高招刚
- 作品数：10 被引量：13H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抗VEGF/VEGFR靶向肿瘤血管药物的研究进展被引量：10
- 2014年
- 研究表明,肿瘤的生长转移和新血管的生成有密切关系,其中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其信号途径在肿瘤血管生成中起关键作用。阻断该途径的任何环节均可有效抑制肿瘤血管的生成,进而抑制肿瘤的生长和转移。近年来,已有多种以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物投入临床应用,其中bevacizumab为第一个获批上市的抗肿瘤血管生成药物。继bevacizumab后,一种以基因工程手段获得的人Fc融合蛋白Zaltrap也成功在美国上市,这种杂交分子的药代动力学明显优于单克隆抗体,能更好的遏制肿瘤血管的发生并消退已形成的肿瘤血管。在肿瘤的临床治疗中,Zaltrap比bevacizumab显示出更大的优势。此外,VEGFC/D Trap及小分子酪氨酸激酶抑制剂也能有效抑制肿瘤血管的生成。在此对以VEGF/VEGFR为靶点的抗肿瘤血管生成药物进行综述。
- 李伊培郗永义张连成高丽华邵勇刘羽潘芸高招刚胡显文陈惠鹏张嵘
- 关键词：VEGF/VEGFR肿瘤血管生成抗肿瘤药物AFLIBERCEPT
- 融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用。本发明提供的融合蛋白，是如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列1自N末端第21-468位氨基酸残基组成的蛋白质；（b）由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（...
- 高丽华胡显文李伊培陈惠鹏王友亮邵勇高招刚潘芸刘羽
- 文献传递
- 重组人VEGF可溶性受体的表达纯化及结合性质初探被引量：2
- 2014年
- 目的:表达优化的血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体1(VEGFR1)胞外区第2个类免疫球蛋白结构域(VEGFR1D2)和VEGF受体2(VEGFR2)胞外区第3个类免疫球蛋白结构域(VEGFR2D3)与人IgG1 Fc片段的融合产物VEGF-Trap2,探讨该产物与人源VEGF165(hVEGF165)之间的亲和力。方法:将优化的目的基因VEGFR1D2/R2D3连接到真核表达载体pIRES2-EGFP-Fc中,转染CHO-K1细胞并筛选高表达目的蛋白VEGF-Trap2的细胞系,亲和纯化VEGF-Trap2蛋白,通过非竞争性ELISA及生物膜干涉技术检测VEGF-Trap2与hVEGF165之间的亲和力。结果:DNA测序表明真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2序列正确;获得表达VEGF-Trap2的细胞系;非竞争性ELISA实验中,VEGF-Trap2与hVEGF165功能性亲和常数达到1.86×107L/mol;生物膜干涉实验中,hVEGF165与VEGF-Trap2的平衡解离常数达到3.13×10-9mol/L。结论:构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF-Trap2并在CHO-K1细胞中稳定表达,重组蛋白VEGF-Trap2与hVEGF165有较高的亲和力,提示其可用于阻断VEGF信号传导途径,为该蛋白进一步的体外及体内实验奠定了基础。
- 李伊培高丽华张连成邵勇刘羽潘芸高招刚张嵘胡显文陈惠鹏
- 关键词：血管内皮细胞生长因子受体FC融合蛋白CHO-K1细胞
- 人尿激酶型纤溶酶原激活因子截短型突变体与绿色荧光蛋白在真核细胞HEK293F中的融合表达
- 2013年
- 目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)截短型突变体与绿色荧光蛋白(EGFP)分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达。方法:采用PCR法,分别以质粒pIRES2-EGFP和重组质粒pcDNA3.1(+)/uPA为模板,扩增出带BamHⅠ和XbaⅠ酶切位点的EGFP及带NheⅠ和HindⅢ酶切位点的uPA截短体基因片段,先后将EGFP和截短型uPA基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,转入HEK293F细胞,用G418对转染细胞进行加压筛选,通过共聚焦显微镜观察和ELISA方法鉴定表达产物。结果:DNA测序结果显示,uPA不同截短型突变体基因片段与EGFP基因融合的真核表达载体构建成功,共聚焦显微镜观察发现HEK293F细胞中有绿色荧光且定位于细胞质中,ELISA检测到HEK293F细胞培养上清中分泌型融合蛋白的表达。结论:构建了uPA截短型突变体与EGFP分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达,为后期研究uPA的相互作用蛋白及其生理功能奠定了基础。
- 张连成高丽华张昕潘芸高招刚李伊培胡显文陈惠鹏
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活因子绿色荧光蛋白真核表达融合蛋白
- 一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用
- 本发明公开了一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用。本发明提供了一种构建表达载体的方法，包括如下步骤：将出发载体pIRSE-EGFP-B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pI...
