陈冠军
- 作品数：17 被引量：51H指数：4
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- 内质网应激介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特的干预机制初探
- 2014年
- 目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特(fenofibrate,FF)的干预机制。方法♂SD大鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高脂饮食组(HFD)及治疗组(HFD+FF)。高脂组和治疗组先分别给予高脂饮食20周,高脂组继续给予高脂饮食8周,治疗组给予非诺贝特(30 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周。分析大鼠胰岛素抵抗的改善作用、骨骼肌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达。将骨骼肌细胞C2C12分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、阳性对照药组(衣霉素组,TM)、治疗组(棕榈酸+非诺贝特酸,PA+FA),分别检测GRP78、CHOP、Akt和pAkt的表达。结果与SCD组相比,HFD组大鼠体重和血脂水平明显增高,出现明显的胰岛素抵抗,GRP78和CHOP基因表达水平均明显上调;与HFD组相比,HFD+FF组上述指标均出现明显改善。与NC组相比,PA组GRP78和CHOP基因表达明显增加,p-Akt明显下调;与PA组相比,PA+FA组GRP78和CHOP基因表达明显降低,p-Akt明显上调。结论非诺贝特有改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用,这可能与其降低ERS中CHOP和GRP78的表达有关。
- 鲍莹莹鲁云霞陈冠军程静静章秋
- 关键词：内质网应激高脂棕榈酸非诺贝特
- RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系LO2中ERK信号通路的影响
- 2012年
- 目的制备人视黄醇结合蛋白4(RBP4)分子RNAi载体,检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响。方法分别构建针对RBP4基因表达框5'端和3'端的干涉载体及真核表达载体,经测序和酶切鉴定后将载体转染LO2,RT-PCR和Western blot法确定其干涉RBP4表达的效率,选择干涉较高的载体用于后续实验;Western blot检测ERK1/2的表达及磷酸化水平的改变,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖的残留量。结果构建的真核表达载体和干涉载体经酶切、测序鉴定结果正确,并有明显的高表达或干涉效果。Western blot结果表明ERK1/2的表达量无明显变化,RBP4高表达组其磷酸化显著下降,RBP4干涉组其磷酸化显著上升。胰岛素刺激后RBP4高表达组的葡萄糖摄取明显下降,RBP4干涉组的葡萄糖摄取明显增加。结论成功制备RBP4基因的干涉载体并应用于LO2细胞中ERK1/2通路的研究,为后续RBP4的进一步功能研究奠定基础。
- 陈冠军陈利春钱磊陈莉陈兵鲁云霞
- 关键词：视黄醇结合蛋白4RNA干涉葡萄糖摄取
- 豹皮樟总黄酮对实验性2型糖尿病大鼠胰腺的保护作用及部分机制研究被引量：4
- 2014年
- 目的研究豹皮樟总黄酮(TFLC,Total Flavonoids of Litsea Coreana)对实验性2型糖尿病SD大鼠胰腺的保护作用及部分机制。方法以本实验室改良的方法建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠分为模型组和治疗组,治疗组分别采用小剂量TFLC(STFLC)和大剂量TFLC(LTFLC)治疗6周。取胰腺组织作胰岛素的免疫组化、氧化应激指标(GSH、T-SOD、Mn-SOD和T-AOC)和PTP1B的蛋白表达分析。结果 TFLC治疗组胰岛面积显著增加,胰腺的氧化应激明显减轻,胰腺中PTP1B的蛋白表达显著降低,且有一定的剂量效应。结论 TFLC具有明显的保护胰岛作用,其机制可能与减少胰腺中的氧化应激和PTP1B蛋白表达有关,且表现为一定的剂量效应。
- 周卫凤汪凌云孙玉秀鲁云霞陈冠军
- 关键词：豹皮樟总黄酮2型糖尿病胰腺PTP1B
- 人视黄醇结合蛋白4 cDNA全长的克隆、表达和纯化被引量：4
- 2010年
- 目的构建人视黄醇结合蛋白4(RBP4)cDNA全长的原核表达质粒(pET-28a(+)-hRBP4)并在大肠杆菌中高效表达。方法取成人正常肝脏组织提取总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-RBP4,设计带酶切位点BamHⅠ和HindⅢ的引物,PCR后酶切插入pET-28a(+)中,转化BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对rhRBP4诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化;用镍亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定其纯度。结果测序证实所得的hRBP4 cDNA序列与其在GenBank中的序列基本一致,重组质粒pET-28a(+)-RBP4的双酶切结果与预期大小完全一致,IPTG诱导后高效表达的蛋白质以不溶性包涵体形式存在;Western blot结果证实表达产物为RBP4。IPTG诱导的最佳浓度是0.04mmol/L,时间为6h,温度为37℃,镍亲和层析后经电泳证实其纯度可达96%。结论经诱导表达和纯化的rhRBP4可用于制备抗体和进一步研究。
