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转染慢性粒细胞白血病总RNA对树突状细胞介导的抗白血病作用的体外研究被引量：2: 2013年; 目的体外诱导和鉴定慢性粒细胞白血病-树突状细胞(CML-DC),并探讨人慢性粒细胞白血病(CML)总RNA体外转染对其介导的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)对慢性粒细胞白血病细胞杀伤作用的影响。方法分离14例CML患者骨髓单个核细胞,加入rhIL-4、rhGM-CSF、rhTNF-α诱导培养CML-DC。分别于培养第1、3、6、14d用倒置显微镜进行形态学观察,流式细胞术检测免疫学表型,染色体G显带技术检测其染色体核型,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcr-abl融合基因。并于CML-DC培养第5d,加入CML细胞总RNA脂质体转染,或裸总RNA转染,或不加任何试剂继续培养的DC,共三种CML-DC,分别致敏T淋巴细胞,另设以IL-2培养的T淋巴细胞为对照组,比较不同组别的致敏T淋巴细胞的杀伤活性。结果CML骨髓单个核细胞诱导前CD1α、CD83表达均在5%以下。而诱导成熟的CML-DC细胞CD1a、CD83阳性表达率分别为20.13±3.43%、26.76±2.79%,较诱导前均明显增高(P<0.01)。CML-DC细胞均存在Ph1染色体,并表达bcr-abl融合基因。总RNA脂质体转染CML-DC、裸总RNA转染CML-DC、单纯CML-DC分别致敏的T淋巴细胞在效:靶比为20:1时对CML单个核细胞的杀伤效率分别为75.33±3.11%、37.23±2.92%、29.62±1.61%,均明显高于对照组(9.87±3.43%,P<0.01)。总RNA脂质体转染的CML-DC所诱导的CTL杀伤活性最强,与后三组杀伤活性均有显著性差异(P<0.001)。结论CML-DC既具有CML白血病源性,又具有DC细胞的特性,并能诱导特异性CTL杀伤白血病细胞。经脂质体转染CML细胞总RNA可以提高CML-DC介导的CTL特异性杀伤慢性粒细胞白血病细胞。; 饶燕飞邹湉杨桂玲王小中丁伟荣; 关键词：树突状细胞慢性粒细胞白血病总RNA

人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法的比较研究被引量：4: 2007年; 目的比较Ficoll密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与全骨髓培养法之间的差异,以期建立一种简便、实用的基于临床移植需要的MSCs分离方法。方法分别应用上述两种方法分离MSCs,比较用两种方法的细胞形态、MSCs细胞得率及以及细胞表面标志的差异。结果两种方法均能有效培养出骨髓MSCs,且获得的第二代MSCs细胞形态无明显差异,细胞形态均一,为长梭形或三角形。5ml骨髓细胞分离培养后,Ficoll密度梯度离心法获得的MSCs细胞总数显著小于全骨髓培养法(t=2.639,P<0.01)。Ficoll密度梯度离心法与全骨髓培养法获得的第二代MSCsCD29、CD105、CD105、CD34阳性表达率的差异无统计学意义(t分别为0.809、0.659、0.277、0.191,P均>0.05),但前者的HLA-DR阳性表达率明显低于后者,差异具有统计学意义(t=2.347,P<0.05)。结论与Ficoll密度梯度离心法相比较,全骨髓培养法分离MSCs具有培养时间较短,细胞得率较多的优点,虽纯度相对较低,但仍是一种较好的MSCs分离方法。; 丁伟荣吴晓牧饶燕飞杨志刚柳喆张水生; 关键词：间充质干细胞骨髓细胞培养

c-myc基因在慢性粒细胞白血病患者中表达的意义被引量：6: 2016年; 目的探讨c-Myc基因与慢性粒细胞白血病之间的关系。方法应用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)技术检测30例CML(其中慢性期11例,加速期8例,急变期11例)和10例对照(正常骨髓6例和非恶性血液病4例)骨髓单个核细胞中c-myc基因的表达,分析c-myc基因与CML患者不同临床阶段之间的关系。结果 c-myc基因在CML不同临床分期的表达水平均有所升高,CML慢性期患者和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05),CML加速期和急变期患者c-myc基因表达水平均明显高于慢性期和对照组(P<0.05),CML急变期患者较加速期患者c-myc基因表达水平更高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 c-Myc基因在CML加速期和急变期的表达明显升高,提示c-myc基因高表达可能是CML病情进展与急变的机制之一。c-myc基因表达水平在CML患者病程监测中具有重要意义,甚至可能作为c-myc基因抑制剂应用于CML的依据。; 魏宇靖柯波刘婷婷丁伟荣符环程洪波; 关键词：C-MYC基因慢性粒细胞白血病

人骨髓间充质干细胞的分离培养和诱导分化为神经元样细胞的研究: 目的:探索成人骨髓间充质干细胞的分离培养及诱导分化为神经元样细胞的体外条件。由于MSCs容易获得, 并有多向分化特性,利用自体的骨髓MSCs在体外扩增后重新植入机体,能修复组织损伤及分泌机体所需物质治疗脑血管疾病、脊髓损...; 吴晓牧杨志刚丁伟荣柳喆张昆南; 文献传递

慢性肾功能不全患者肾移植前后外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义: 目的:CD4+CD25+T细胞是调节性T细胞的主要组成部分,具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特性,主要在胸腺和外周血中天然产生,占人类的CD4+T细胞的比例是5%～15%。本研究主要探讨慢性肾功能不全患者肾移植前后外周...; 何丹丁伟荣胡国柱; 文献传递

