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颜仁和: 作品数：10 被引量：8H指数：2; 供职机构：南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点实验室开放基金广东省教育部产学研结合项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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慢病毒载体介导的外源基因在HEK-293T细胞中的稳定高效表达: 基因工程（gene engineering）诞生于20世纪70年代,是指在体外将不同来源的基因分子插入病毒、质粒或其他载体分子,构成遗传物质的新组合,然后将其导入到合适的宿主细胞内,从而使得外源基因在其中“安家落户”并能...; 颜仁和; 关键词：慢病毒载体; 文献传递

一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体: 本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。本发明筛选获得一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体；利...; 毛莹莹颜仁和李红卫万鹏飞仇珍珍陈泽典梁铁坤李堪贺马曼欣; 文献传递

慢病毒载体介导的外源基因在HEK-293T细胞中的高效稳定表达: 基因工程(gene engineering)诞生于20世纪70年代，是指在体外将不同来源的基因分子插入病毒、质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新组合，然后将其导入到合适的宿主细胞内，从而使得外源基因在其中“安家落户”并能...; 颜仁和; 关键词：E1基因慢病毒载体绿色荧光蛋白人胚肾细胞

人凝血因子Ⅶ重组腺病毒载体的构建及鉴定: 2015年; 目的构建表达人凝血因子Ⅶ(FⅦ)的重组腺病毒载体,利用腺病毒载体介导哺乳动物细胞表达重组人凝血因子Ⅶ(rh FⅦ)。方法利用Bam HⅠ和EcoRⅤ双酶切pc DNA 3.1-FⅦ载体得到FⅦ基因片段,补平后,插入经SalⅠ单酶切、补平并去磷酸化处理的加强型绿色荧光蛋白(GFP)表达盒的p Ad Track-CMV腺病毒穿梭载体,构建p Ad Track-CMV-FⅦ,继而进行酶切和测序鉴定;经PmeⅠ单酶切线性化后,p Ad Track-CMV-FⅦ在BJ5183感受态菌内与p Ad Easy-1腺病毒骨架发生同源重组,构建重组表达FⅦ的腺病毒质粒p Ad-FⅦ;经PacⅠ酶切后的p AdFⅦ,使用PEI试剂转染293A细胞,包装表达FⅦ的重组腺病毒Ad-FⅦ;利用Western印迹检测重组腺病毒Ad-FⅦ介导293A细胞表达FⅦ的蛋白水平;通过观察EGFP的表达来判断质粒转染及病毒感染细胞的效率。结果经酶切和测序鉴定,FⅦ克隆到p Ad Track-CMV腺病毒穿梭载体中,获得重组质粒p Ad Track-CMV-FⅦ;将其与p Ad Easy-1在细菌内发生同源重组,成功获得FⅦ重组腺病毒质粒p Ad-FⅦ;在293A细胞内包装重组腺病毒,Western印迹检测到FⅦ蛋白的表达。结论成功构建重组腺病毒Ad-FⅦ,并实现了rh FⅦ在哺乳动物细胞中的表达,为利用哺乳动物细胞表达rh FⅦ的研究奠定了基础。; 揭飞龙吕茂民王升尧颜仁和何悦李红卫章金刚; 关键词：重组腺病毒载体哺乳动物细胞蛋白表达

一种重组HEK‑293T细胞及其分泌寨卡病毒非结构蛋白1: 本发明涉及一种重组HEK‑293T细胞，其特征在于，该重组HEK‑293T细胞是以HEK‑293T细胞为宿主转染外源基因获得，其中所述的外源基因的核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明所述重组HEK‑293T细胞可...; 陈白虹张艳玲刘军李红卫顾为望李静静李青青仇珍珍颜仁和王升尧; 文献传递

一种重组HEK‑293T细胞及其分泌的抗寨卡病毒融合蛋白: 本发明涉及一种重组HEK‑293T细胞，其特征在于，该重组HEK‑293T细胞是以HEK‑293T细胞为宿主转染外源融合基因获得，其中所述的外源融合基因的核酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明所述重组HEK‑293...; 李红卫刘军顾为望李静静李青青仇珍珍颜仁和王升尧; 文献传递

一株表达SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体: 本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。本发明筛选获得一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体；利...; 毛莹莹颜仁和李红卫万鹏飞仇珍珍陈泽典梁铁坤李堪贺马曼欣; 文献传递

牛病毒性腹泻病毒E0基因重组慢病毒载体构建和鉴定被引量：4: 2015年; 为构建携带牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E0基因的重组慢病毒质粒,并检测其在HEK-293T细胞中的表达,本研究通过合成BVDV E0基因序列(AJ133739.1),构建包含Ig K信号肽的p ZJ-CMV-e GFP-Ig K-E0重组质粒和不含信号肽的p ZJ-CMV-e GFP-E0重组质粒,将其采用PEI方法分别转染HEK-293T细胞包装慢病毒,并浓缩后测定滴度,收集转染后上清液进行western blot检测蛋白表达。通过酶切、PCR及测序鉴定表明E0基因正确整合至慢病毒载体中,western blot结果表明其能够在HEK-293T细胞中表达。本研究构建获得携带BVDV E0基因的重组慢病毒,为BVDV E0蛋白哺乳动物细胞中的表达及其免疫原性研究奠定基础。; 刘军尹惠琼颜仁和王蕊李红卫章金刚魏建忠; 关键词：牛病毒性腹泻病毒慢病毒载体 E0基因

一种抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株的制备方法: 本发明涉及一种抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白杂交瘤细胞株的制备方法，该由方法由以下步骤组成：(1)哺乳细胞表达的重组猪流行性腹泻病毒S1蛋白与206佐剂1：1充分混合后注射BALB/c小鼠，5μg/只。分别在首免后14d和3...; 李红卫刘军仇珍珍梁文翰许明宇武望盛陈晃耀万鹏飞王升尧颜仁和; 文献传递

p38丝裂原激活蛋白激酶基因重组慢病毒载体的构建及其在建立人前列腺癌稳定细胞株中的应用被引量：3: 2012年; 目的构建p38丝裂原激活蛋白激酶基因(MAPK)重组慢病毒载体并建立表达外源性p38基因的人前列腺癌稳定细胞株。方法采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接等方法,将EGFP/p38融合基因插入慢病毒载体pTYF-EF1α-IRES-EGFP中,构建启动子EF1α调控的EGFP/p38共表达慢病毒载体pTYF-EF1α-EGFP/p38,经酶切鉴定后,利用慢病毒三质粒系统,通过脂质体法转染包装细胞HEK 293T细胞,收集病毒上清后转导人前列腺癌DU145细胞株,经有限稀释法筛选重组EGFP/p38稳定细胞株,用Western blotting检测细胞总p38的表达,用计数法绘制细胞的生长曲线。结果经酶切鉴定,成功构建EGFP/p38重组慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为4.7×106 TU/ml,利用此病毒悬液感染DU145细胞,成功筛选到EGFP/p38稳定表达细胞株,Western blotting显示该细胞株能稳定表达外源性EGFP/p38融合蛋白,这种过表达p38的细胞株的生长速度明显低于对照组。结论成功构建p38 MAPK重组慢病毒载体并建立了表达外源性p38 MAPK基因的稳定细胞株EGFP/p38-DU145,细胞内p38过表达能够抑制DU145细胞的增殖。; 荆玉明罗杰张艳玲陈三三万沛颜仁和王宏昌陈白虹谭万龙李红卫; 关键词：P38丝裂原激活蛋白激酶前列腺癌慢病毒

颜仁和

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