- 孙玉秀陈利春汪凌云陈兵陈冠军鲁云霞
- 关键词：视黄醇结合蛋白质类
- RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系LO2中ERK信号通路的影响
- 陈冠军鲁云霞钱磊陈莉陈兵
- 人肝细胞核因子-1β基因cDNA全长的克隆与表达
- 2011年
- 目的构建人肝细胞核因子-1β(hHNF-1β)基因cD-NA全长的原核表达质粒[pET-28a(+)-hHNF-1β]并在大肠杆菌(E.Coli)中高效表达。方法提取正常成人肝脏组织的总RNA,RT-PCR后的扩增产物回收,构建克隆载体pMD-HNF-1β,设计带酶切位点BamHⅠ和HindⅢ的引物,PCR后酶切连入pET-28a(+)中,转化DE3,测序后IPTG诱导表达,Western blot检测其特异表达,并对重组hHNF-1β(rhH-NF-1β)诱导表达时IPTG的浓度、时间和温度等条件进行了优化。结果测序证实所得的hHNF-1βcDNA序列与其在GenBank中的序列一致,重组质粒pET-28a(+)-hHNF-1β的双酶切结果与预期大小完全一致。IPTG诱导的最佳浓度是0.04 mmol/L,时间为6 h,温度为37℃。结论成功克隆和构建了hHNF-1β基因的原核表达载体并对诱导表达的条件进行了优化,为进一步的功能分析奠定基础。
- 陈冠军汪凌云钱磊徐少聪杨坤常玲陈兵鲁云霞
- 关键词：包涵体
- 人肝细胞核因子-1β基因cDNA全长的克隆与表达
- 鲁云霞陈冠军汪凌云钱磊陈兵章秋
- 雌激素治疗保护去卵巢对血管内皮细胞损伤的初步机制被引量：2
- 2016年
- 目的探讨雌激素治疗对去卵巢大鼠胸主动脉内皮与雌激素缺乏的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的初步机制。方法将30只雌性SD大鼠随机分为假手术对照(SHAM)组、去卵巢(OVX)组、去卵巢+雌激素治疗[OVX+EST,0.06 mg/(kg·d)雌二醇)组,6个月后观察血管内皮的病理学变化,血管环张力实验检测血管舒张差异,RT-PCR及Western blot法分析葡萄糖调节蛋白(GRP)78、C/EBP同源蛋白(CHOP)表达的改变。将HUVEC分为正常对照(CON)组、正常+衣霉素对照(TM)组、雌激素缺乏(ES-D)组、雌激素缺乏+梯度浓度雌激素治疗(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)mol/L雌二醇)组,检测氧化应激及内质网应激指标的变化。结果OVX组大鼠体重增加,胸主动脉内皮出现损伤及脂质沉积,GRP78、CHOP的mRNA与蛋白表达水平上调;OVX+EST组上述指标均显著逆转。HUVEC中ES-D组表现出活性氧簇升高及GRP78、CHOP的表达升高,补充不同浓度雌激素后上述指标均下降,且表现出一定的剂量效应。结论雌激素缺乏可介导大鼠胸主动脉内皮损伤及HUVEC出现氧化应激和内质网应激,补充雌激素后可逆转此效应。
- 李朝飞陈冠军朱小欢朱致祥章秋鲁云霞
- 关键词：雌激素缺乏雌激素治疗内质网应激血管内皮
- RBP4分子RNAi载体的制备及对人肝细胞系L02中ERK信号通路的影响
- 目的制备人视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)分子RNAi载体,检测其干涉人肝细胞系LO2中RBP4的表达后对ERK1/2表达及磷酸化和葡萄糖摄取的影响。方法分别构建针对RBP...
- 陈冠军鲁云霞钱磊陈莉陈兵
- 文献传递
- LC-MS法测定塞来昔布中2个苯肼类基因毒性杂质被引量：5
- 2021年
- 目的:建立液相色谱-质谱(LC-MS)法测定塞来昔布中对肼基苯磺酰胺(SHH)和对甲苯腙基苯磺酰胺(MAP) 2个苯肼类基因毒性杂质。方法:采用Thermo BDS Hypersil C18(100 mm×4.6 mm,2.4μm)色谱柱,以0.1%甲酸铵-0.1%甲酸水溶液∶甲醇(90∶10)溶液为流动相A,以甲醇为流动相B进行线性梯度洗脱。样品中加入5%二巯基苏糖醇的醋酸铵缓冲液作为稳定剂,在质谱电喷雾正离子化多反应监测模式下,以内标法进行定量测定。结果:SHH和MAP在20~200 ng·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好;平均回收率分别为99.7%(RSD=6.0%,n=9)和97.6%(RSD=5.1%,n=9)。检测限为10 ng·mL^(-1),定量限为20 ng·mL^(-1),对照溶液和供试品溶液于4℃进样盘放置4 h内稳定。结论:本实验建立的LC-MS测定法适用于塞来昔布中SHH和MAP 2个苯肼类基因毒性杂质的检测。
- 冯蕊陈冠军刘莉刘莉
- 关键词：塞来昔布
