陈雪凤
- 作品数：8 被引量：33H指数：3
- 供职机构：华南农业大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学理学交通运输工程自动化与计算机技术更多>>
- 水稻基腐病菌flhDC和fliA基因的功能被引量：2
- 2016年
- 【目的】水稻细菌性基腐病(致病菌Dickeya zeae)是水稻重要细菌病害之一。细菌的鞭毛是重要的运动器官,迄今有关水稻基腐病菌的鞭毛系统、flh DC和fli A基因功能及其调控机理尚不清楚,明确这些鞭毛基因的功能,有利于进一步了解D.zeae的致病性综合调控网络、开发新型药物作用靶标以及制定病害防控策略。论文旨在明确D.zeae鞭毛系统中flh DC和fli A在致病性中的作用。【方法】以D.zeae野生型致病菌株EC1基因组DNA为模板,设计一系列引物,PCR扩增待敲除的目标基因flh DC和fli A各自的上、下游片段,再以混合的上、下游片段为模板,扩增得到缺失flh DC和fli A的融合片段,双酶切纯化后连接到自杀性载体p KNG101上,构建带有反向筛选标记基因sac B的自杀重组质粒p KNG-Δflh DC和p KNG-ΔfliA,通过三亲转化方法分别将重组质粒导入野生型菌株EC1中,通过两次等位基因同源重组,PCR检测和测序验证,最终获得目标基因flh DC和fli A缺失突变体Δflh DC和ΔfliA;测定并比较突变体与野生菌的胞外酶活性、毒素活性、运动性、生物膜形成能力,以及对水稻的致病力和对烟草的过敏性反应(HR);进一步提取细菌总RNA,以16Sr DNA为内参来校正目标基因的表达量,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)方法,比较野生菌和突变体Δflh DC和ΔfliA下游基因flh D、flh C、fli A和fli C的表达量差异。【结果】通过基因操作手段成功构建了基因缺失突变体Δflh DC和ΔfliA。表型测定结果显示,野生菌EC1的运动性和形成生物膜的能力很强,而基因缺失菌株Δflh DC和ΔfliA的运动性和形成生物膜的能力明显下降;野生菌株EC1对水稻种子萌发具有很强的抑制作用,而突变体Δflh DC和ΔfliA则显著降低了对水稻种子萌发的抑制作用;接种野生菌株EC1的水稻植株产生大面积褐色病斑,且腐烂程度严重,而接种突变体Δflh DC和ΔfliA的水稻植株只在接种
- 陈雪凤余成鹏刘琼光
- 关键词：运动性
- 香蕉细菌性软腐病菌的寄主范围及香蕉品种的抗性测定被引量：9
- 2013年
- 以分离获得的3个香蕉细菌性软腐病菌为接种菌株,采用针刺和注射等接种方法进行了香蕉细菌性软腐病菌寄主范围的鉴定,并对香蕉不同品种的抗性进行了测定.结果表明,在供试的15科22种植物中有21种植物可以被病原菌侵染而发病,表明该病原菌寄主范围广泛.对我国普遍栽种的7个香蕉品种的抗性测定结果表明,不同香蕉品种抗性存在差异,其中皇帝蕉为高抗品种;农科1号、大蕉和巴西蕉为中抗品种;而金粉、广粉和威廉斯B6为中感品种.
- 袁月陈雪凤李华平梁家杰刘琼光
- 关键词：香蕉细菌性软腐病寄主范围品种抗性
- 水稻基腐菌ExpS感受蛋白的结构域功能分析
- 水稻细菌性基腐病(Erwinia chrysanthemi pv.zeae,现更名为Dickeya zeae)是水稻上重要细菌病害之一,在我国及东南亚一些国家均有发生,不同年份在局部地区为害严重,对水稻产量造成极大影响。...
