陈磊
- 作品数：27 被引量：250H指数：4
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项青岛市自然科学基金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学环境科学与工程轻工技术与工程更多>>
- 诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒
- 本发明涉及诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒。首次揭示一种通过协同检测五种miRNAs的表达情况来诊断肝癌、特别是早期肝癌的方法，本发明还提供了用于实施所述诊断的试剂。
- 王红阳陈磊李亮
- 人去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体制备及其初步应用被引量：2
- 2013年
- 目的制备人去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的小鼠单克隆抗体,并应用该抗体检测ASGPR在细胞系和组织中的表达。方法对ASGPR H1大亚基进行序列分析,选取ASGPR1全长序列制备免疫原。通过RT-PCR合成ASGPR1cDNA,构建ASGPR1表达重组载体,在E.coli BL21中表达后纯化,获得目的抗原。应用传统融合杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体,常规检测单抗亚类和效价,竞争抑制实验鉴定单抗特异性。用流式细胞术和免疫组织化学法分别检测ASGPR在多种肝源性与非肝源性细胞系以及多种肝组织中的表达。结果制备的单克隆抗体亚型为IgG1,效价达112 800。竞争抑制实验结果显示该单抗具有很好的ASGPR结合特异性,而且识别的肽段位于ASGPR胞外段。流式细胞术检测结果显示,ASGPR不同程度地表达于肝源性细胞系,但不表达于非肝源性细胞系。免疫组织化学检测结果显示,ASGPR专一性表达于正常肝组织和肝癌组织,在肝癌组织的表达与分化程度有关,高分化肝癌中的阳性率高于低分化肝癌(75.0%vs 28.6%,P<0.05)。结论成功制备高特异性人ASGPR小鼠单克隆抗体,适用于用流式细胞术和免疫组织化学法检测ASGPR表达,可用于临床病理鉴定原发性肝癌与转移性肝癌。
- 李军陈磊孙斌张妤钱海华殷正丰
- 关键词：去唾液酸糖蛋白受体单克隆抗体肝肿瘤流式细胞术免疫组织化学
- 寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的制备及其对自体癌细胞的杀伤活性
- 2013年
- 目的:建立一种新的寡克隆肝癌浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)分离培养方法,获得具有更强自体肝癌细胞杀伤活性的TIL。方法:以新鲜切除的人肝癌组织标本为材料,分别采用酶消化结合整块肝癌组织机械处理的传统方法和微小肝癌组织块培养的方法分离制备常规TIL和寡克隆TIL,培养2周后,将靶细胞毒活性较高的寡克隆TIL合并进一步培养扩增,采用MTT法分析不同寡克隆TIL对自体肝癌细胞的杀伤活性,比较不同寡克隆TIL之间、常规TIL和寡克隆TIL对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果:在含有IL-2的培养体系中,TIL可自行从微小肝癌组织块中逐渐浸润出来并增殖。各个寡克隆TIL对自体肝癌细胞均有一定的杀伤活性,但是不同寡克隆TIL对于自体肝癌细胞的细胞毒活性有明显差异(P<0.01),寡克隆肝癌TIL对于自体肝癌细胞的细胞毒活性明显高于常规肝癌TIL[(72.56±6.69)%vs(46.24±4.03)%,P<0.01]。结论:寡克隆TIL分离培养方法制备的寡克隆肝癌TIL较常规TIL具有更强的自体肝癌细胞杀伤活性。
- 张宗勤陈磊李鹏鹏张小峰孙斌钱海华施乐华殷正丰
- 关键词：肿瘤浸润淋巴细胞细胞毒活性
- 肝脏类器官研究进展与应用被引量：4
- 2021年
- 肝脏是人体重要的代谢器官,也是疾病高发器官。近年来,肝脏疾病发病率逐年上升,原发性肝癌已成为世界范围内癌症相关死亡的第二大病因。因此,深入了解肝脏生理机能,开发肝脏生理代谢及相关疾病致病机理研究的实验平台,寻找肝脏体外再生的新策略和方法,有望为肝脏疾病的发病机制研究、早期诊断和综合治疗提供新思路。该文主要围绕肝脏类器官的建立策略、主要应用和技术瓶颈等方面介绍肝脏类器官的最新研究进展,探讨其在解决肝脏研究领域若干重要科学问题的应用潜力。
- 王溢贤朱妍静王红阳陈磊
- 关键词：肝脏干细胞
- 肝内胆管癌中E-cadherin/P120的表达异常被引量：1
- 2006年
- 目的探讨肝内胆管癌中P120的表达特征及其与肿瘤临床病理特征和生存预后之间的关系。方法应用免疫组织化学EnVision方法对42例肝内胆管癌标本进行E-cadherin和P120抗体染色。结果E-cadherin和P120的表达减低率分别为64.3%(27/42)和73.8%(31/42)。E-cadherin和P120的表达均与肿瘤的组织学分级(分别为P=0.009和P=0.003)、TNM分期(分别为P=0.035和P=0.004)、肝内转移(分别为P=0.007和P=0.041)以及患者的生存预后(分别为P=0.024和P=0.004)之间存在显著相关。另外,P120的表达缺失与E-cadherin的表达缺失之间协调一致。Cox回归模型分析证实,只有P120和肿瘤大小是肝内胆管癌患者生存预后的独立预测因素。结论肝内胆管癌的发生发展中常发生E-cadherin和P120的表达下调,且与肝内胆管癌的发生发展有关。二者均是肿瘤侵袭和患者预后的有价值预测指标,但只有P120是肝内胆管癌患者生存预后的独立预测因素。
- 翟博鄢和新刘淑琴陈磊吴孟超王红阳
