- 构建植物病毒弱病毒株的方法
- 本发明公开了一种构建植物病毒弱病毒株的方法。步骤如下：1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列，设计PCR引物，进行RT-PCR扩增，获得卫星RNA的cDNA，将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上，然后进行测序，确定其序...
- 陈集双竺锡武金波廖乾生商晗武陈海敏
- 文献传递
- 两株黄瓜花叶病毒卫星RNA的竞争与共存研究被引量：4
- 2005年
- 通过体外转录方法 ,将大小分别为 36 9nt和 385nt的 2个黄瓜花叶病毒 (Cucumbermosaicvirus,CMV)的卫星RNAYi和Yns共同与不含卫星的辅助病毒株CMV_CNa进行假重组 ,接种CMV系统寄主心叶烟。结果表明 :在接种5d的接种叶上同时检测到卫星RNA_Yi和卫星RNA_Yns;在系统叶上 ,接种 5d和 10d亦可同时检测到 2株卫星 ;但接种 15d ,在系统叶组织中只检测到卫星RNA_Yi。再将接种 5d的接种叶扩大接种到几种不同的指示植物后 ,经dsRNA抽提 ,也只获得 1条与卫星RNA_Yi大小相符的条带。通过假重组病毒株中分别获得卫星RNA并测序 ,确定2个卫星RNA的序列没有变化。卫星RNA_Yns和Yi在辅助病毒CMV_CNa作用下 ,表现出明显的竞争性 ,它们在辅助病毒中不能形成稳定的共存关系。
- 金波陈集双
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA
- 卫星RNA SatC382对辅助病毒的影响被引量：2
- 2005年
- 通过体外转录将黄瓜花叶病毒(CMV)卫星RNASatC382与不带卫星的黄瓜花叶病毒CNa株系进行假重组,获取带卫星的CMV重组株(CNa -SatC382)。经dsRNA提取及RT PCR检测,证实CNa和SatC382在假重组株中能稳定共存。测定CNa和CNa -SatC382的14种寄主生物学反应,并统计两者接种昆诺藜、假酸浆、心叶烟、西葫芦7、14、21、28d的病情指数,结果显示:带卫星和不带卫星的CMV在各供试寄主上表现的症状差别不明显,病情指数也无显著差异。由此推测卫星RNASatC382没有改变辅助病毒CMV -CNa株系对寄主症状的影响。
- 覃玥陈集双金波
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA生物学性状
- 添加卫星RNA对黄瓜花叶病毒寄主反应及其在系统寄主中含量的影响被引量：2
- 2006年
- 为了解卫星RNA(satRNA)对辅助病毒在系统寄主中的直接影响,将1株黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic virus,CMV)的卫星RNA(satRNA)sat-Yi与本身不携带卫星RNA的CMV分离物CNa在体外进行假重组,获得了人工构建的假重组毒株CMV-NY。通过寄主反应测定、双链RNA分析和全序列分析,显示satYi与CMV-CNa基因组RNA能够稳定共存,经过反复转接也没有发现卫星RNA的序列突变。通过测定CMV-CNa和NY这2个病毒株的寄主反应,发现satRNA-Yi的存在明显延迟了CNa在所有供试寄主中的发病时间,而且明显减弱了其在多数供试寄主上的症状表现,其中在葫芦科植物上表现出减轻症状的效果最明显;用一种新建的核酸玻片杂交方法,定量测定寄主植物中CMV基因组CP基因及卫星RNA的相对含量变化,结果显示:26℃条件下,在接种5、10、15、20、25和30d的心叶烟中,2个毒株的CP基因含量都呈下降趋势,在相应的时间内,NY-CP基因在同一寄主中的含量均低于CNa-CP基因的含量;接种10d,NY与CNa的寄主适应性没有显著差异,二者基因组CP基因在6种寄主植物中的相对含量均为番茄>假酸浆>心叶烟>西葫芦>南瓜>曼陀罗。由此得出以下结论:sat-Yi降低了CMV CP基因在寄主中的含量,且随着接种时间的增加,卫星RNA的影响作用越明显;sat-Yi不改变CMV基因组RNA的寄主适应性,但是通过降低CP基因含量改变其症状特征。
- 陈集双金波覃玥杜志游陈绍宁柴立红陈子元
- 关键词：黄瓜花叶病毒卫星RNA相互作用
- 食用菌中的dsRNA病毒检测及其基因组研究
- 食用菌在我国的栽培历史悠久,在世界许多国家也有广泛的栽培。随着大规模生产的发展,病害问题受到人们的关注。由于真菌病毒粒子在食用菌的子实体和菌丝体中以潜伏状态存在,症状不易辨认,对经济真菌的生产造成了很大的危害。自1950...
- 金波陈集双杜志游陈新爱
- 文献传递
- 2株黄瓜花叶病毒卫星RNA的cDNA克隆及序列分析被引量：4
- 2005年
- 在辣椒上获得2株黄瓜花叶病毒卫星RNA(CS1和CS2), 通过cDNA克隆和测序并将其与35个已知的卫星RNA序列进行同源比较.结果表明,CS1和CS2的全长序列分别为336,382 nt;与CS2、Rs和 Yns比较,CS1从第80位起有连续30多个核苷酸的缺失.由此推测,卫星RNA的二级结构也随这些核苷酸的缺失而发生了改变.将 CMV卫星RNA分为4个组,卫星RNA CS1属于中小卫星组小卫星亚组Ⅱ,CS2属于长卫星组,CS1与其他来源的卫星RNA的同源性为80.4%～93.7 %,CS2与其他来源的卫星RNA的同源性则为75%～94.8%;两者之间的序列同源性为86%.CMV卫星RNA的序列同源性和分组与卫星RNA分布的地区和寄主来源并无直接联系.
- 覃玥陈集双金波廖乾生
- 关键词：CMVCDNA克隆黄瓜花叶病毒同源性
- 构建植物病毒弱病毒株的方法
- 本发明公开了一种构建植物病毒弱病毒株的方法。步骤如下：1)根据植物病毒卫星RNA两端保守序列，设计PCR引物，进行RT－PCR扩增，获得卫星RNA的cDNA，将全长卫星RNA的cDNA构建到质粒上，然后进行测序，确定其序...
- 陈集双竺锡武金波廖乾生商晗武陈海敏
- 文献传递
- 黄瓜花叶病毒卫星RNA人工突变体的构建及其侵染性测定
- 2005年
- 从1个369nt的黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)卫星RNA的cDNA出发,采用DNA改组技术构建人工突变体,经过体外转录,将其与不携带卫星RNA的黄瓜花叶病毒株进行假重组,鉴定突变体的生物活性,结果显示所获得的4个卫星RNA的点突变子MS1、MS5、MS6和MS11中,只有MS11仍然具有复制能力;而其他3个点突变子,尽管均只有1个位点的替换,却不能在辅助病毒作用下复制。序列比较分析发现MS11的突变位点位于卫星RNA变异区内,发生的突变与自发突变一致,其他3个突变子的突变位点发生在卫星RNA的高度保守区。而且通过侵染性试验证实突变子MS11与野生型Yi没有明显的差异。由此可推测卫星RNA序列中的高度保守区与卫星RNA的生物活性密切相关,个别碱基的突变会导致RNA二级结构的改变,进而引起其复制能力或稳定性的完全丧失。
- 金波陈集双张华荣