- 李艳嫦陈雪凤杨丽萍刘琼光
- 关键词：结构域毒素
- 水稻基腐病菌HrpX/HrpY在致病性中的功能分析被引量：7
- 2014年
- 【目的】由Dickeya zeae引起的水稻基腐病是水稻上重要细菌病害之一,迄今对该病原细菌的致病性调控研究尚不完善。论文旨在分析水稻基腐病菌(Dickeya zeae)双组分调控系统HrpX/HrpY的序列特征,研究该系统在水稻基腐细菌中的功能作用以及与下游基因的调控关系。【方法】对HrpX/HrpY序列进行生物信息学分析,构建带有反向筛选标记基因scaB的自杀重组质粒pKNG-ΔhrpX和pKNG-ΔhrpY,通过三亲转化方法分别将重组质粒导入野生型菌株EC1中,通过2次等位基因同源重组筛选获得基因缺失突变体ΔhrpX和ΔhrpY;比较突变体与野生菌的生长速率、胞外酶活性、毒素活性、运动性、菌膜形成能力,以及对水稻的致病性和对烟草的过敏性反应(HR);进一步提取细菌总RNA,采用实时荧光定量PCR研究HrpX/HrpY双组分系统对下游基因表达量的影响。【结果】水稻基腐病菌EC1基因组中,hrpX和hrpY均为单拷贝,hrpX编码区长1 473 bp,编码490个氨基酸,hrpY长642 bp,编码213个氨基酸,hrpX和hrpY两者之间相隔32 bp,具有相同的转录方向,在功能上具有相关性。其中,HrpX是一个结合在膜上的组氨酸蛋白激酶,HrpY是存在细胞质中的效应调节蛋白,HrpX/HrpY两者构成双组分系统,并对下游hrp基因的表达具有调控作用。进一步通过遗传操作手段,成功构建了基因缺失突变体ΔhrpX和ΔhrpY,表型测定结果表明,突变体ΔhrpX和ΔhrpY的运动性减弱、菌膜形成能力降低、对水稻种子萌发的抑制作用减弱,且降低了对水稻的致病力,但ΔhrpX和ΔhrpY的生长速率、胞外酶和毒素的活性变化不明显,也不影响其在烟草上的HR。实时荧光定量PCR结果显示,突变体菌株ΔhrpX和ΔhrpY相对野生菌EC1表达量明显下降的基因有hrpA、hrpF和hrpN,而对毒素合成基因zmsA表达量的差异不明显,HrpX/HrpY双组分系统对hrp基因簇中大部分下游基因都有正调控作用,且HrpY的调控作用
- 陈雪凤魏楚丹张庆刘琼光
- 关键词：运动性
- 柑橘溃疡病菌的药剂筛选及其抗药性分析
- 柑橘溃疡病(Xanthomonas axonopodis pv.citri,简称Xac)是柑橘生产上重要细菌病害,该病在我国一些柑橘产区均有发生,尤其以江西、广东、广西、湖南、福建等省(区)受害严重,影响柑橘产量和果品质...
- 陈雪凤雷艳宜叶凎丁钿魏楚丹曾冬根刘琼光
- 关键词：柑橘溃疡病菌药剂抗药性化学防治
- HrpX/HrpY对水稻基腐病菌致病性的影响
- 双组分系统(two-component system,简称TCS)是细菌中普遍存在和非常保守的一种重要调节机制,调控许多重要生物功能,研究植物病原细菌的双组分信号转导系统对于进一步弄清其致病性调控机理、寻找药物防治靶标具...
- 陈雪凤魏楚丹刘琼光
- 关键词：基因缺失同源重组
- 水稻基腐细菌的双组分系统ExpS/ExpA基因调控分析
- 水稻细菌性基腐病(Dickeya zeae,异名Erwinia chrysanthemi pv.zeae)是水稻上重要细菌病害之一.目前,对该病原细菌的致病性调控机理还不十分清楚.双组分调控系统(Two-componen...
- 李艳嫦魏楚丹陈雪凤刘琼光
- 关键词：致病基因RT-PCR
- 柑橘溃疡病菌的药剂筛选及抗药性分析被引量：16
- 2012年
- 柑橘溃疡病是柑橘生产上重要细菌病害,药剂防治是其主要的防治措施.本文通过平板抑菌圈试验,测定了来自广东和江西等地的21个柑橘溃疡病细菌对8种化学药剂的敏感性.结果表明:叶枯唑1 000×、新植霉素2 800×、水合霉素1 300×等3种药剂对供试的21个柑橘溃疡病菌菌株均没有抑菌作用;链霉素、中生菌素、溃疡克星、氢氧化铜.锌和必备等5种药剂对溃疡病菌表现不同程度的抑菌作用,其中,链霉素的抑菌作用最强;部分溃疡病菌株对这5种药剂产生了不同程度的抗药性.田间试验结果表明,链霉素、中生菌素对溃疡病防治效果较好.
- 陈雪凤雷艳宜叶凎丁钿曾冬根刘琼光
- 关键词：柑橘溃疡病菌药剂抗药性化学防治