- 关键词：胆管肝内胆管肿瘤上皮钙黏附素P120
- 肿瘤相关肝星状细胞促进肝癌细胞上皮间质转化和迁移被引量：2
- 2013年
- 目的建立人肝癌组织中肿瘤相关肝星状细胞(tHSCs)分离、培养方法,探讨tHSCs对肝癌细胞生物学行为的影响。方法采用密度梯度离心法从新鲜切除的人肝癌组织样本中分离tHSCs锥虫蓝染色检测细胞活力,细胞免疫荧光鉴定活化tHSCs表达α-平滑肌肌动蛋白的特征,光镜观察培养的tHSCs形态学变化;tHSCs无血清培养后,收集条件培养液,分别与肝癌细胞系QGY-7701、BEL-7402、SMMC-7721共培养,并以肝星状细胞系LX-2做对照,采用MTT法、细胞划痕实验、蛋白质印迹等方法检测肝癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)相关指标的表达。结果从肝癌组织中分离的tHSCs活率在95%以上,纯度接近100%,在体外可进行传代培养与冻存。tHSCs能诱导3个受试肝癌细胞系产生典型的EMT样形态学变化及其分子标记物表达改变,表现为上皮标记物E-钙黏蛋白表达减少(P<0.05),间质标记物波形蛋白表达增加(P<0.05)。与此同时,tHSCs能促进培养的3个肝癌细胞系增殖和迁移。结论从人肝癌组织中分离的原代tHSCs活力和纯度高,可用于tHSCs的生物学功能实验研究。tHSCs在诱导肝癌细胞产生EMT样改变的同时,体外促进肝癌细胞的增殖和迁移。
- 孙斌陈磊刘振宇钱海华施乐华殷正丰
- 关键词：肝肿瘤肝星状细胞上皮间质转化细胞运动
- 淫羊藿素通过抗氧化损伤延缓CCl_4诱导的大鼠肝硬化进程被引量：14
- 2011年
- 目的探讨淫羊藿素延缓大鼠肝硬化进程的作用及可能机制。方法用不同浓度淫羊藿素处理经CCl4损伤的体外培养大鼠原代肝细胞,测定细胞培养液中ALT、AST和MDA浓度、细胞内SOD含量及凋亡细胞数量。建立CCl4诱导的大鼠肝硬化模型,用淫羊藿素处理后检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、GLB浓度,并观察大鼠肝组织病理学变化和胶原蛋白Ⅰ表达情况。结果 CCl4损伤可使原代大鼠肝细胞培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率升高,细胞内SOD活性降低。用淫羊藿素预处理后,其培养上清中ALT、AST活性和MDA含量以及细胞凋亡率均明显低于凋亡模型组和药物载体组,细胞内SOD活性则明显高于模型组和药物载体组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。体内研究结果显示,与模型组比较,淫羊藿素处理可降低肝硬化模型大鼠血清ALT、AST水平,改善肝功能指标(P<0.05)并减少胶原蛋白Ⅰ沉积,减轻肝硬化程度。结论淫羊藿素可能通过抗氧化损伤延缓CCl4诱导的肝纤维化向肝硬化发展的进程。
- 钱海华刘鹏李晶陈磊曹璐张瑞秀殷正丰
- 关键词：淫羊藿素肝损伤肝纤维化
- 诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒
- 本发明涉及诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒。首次揭示一种通过协同检测五种miRNAs的表达情况来诊断肝癌、特别是早期肝癌的方法，本发明还提供了用于实施所述诊断的试剂。
- 王红阳陈磊李亮
- 文献传递
- MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖被引量：3
- 2015年
- 目的观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响。方法利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到Ep CAM(CD326)阳性以及阴性的细胞。对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real-time PCR法检测其干预效果。利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线。分别利用干扰miR-429的Ep CAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的Ep CAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况。结果干扰miR-429的表达能降低Ep CAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使Ep CAM阴性肝癌细胞转化为Ep CAM阳性细胞。过表达miR-429可增强Ep CAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低Ep CAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长。与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-429能够在体外、体内水平影响Ep CAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能。
- 吕桂帅李亮陈昕杨文方田余艳婷陈磊王红阳
- 关键词：肝细胞癌细胞分化巨噬细胞
- LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物
- 本发明涉及LTA4H作为指示肝内结节及早期预警肝癌的生物标志物。具体而言，本发明提供下述试剂在制备用于诊断对象的肝内结节或诊断对象是否处于肝炎向肝癌恶性转化临界阶段的试剂盒中的应用：(1)与LTA4H特异性结合的试剂；(...
- 王红阳陈磊陈洛南曾嵘杨应成李辰李美仪刘伟鑫
- 文献传递
