黄超
- 作品数：11 被引量：12H指数：2
- 供职机构：江苏省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项江苏省科技支撑计划项目艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- H7N9亚型禽流感病毒核蛋白NP原核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建甲型H7N9禽流感病毒NP基因的原核表达载体,并表达其编码重组蛋白。方法 RT-PCR法扩增H7N9病毒NP基因,克隆至原核表达载体PET28a(+)中,构建表达载体PET28a(+)-NP质粒;经PCR、双酶切、测序鉴定后,将PET28a(+)-NP质粒转化表达菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达NP重组蛋白。应用western blot法鉴定NP蛋白的表达。结果成功构建NP基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达出分子量为56kD的NP重组蛋白。结论实现了禽流感病毒H7N9NP重组蛋白在原核系统中的高效表达,为禽流感诊断试剂及单抗的研发工作奠定了基础。
- 张文帅张黎温恬迟莹黄超彭海燕焦永军史智扬
- 关键词：原核表达
- 一种I型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒
- 本实用新型为一种I型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，其包括盒体，盒盖，其中所述盒体内设置一带孔硬质海绵，硬质海绵上部中央设置一个抗stxI单克隆抗体包被的96孔板凹槽；硬质海绵上下两侧边缘设置两个冰袋孔；凹槽上下两侧...
- 黄超温恬曾晓燕史凤娟彭海燕焦永军郭喜玲
- 文献传递
- 一种基于STXⅡ免疫磁珠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒
- 一种基于STXⅡ免疫磁珠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括：盒体、盒盖，其中，盒体内部设有两块隔板，将盒体分隔成三个容腔；每个容腔内设与容腔大小适配的硬质海绵，分别为海绵A，海绵B与海绵C，海绵A上设有竖直放置96微孔板...
- 温恬黄超迟莹李燕曾晓燕史凤娟焦永军
- 文献传递
- 新型冠状病毒双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法的建立与评价
- 2023年
- 目的建立新型冠状病毒(SARS-CoV-2)双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法,以利于SARS-CoV-2感染的快速诊断。方法采用2株针对重组核蛋白(nucleoprotein,NP)的单克隆抗体WT5(捕获抗体)和WT9(检测抗体),构建双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法,并评价该方法的灵敏度、特异性、稳定性。结果建立以SARS-CoV-2抗原为靶向分子的免疫胶体金层析方法。该方法能在10~15 min内完成对SARS-CoV-2抗原的检测,可检测病毒抗原浓度5 ng/mL以上的SARS-CoV-2阳性样本;制备的免疫胶体金层析试纸条的灵敏度和特异度分别为87.50%、99.36%,阳性预测值和阴性预测值分别为97.67%、96.27%;与鼻病毒、EB病毒、季节性流感(H3N2)无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性。结论SARS-CoV-2双抗体夹心模式免疫胶体金层析方法特异性高、稳定性好,操作简单、快捷,具备较好的快速诊断应用前景。
- 黄超张黎史凤娟迟莹刘静娴吴斌焦永军崔仑标温恬
- 关键词：新型冠状病毒胶体金免疫检测
- 一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒
- 本实用新型涉及一种II型志贺毒素时间分辨荧光免疫检测试剂盒，属于体外试剂诊断技术领域。试剂盒包括：盒体及盒盖，所述盒体内有一个中间板，中间板上设置一个包被有STXⅡ单克隆抗体的微孔板凹槽；水平设置六个STXⅡ参考标准品试...
- 温恬黄超曾晓燕史凤娟焦永军郭喜玲
- 文献传递
- 基于上转化发光免疫层析技术建立发热伴血小板减少综合征病毒总抗体快速检测方法被引量：7
- 2015年
- 目的基于上转化发光(UPT)免疫层析技术,建立发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)总抗体的现场快速检测方法。方法将SFTSV重组NP蛋白与上转化发光颗粒(UCP)偶联,制备UCP-NP免疫层析试纸条,评价该试纸条检测SFTSV总抗体的灵敏性、特异性和稳定性,并检测SFTSV血清254份,与酶联免疫法(ELISA)比较。结果该方法可在15min内完成SFTSV总抗体检测,可检测1∶500稀释度的SFTSV阳性血清,与其他出血热病毒无交叉反应,加样14d内稳定性较高。UPT免疫层析法与ELISA法检测临床血清样品一致性极高(Kappa=0.967),约登指数为0.973。结论建立了基于UPT免疫层析技术的SFTSV总抗体快速检测方法,该方法灵敏、特异,且操作简便、快速,结果稳定,适合在基层门诊和体检现场推广。
- 黄超张文帅张黎温恬史凤娟曾晓燕迟莹史智扬焦永军
- 关键词：灵敏度特异性
- 时间分辨荧光免疫分析法检测产志贺毒素大肠杆菌被引量：1
- 2016年
