人杨忠东; 关键词：毕赤酵母

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何成