乔松林
- 作品数：126 被引量：235H指数：7
- 供职机构：河南省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家生猪现代产业技术体系建设项目河南省农业科学院科研发展专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库并对文库质量进行鉴定。方法:利用oligo(dT)-纤维素亲和层析从SPF雏鸡法氏囊细胞制备mRNA,合成的双链cDNA定向克隆到T7EcoR I/HindIII载体臂,包装并构建cDNA表达文库。对文库进行滴度测定和重组子测定。扩增文库并进行PCR鉴定插入序列的长度及分布。结果:文库初始滴度为5×107pfu/mL,扩增后滴度达到1.88×1010pfu/mL。插入片段平均长度1440bp,主要分布在750～2000bp之间。结论:构建的鸡B淋巴细胞cDNAT7噬菌体表达文库具有很高的质量,为进一步研究鸡B细胞发育以及传染性法氏囊病毒(IBDV)的分子致病机制奠定了实验基础。
- 张改平张红郭军庆王选年乔松林郝慧芳王丽
- 关键词：CDNA表达文库
- 猪IgG Ⅱ类Fc受体基因真核表达重组质粒的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR及双酶切鉴定:扩增出901 bp的PCR产物;KpnI/EcoR I双酶切,切出5 376和901bp DNA片段,表明重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ构建成功。然后脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRII配体亲和特性。
- 张玉杨张改平乔松林郭成留
- 关键词：IGG
- 基于衣壳蛋白p72建立的非洲猪瘟病毒抗体检测试纸及制备方法
- 本发明设计一种基于衣壳蛋白p72建立的非洲猪瘟病毒抗体检测胶体金免疫层析试纸及制备方法，该试纸包括支撑底板，在支撑底板上按顺序依次固定有样品垫、金标蛋白垫、层析检测膜和吸水垫；其中金标蛋白垫由玻璃纤维棉包被，固定有胶体金...
- 乔松林耿瑞杨继飞马红芳李睿孙彦刚王磊孙亚宁张改平
- 文献传递
- 动物IgG Fc受体研究
- 张改平郭军庆乔松林李青梅杨艳艳郝慧芳赵东王丽
- 1.所属科学技术领域：该项目属兽医免疫学与家畜病毒学领域。2.主要研究内容：(1)通过构建牛肺泡巨噬细胞cDNA表达文库，创建了基于玫瑰花环指示系统的亲和分子克隆技术方法，并克隆鉴定了牛的四类FcγR(boFcγRI、b...
- 关键词：
- 关键词：家畜病毒学
- IPMA筛选猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体方法研究被引量：2
- 2019年
- 为了得到一种能够高通量检测细胞培养物的方法,并将其用于筛选特异性强、敏感度高的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体。用每孔能感染约100个细胞的病毒量接种单层覆盖96孔板的Marc-145细胞,12h后用含3%H2O2的甲醇固定细胞,以制备免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)反应板。以100μL/孔的量将融合后继续培养10d的杂交瘤细胞的培养上清加入至IPMA反应板,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,以3-氨基-9-乙基咔唑(AEC)作为显色底物,于倒置显微镜下进行观察。结果表明,共筛选出1D1、7G8等39份PRRSV单克隆抗体,这39份单抗能够使PRRSV中高致病毒株HN07-1和经典毒株BJ-4感染的Marc-145细胞被特异性染色,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪流行性腹泻病毒感染的Marc-145细胞无交叉染色。因此,构建的IPMA方法能够敏感、准确地捕捉到PRRSV单克隆抗体。
- 杨艳艳乔松林李睿郭军庆李青梅滕蔓王丽赵东李学伍邓瑞广张改平
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体
- 非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株三重荧光定量PCR鉴别检测方法的建立及应用被引量：3
- 2022年
- 针对非洲猪瘟病毒B646L、MGF505-2R和CD2v基因分别设计了引物和探针,经过条件优化,建立了基于TaqMan探针技术的三重荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究建立的三重荧光定量PCR检测方法与猪场常见病毒的核酸不发生交叉反应,具有良好的特异性;敏感性分析显示,针对B646L、MGF505-2R和CD2v基因的最低检测下限分别为6.5,8.0和14.0 copies/μL;并且该方法在10~10copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,组间变异系数为0.05%~2.68%,组内变异系数为0.10%~1.17%,稳定性良好。进一步针对临床核酸样品的检测显示,本方法和OIE推荐的检测方法具有良好的一致性。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒野毒株和基因缺失株的荧光定量PCR鉴别检测方法,为临床非洲猪瘟病毒的监测诊断提供了良好的技术支撑。
- 郭振华邢广旭翁茂洋金前跃乔松林张改平
- 关键词：非洲猪瘟病毒荧光定量PCR
- 法氏囊B细胞λ轻链基因编码蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2007年
- 为获得鸡λ轻链基因的表达蛋白,采用聚合酶链反应从鸡法氏囊B细胞cDNA文库中扩增出分泌表达蛋白的编码基因;用限制性内切酶消化后,插入克隆载体pUC19中。经PCR鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于原核表达载体PET43a的相应酶切位点。经过基因序列测定、BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定证实克隆载体正确插入载体PET43a。转化宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导、SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到表达;且能与His-Taq单抗相结合。
- 宋海涛张红王丽段艳华乔松林李学伍赵光辉张改平
- 关键词：传染性法氏囊基因蛋白
- 酶联免疫吸附技术在规模化猪场的应用
- 2016年
- 血清学检测在疫苗免疫效果评估、疫病诊断监测、猪群健康评估等方面发挥着重要的作用,其中酶联免疫吸附试验(ELISA)检测技术因其具有操作简便、快速敏感和易于标准化等优点,使其得到快速发展和广泛应用。目前ELISA检测技术在养猪生产中已得到广泛的认可,但如何采集合适的样本数量、如何从检测结果分析出需要的信息等,依然是困扰大多数从业者的问题。文章通过结合实际的临床检测案例,希望可以为该技术在规模化猪场的应用提供参考。
- 郭振华乔松林
- 关键词：血清学检测ELISA
- 小鼠FcγRⅢ线性配体结合表位
- 本发明涉及小鼠mFcγRIII线性配体结合表位，该表位的氨基酸序列为Cys Ser Phe PheHis Asn Glu Lys Ser Val Arg Tyr His。本发明以化学合成多肽分析鉴定小鼠FcγRIII的线...
- 张改平张利娜席俊郭军庆苗现伟赵东乔松林杨艳艳郅玉宝刘运超王方雨王丽邓瑞广
- 文献传递
- 鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定被引量：3
- 2008年
- 为构建鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库并对文库质量进行鉴定,从鸡胚成纤维细胞中直接提取mRNA,用紫外分光光度计测定含量。经电泳确定mRNA的质量,反转录合成第一、二链cDNA,经苯酚氯仿抽提后与EcoRⅠ接头连接,经NotⅠ酶切后用spin column除去小于500 bp的cDNA片段,与经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切的真核表达质粒连接,连接产物电转化感受态细胞,测定文库的容量大小并通过colony PCR鉴定插入cDNA片段的大小。构建成含8.8×105个重组子的鸡胚成纤维细胞cDNA文库,重组子中平均插入外源片段长度大于1.0 kb的约占85.7%。从结果看构建的文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆。
- 张改平朱礼倩杨艳艳赵绪永乔松林张红王丽李清州王选年
- 关键词：鸡胚成纤维细胞CDNA表达文库