- 目的基于时间分辨荧光免疫分析技术,建立高灵敏性、高特异性的产志贺毒素II(StxⅡ)大肠杆菌(STEC)全自动超微量检测方法。方法以StxⅡ单克隆抗体S1D8包被96孔板,采用双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+标记StxⅡ单克隆抗体S2C4,以β-二酮体为主的增强液为发光增强系统。建立StxⅡ双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法,并其对特异性、检出限、健全性进行评估。结果建立以StxⅡ为靶标的时间分辨荧光免疫法检测STEC法,检出限为0.023μg/L,与产StxI的STEC无交叉反应;平均回收率为98.95%,批内、批间CV分别为3.5%和4.7%。该方法灵敏性和特异性分别为100.0%和97.4%,阳性预测值和阴性预测值各是92.6%和100.0%,误诊率和漏诊率则分别是2.6%和0,假阳性率和假阴性率分别是2.6%和0。TRFIA检测StxⅡ毒素的诊断符合率为98.1%;约登系数为0.974,Kappa检验u系数为0.95。结论 StxⅡ时间分辨荧光免疫分析法灵敏度高、稳定性好,具有很好的临床应用前景。
- 温恬黄超张艺曾晓燕史凤娟郭喜玲焦永军
- 关键词：时间分辨荧光免疫分析双抗体夹心法大肠杆菌
- I型志贺毒素时间分辨荧光免疫分析方法的建立被引量：2
- 2019年
- 目的构建基于时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)的高灵敏性、高特异性的I型志贺毒素(StxI)双抗体夹心免疫检测法,用于产志贺毒素大肠杆菌(STEC)感染的临床快速诊断。方法采用两株针对StxI不同表位的单克隆抗体2F6-F8和8E7-E6,构建双抗体夹心TRFIA,并评价该方法的灵敏度、特异性以及稳定性;以PCR检测stxI基因结果为金标准,以TRFIA、ELISA、Duopath~?Verotoxins免疫胶体金检测试剂盒,检测54例StxI毒素粗提物,比较灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值和与PCR法的一致性。结果建立的以StxI为靶向分子的TRFIA,可以在2h内完成对StxI检测,检测最大稀释倍数为1:1 000的StxI阳性菌株毒素粗提物样本,灵敏度比ELISA提高了约2个数量级。Stx I的TRFIA与StxII型无交叉反应,检测结果在1个月内仍保持较高稳定性。与PCR方法相比,TRFIA灵敏度(93.8%)高于ELISA(82.4%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(57.1%),差异有统计学意义(P<0.05);其特异性(100.0%)、阳性预测值(100.0%)、阴性预测值(97.4%)均大于等于ELISA(分别为97.2%、93.3%、92.1%)和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(分别为100.0%、100.0%、87.0%);TRFIA检测结果与PCR一致性(Kappa=0.955)高于ELISA(Kappa=0.809)法和Duopath~?Verotoxins免疫胶体金(Kappa=0.664)。结论成功构建StxI-TRFIA快速检测方法检测样品中StxI毒素,为TRFIA在毒素检测方面的推广应用提供了依据。
- 温恬黄超曾晓燕史凤娟郭喜玲焦永军
- 关键词：产志贺毒素大肠杆菌
- 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒非结构蛋白NSs的原核表达及初步鉴定
- 2015年
- 目的克隆、表达发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)非结构蛋白NSs,对其功能初步鉴定。方法采用PCR法扩增经密码子优化后的SFTSV NSs基因,并克隆至PGEX-4T-2载体中,构建原核表达载体PGEX-4T-2-NSs,经酶切、测序鉴定后转化表达菌BL21(DE3),再经诱导、纯化得到谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NSs融合蛋白,用Western Blot验证融合蛋白GST-NSs的抗原性。结果成功构建了GST-NSs融合蛋白原核表达载体,并在BL21细菌中获得高效表达;纯化后的融合蛋白具有良好的抗原性。结论实现了SFTSV重组NSs蛋白的原核高效表达,为进一步深入研究其结构与功能奠定了基础。
- 张文帅张黎温恬迟莹黄超曾晓燕焦永军
- 关键词：原核表达
- 甲型流感病毒实验室微环境监测研究
- 2023年
- 目的分析甲型流感病毒实验室微环境中的污染状况,为在微生物实验室内开展相关实验活动提供生物安全指导。方法对5所甲型流感病毒实验室内的关键设施设备及仪器进行细化采样;提取样本的核酸,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测甲型流感病毒的核酸;犬肾细胞(MDCK)培养方法检测核酸阳性样本中甲型流感病毒的活性。结果在1所甲型流感病毒实验检出甲型流感病毒核酸阳性率为3.50%(5/143),阳性位点为生物安全柜的台面操作区、生物安全柜挡风玻璃把手及冰箱内部,各核酸阳性率分别为6.25%(2/32),8.33%(1/12)及33.33%(2/6);将核酸阳性样本接种MDCK细胞的培养结果显示,核酸阳性样本均无感染活性。结论在实验室微环境的重点部位存在较高的病原体污染风险(如冰箱内部),提示实验人员应进一步增强生物安全意识,并在实验操作结束后用消毒剂彻底进行清场消毒工作。
- 刘静娴陈银史凤娟张丹温恬黄超迟莹焦永军崔仑标郭喜玲
- 关键词：生物安全甲型流感病毒核酸检测