人骨髓间质干细胞的分离培养和诱导分化为神经元样细胞的研究被引量：9: 2007年; 目的:探索成人骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离培养及诱导分化为神经元样细胞的体外条件。方法:采用Ficoll淋巴细胞分离液(1.077g·mL-1)密度梯度离心法从人的骨髓中分离出MSCs进行体外扩增。收集第2代细胞流式细胞仪检测MSCs表面标志。逐渐加入表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(BME)和全反式维甲酸(ATRA)诱导MSCs向神经元细胞分化,通过免疫细胞化学法鉴定诱导后细胞神经元烯醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(nsetin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果:流式细胞仪检测结果显示培养后的MSCs强表达CD29;较强表达CD44、CD166和CD105;不表达CD45、CD34和HLA-DR。诱导剂诱导后,MSCs分化为具有典型的神经元形态的细胞,免疫细胞化学显示78%的细胞NSE表达阳性;大约51%细胞nsetin表达阳性;所有细胞GFAP均阴性表达。结论:成人MSCs在体外可定向诱导分化为神经元样细胞,且具有较高的阳性分化率。; 吴晓牧杨志刚丁伟荣杨海军柳喆张昆南; 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化

人骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性的研究被引量：12: 2005年; 目的研究人骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离和培养条件,并探讨其生物学特性.方法取无恶性血液病的32～65岁的成人骨髓7例,经密度梯度离心得到单个核细胞,加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液,将细胞的密度调整到1×106个/mL,接种到12孔培养板中(1 mL/孔)进行培养,48 h 后更换新鲜培养液,以后每3 d 换液1 次.当细胞铺满培养板底90%以上时,按常规方法进行细胞传代培养.用流式细胞术检测培养细胞的CD29、CD44、CD166、CD105、CD34、CD45、HLA-DR表达情况.并且使用脂肪细胞诱导培养液诱导培养MSCs,油红O染色检测其能否被诱导分化为脂肪细胞.结果成人骨髓接种后24 h内细胞开始聚集成细胞集落,并从集落中长出少许长梭形细胞,6～15 d细胞进入快速增殖期,一般培养20～25 d后细胞汇合成片铺满培养板底;而传代培养的细胞每代约需10～15 d即可铺满瓶底.流式细胞术检测结果显示,此次培养的骨髓来源细胞高表达CD29、CD44、CD166、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR,符合骨髓MSCs细胞的特性.油红O染色显示MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞.结论用密度为1.077 g/mL淋巴细胞分离液作为分离液,密度梯度离心法分离培养的人骨髓MSCs增殖力强,操作简单,是一种较好的分离和培养MSCs的方法.MSCs可以被诱导分化为脂肪细胞.; 易敬林杨海军丁伟荣柳喆吴晓牧杨志刚陈波何丹; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养

干细胞的可塑性及临床应用研究: 金成豪丁伟荣胡坚方; 该研究项目属于医用细胞生物学领域，其研究目的：通过从人体组织包括脐带血细胞、胎肝、骨髓细胞中鉴定和分离具有ES细胞特性的干细胞，寻求一种适合于临床治疗的高效简便的细胞治疗方法。主要研究内容：探讨不同孕期脐带血干细胞表型特...; 关键词：; 关键词：造血干细胞

诱导人骨髓间充质干细胞向运动神经元分化的研究被引量：3: 2009年; 目的探讨人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stemcells,hMSCs)在体外诱导向运动神经元分化的潜能。方法用密度梯度离心法分离hMSCs,在含有10%FBS的DMEM/F12培养基中的培养扩增。将传代后的第1代hMSCs分为诱导组和对照组,诱导组的细胞在完全培养基中加入终浓度为10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预处理24h后,用0.5μg/mL维甲酸(RA)和200ng/mL音速波状蛋白(shh)联合诱导10d。对照组不加上述诱导剂。光镜下观察其分化过程中hMSCs的形态变化,免疫组化检测诱导前后细胞是否表达神经干细胞特异性标志蛋白,用流式细胞仪检测是否产生运动神经元及在总的细胞数种所占比率,并用流式软件分析结果。结果诱导组hMSCs经诱导后能分化为具有典型神经元形态的细胞,部分细胞表达抗人神经巢蛋白(Nestin),表达率达到(25.0±4.8)%;流式检测诱导后运动神经元特异性标志蛋白HB9表达,表达率达到(50.0±5.3)%。对照组细胞形态无改变,无Nestin表达,HB9表达小于5%。结论hMSCs在体外条件下能诱导分化为运动神经元样细胞。; 孔卫国吴晓牧张昆南胡国柱丁伟荣何丹; 关键词：骨髓间充质干细胞运动神经元分化

人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元定向分化的实验研究被引量：5: 2008年; 目的探讨人骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外定向分化为神经元的潜能。方法体外分离和扩增人BMMSCs。利用扩增后的第2代BMMSCs分为诱导组和对照组。诱导组的细胞经预处理和预诱导后在含全反式维甲酸(ATRA)和音速波状蛋白(Shh)的完全培养基中诱导5 h,对照组不加任何诱导剂。诱导后观察细胞形态变化,采用免疫细胞化学染色法检测神经元样细胞特异标志。结果诱导组BMMSCs经诱导后均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并表达神经元特异性烯醇化酶[NSE,(61.00±3.63)%]、胶质纤维酸性蛋白[GFAP,(14.42±2.74)%],且有相当部分神经元样细胞表达胆碱乙酰转移酶[ChAT,(9.92±1.29)%];对照组BMMSCs细胞形态无明显变化,上述特异性标志物表达也均为阴性。结论BMMSCs可跨胚层分化为神经元样细胞和胆碱能神经元样细胞。; 吴晓牧丁伟荣项正兵王卫真柳喆张昆南; 关键词：骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化

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丁伟荣

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