- 邵勇胡显文高招刚高丽华潘芸王友亮刘羽李伊培
- 文献传递
- hDll1^(ext)-Fc融合蛋白的表达纯化与初步鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的获得高效表达hDll1ext-Fc融合蛋白的细胞系以及具有生物学活性的目的蛋白。方法根据已知序列设计引物,并将hDll1ext基因片段经PCR扩增,酶切后连接至pIRES2-EGFP-Fc中,挑选阳性克隆测序,将正确的重组质粒转染至CHO-S细胞,筛选高表达细胞系,利用rProtein A亲和柱纯化目的蛋白,并通过检测Notch下游信号分子Hes1的表达及双荧光素酶报告基因实验检测蛋白活性。结果构建了pIRES2-EGFP-hDll1ext-Fc真核表达载体,并筛选了高效表达hDll1ext-Fc的CHO-S细胞系,纯化得到较高纯度的融合蛋白,配合生物活性检测实验显示,可溶性的hDll1ext-Fc能够激活Hes1报告基因,并且能上调Notch下游分子Hes1的表达,证明其能够激活Notch信号通路。结论在CHO-S细胞中成功表达了hDll1ext-Fc融合蛋白,为进一步研究Delta-like-1的生物学功能奠定重要基础。
- 潘芸高丽华邵勇王友亮高招刚段海峰胡显文
- 关键词：CHO细胞FC融合蛋白
- 基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用
- 近年来，随着临床治疗应用的单克隆抗体(mAb)的数量显着增加，其中特别是治疗癌症，自身免疫性疾病，过敏性疾病，移植和抗独特型疫苗等单克隆抗体。伴随着细胞培养技术的进步，特别是哺乳动物细胞培养技术的发展，提高了单克隆抗体和...
- 高招刚
- 关键词：动物细胞细胞培养蛋白表达细胞密度
- 文献传递
- 基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体的构建及应用
- 2014年
- 目的通过插入GS筛选系统和替换启动子改造载体以获得高效表达细胞系。方法将pIRES2-EGFP多克隆位点上的BamHⅠ位点突变,构建一个新的载体pIRES2-EGFP-B,通过AseⅠ和NheⅠ双酶切其上的巨细胞病毒(CMV)启动子,加入谷氨酰胺合成酶(GS)基因筛选标志,再通过PacⅠ和NheⅠ双酶切,插入人巨细胞病毒(hCMV)启动子,构建载体pHGS1.0。将目的基因分别插入载体pHGS1.0和pIRES2-EGFP中,通过比较重组蛋白TEM8(1-227)-VEGFR1domain2-IgG2(TV-IgG2)表达来分析新构建载体的优越性。结果成功插入GS筛选标志,并加入hCMV启动子,人免疫球蛋白定量试剂盒分析发现,重组蛋白表达量提高了5倍。结论通过GS系统筛选,得到高效表达目的蛋白载体系统,为后续的高效表达细胞系筛选奠定了基础。
- 高招刚邵勇高丽华潘芸刘羽李伊培胡显文陈惠鹏
- 关键词：谷氨酰胺合成酶甲氨喋呤重组蛋白质类
- 融合蛋白VT-GL-B3及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种融合蛋白VT‑GL‑B3及其编码基因和应用。本发明提供的融合蛋白，是如下（a）或（b）或（c）：（a）由序列1自N末端第21‑468位氨基酸残基组成的蛋白质；（b）由序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；（...
- 高丽华胡显文李伊培陈惠鹏王友亮邵勇高招刚潘芸刘羽
- 文献传递
- 一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用
- 本发明公开了一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用。本发明提供了一种构建表达载体的方法，包括如下步骤：将出发载体pIRSE‑EGFP‑B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pI...
- 邵勇胡显文高招刚高丽华潘芸王友亮刘羽李伊培
- 文献传递
