- PEG6000沉淀结合差速离心方法浓缩水中脊髓灰质炎病毒被引量：15
- 2000年
- 目的 建立一种简便、有效的从细胞培养物中纯化PV1病毒的方法用于水病毒消毒实验 .方法 PV 1 Henan株在 Hep- 2细胞中增殖后用聚乙二醇 (PEG) 6 0 0 0沉淀结合差速离心的方法纯化病毒 .RT- PCR和透射电镜 (TEM)鉴定提纯病毒的形态学和分子生物学特性 .结果 p H值 7.5时终浓度 70 g· L- 1的 PEG6 0 0 0沉淀病毒的感染性回收率(PFU计数 )为 79.2 % ,提纯系数 (PF)为 1 0 6 ,再经差速离心(1 6 0 0 0 g30 m in,1 0 0 0 0 0 g4.5 h)浓缩病毒的感染性回性率和提纯系数分别为 2 9.0 %和 1 6 8.RT- PCR和 TEM最终鉴定提纯物为 PV 1 Henan株 .结论 PEG 6 0 0 0结合差速离心的方法较之蔗糖密度梯度区带离心方法易于操作 ,且比单独PEG沉淀有更高的纯化系数 ,是一种简便、有效的方法 .
- 张文清马文煜骆文静姜绍谆胡艳冰侯悦张进于碧云
- 关键词：脊髓灰质炎病毒纯化聚乙二醇水消毒离心法
- RDS-ELISA的建立及其在检测JEV抗原和抗体中的应用被引量：2
- 1989年
- 通过用鞣酸处理微板、在稀释液中加入4％PEG、提高NaC1浓度,用鸡蛋清代替鸡血清、TMBS代替OPD底物、自来水代替PBS洗液、提高试验温度、缩短反应时间等措施,建立了一种快速酶联免疫吸附试验双夹心法(RDS-ELISA),并用该法对日本脑炎病毒(JEV)及其单抗进行了测定。不仅整个试验可在1小时内完成,而且所得结果与常规双夹心法相同,比血凝试验约高4倍;抗体效价与常规法相同或高10倍,比间接法高10～10,000倍。该法是一种快速、简便、特异、敏感的方法。
- 张明杰汪美先姜绍谆马文煜于碧云
- 关键词：ELISA日本脑炎病毒
- 全文增补中
- 用双盲法观察JEV—McAb对乙型脑炎患者的疗效
- 1991年
- 报告了1989年7～8月对88例诊断确切,发病5d 内的乙脑患者,用IJEV—McAb一次性静脉滴注双盲法治疗的结果。重症患者用McAb 治疗的治愈率(15/18)明显高于对照组(6/14)(P<0.05)。在退热作用方面,两组重症患者相差显著(P<0.05);中型患者相差非常显著(P<0.01)。显示McAb 对重、中型乙脑有较好的治疗作用。治疗中未发生1例过敏反应,表明纯化的鼠源性McAb 治疗乙脑患者是安全有效的。
- 马文煜姜绍谆张明杰于碧云黄庆生汪美先
- 关键词：乙型脑炎单克隆抗体双盲法
- ELISA快速诊断小儿呼吸道合胞病毒感染
- 1989年
- 用ELISA双夹心法、病毒分离和IFA法,平行检测了72例急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物中呼吸道合胞病毒(RSV)抗原,结果诊断RSV感染的阳性率分别为72.2％(52例)、81.9％(53例)和81.1％(44例)。同病毒分离比较,ELISA的敏感性、特异性和诊断符合率分别为86.4％,92.3％和87.57％,IFA的敏感性、特异性和诊断符合率分别为74.6％、100.0％和79.2％。患儿年蛉,病情和标本采集时间等因素,对ELISA敏感性有一定影响。ELISA检测RSV抗原特异、敏感、快速(收到标本后7 h内可获得结果),适用于婴幼儿,尤其9月龄以内小儿RSV感染的早期诊断。
- 张国成王瑞华李新发姜绍谆于碧云马文煜
- 关键词：RSV儿童ELISA
- 快速IgM抗体捕捉ELISA的建立及其在乙脑早期诊断中的初步应用被引量：8
- 1989年
- 用辣根过氧化物酶标记的抗日本脑炎病毒(JEV)种特异性单克隆抗体为结合物,建立了一种快速IgM抗体捕捉酶联免疫测定法(RMAC-ELISA),并初步用于乙脑的快速诊断,取得了良好的效果。该法通过用鞣酸预处理微板,提高反应温度,在稀释液中加入PEG并提高NaCl浓度,用鸡蛋清代替牛血清白蛋白或鸡血清,用自来水代替PBS作为洗液,用快速漱洗3次代替3×5分钟洗涤,用TMBS代替OPD底物,用酶标单克隆抗体代替多克隆结合物等措施,加快了反应速度,缩短了反应时间,简化了操作步骤,提高了敏感性,保证了特异性。从微板预处理至出结果,仅需1小时。由于该法具有简便、快速、特异、敏感等特性,不仅可以用于乙脑的早期诊断及实验室研究,还有可能推广到其它的免疫学检测方法中去。
- 张明杰汪美先姜绍谆马文煜于碧云
- 关键词：免疫球蛋白M抗体ELISA日本脑炎
- 单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒V_3(E)糖蛋白的研究被引量：2
- 1989年
- 本文探讨了用JEV-V_3(E)McAb制备亲和层析柱纯化mg量V_3糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而化学裂解剂(NP_(40)、去氧胆酸钠、Tritonx-100)处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5,0.05M二乙胺洗脱剂对V_3的生物学活性影响较少;而3M KSCN对V_3的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb 2F_2和mC_3亲和层析柱纯化V_3糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30～40％及30～60％,蛋白收获量分别为0.33～1.26及0.21～0.66mg,相对HA比活性分别提高3～8倍及8～12倍;经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色,显示一条主带,分子量相当于V_3糖蛋白;纯化的V_3糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。
- 马文煜于碧云于文彬黄庆生姜绍谆汪美先
- 关键词：糖蛋白日本脑炎病毒亲和层析纯化单克隆抗体去氧胆酸钠蓝染色
- ELISA法筛选McAb亲和层析洗脱液被引量：2
- 1992年
- McAb亲和层析是分子生物学研究的重要手段之一。已广泛用于生物活性分子的纯化。由于所用McAb的亲和力和被纯化分子的特性不同,需要测定McAb的亲和力和选择适当的洗脱液。通常是通过制备几种不同的McAb亲和柱进行比较来选择。但这样操作烦琐,既耗费时间也不经济。ELISA测定洗脱液的洗脱效果已被人们采用。
- 黄庆生张明杰马文煜于碧云姜绍谆
- 关键词：ELISA单克隆抗体
- 流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体用于临床治疗的初步观察被引量：7
- 1992年
- 作者参照美国药品食品管理局制定的“人用McAb制剂生产鉴定细则”,纯化流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体混合制剂。以10mg总剂量,1次静脉滴入加肌肉注射治疗乙脑患者55例,作为乙脑单抗组,另设病毒唑组17例、胸腺肽组7例和对症处理组12例,作为对照。4组的平均退热日数分别为2.86,7.16,9.11,6.20d,乙脑单抗组明显少于其他3组,相差显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01);4组的痊愈率分别为80.0%,70.6%,42.9%和50%,经统计分析各组间疗效无显著差异(P>0.05),作者在使用McAb前,均先做皮肤过敏试验,使用McAb时并给予地塞米松。
- 马文煜姜绍谆张明杰于碧云黄庆生汪美先
- 关键词：脑炎免疫疗法
- 水中脊髓灰质炎病毒细胞感染模型中病毒株与细胞株的筛选被引量：3
- 1998年
- 目的：根据5种细胞系对脊髓灰质炎病毒1型（PV1）5个毒株的敏感性筛选适用于病毒消毒实验的病毒株和细胞系．方法：比较各毒株在不同细胞系中增殖3d～7d后的细胞病变作用（CPE）、半数组织培养感染里（TCⅡ）50）、蚀斑计数（PFU）及免疫印迹（DIBA）试验结果．结果：CPE与TCID）检测表明，同一细胞系Hep2和Hela中病毒感染细胞作用强弱为Henan，Hebei＞Brunhide，Mahony＞Sabin株；不同细胞系对同一病毒株的敏感性为Hep－2＞BGM＞Hela,Vero＞RD细胞．DBA检测提示，Henan株较Brun－hide更易检出．结论：Henan株及Hep－2细胞可作为PV消毒实验所用的病毒和细胞．
- 张文清姜绍谆马文煜骆文静胡艳冰于碧云侯悦张进
- 关键词：脊髓灰质炎病毒病毒株细胞系细胞感染
- 单克隆抗体治疗日本脑炎病毒感染恒河猴的实验研究被引量：2
- 1990年
- 感染日本脑炎病毒(JEV)的恒河猴,出现脑炎的一系列症状与体征,终因呼吸及循环衰竭而死亡。JEV感染猴体温升到超过39℃以上后的第2天,注射单克隆抗体(McAb)制剂进行实验性治疗。结果显示,McAb经肌肉、静脉、硬脑膜下加肌肉等不同途径注射后,均有良好的疗效,对恒河猴的保护率达100％,其中以硬膜下加肌肉途径注射McAb的效果最佳。多次注射McAb,未发现任何不良反应与毒副作用。本研究表明,将鼠源性McAb用于灵长类安全可靠,若过渡到临床使用,是可行的。
- 张明杰汪美先姜绍谆马文煜于碧云
- 关键词：恒河猴日本脑炎单克隆抗体
