郭志霞
- 作品数：12 被引量：29H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组人尿型纤溶酶原激活剂中试产品的肽图分析被引量：1
- 2000年
- 目的 :证明重组人尿型纤溶酶原激活剂 (recombinanthumanurinarytypeplasminogenactivator,rhu PA)中试规模 3批产品在结构上的同一性 ,建立生物工程产品质量控制的一项指标。方法 :rhu PA 3批中试产品在非还原条件下经胰蛋白酶水解以后 ,进行RP HPLC肽图分析。结果 :rhu PA 3批中试产品的肽图完全一致 ,且检出峰数目与理论推测值相符。结论 :3批产品肽图一致性为rhu PA产品的结构同一性提供了有利证据 ,并建立了rhu PA产品质量控制的一项指标。
- 王菲龙应国胥照平张正光郭志霞胡显文肖成祖
- 关键词：中试生产
- 用国产径向色谱柱和羟基磷灰石纯化细胞工程尿激酶原被引量：6
- 1997年
- ＣＨＯ工程细胞培养液经离心去掉细胞碎片后，经ＣＭ径向离子交换柱纯化，尿激酶原比活性提高４４．３倍，产率达８７．７％。洗脱峰再经Ｗ６５０Ｅ羟基磷灰石柱纯化，其比活性又提高２．３倍，达４０９２０．７ＩＵ／ｍｇ蛋白，产率８６．０％。该产品再经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００高效凝胶色谱纯化，得到含少量尿激酶的尿激酶原。最后再用对氨基苯甲脒Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和色谱柱除去少量双链尿激酶，得到纯的单链尿激酶原电泳一条带，相对分子质量为５２×１０３ｕ。
- 张正光肖成祖郭志霞高丽华黄子才艾析刘高艳
- 关键词：尿激酶色谱法羟基磷灰石
- 动物细胞微载体灌流培养技术的研究和应用被引量：1
- 2000年
- 随着基因工程的发展,人们逐渐认识到有许多基因产物不能在原核细胞内表达,它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰,以及正确的切割,折叠后,才能形成与自然分子一样的功能和抗原性。这就使动物细胞一跃成为一种重要的宿主细胞,用以生产各种各样的重要的生物制品,包括有疫苗(如乙肝疫苗、狂犬病疫苗。
- 肖成祖陈昭烈黄子才胡显文周鹤山王佃亮高丽华刘红郭志霞
- 多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-PA被引量：19
- 2000年
- 在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u PA)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,细胞密度可维持在 (1 3～ 2 6 )× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 90 %以上。在7 5L搅拌罐中培养细胞 ,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术 ,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响 ,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在 6 7d连续换液培养中 ,细胞最高密度为 2 6 4× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 95 %以上。与稳压操作相比 ,利用周期变压刺激技术可提高产量 10 %～ 2 0 % ,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率 ,利用 4步纯化工艺 ,从含u PA约 135g的 2 10 0L上清中获得约 80 gu PA(单链比例约为 90 % )。
- 胡显文肖成祖李佐虎郭志霞高丽华张正光胥照平王菲
- 关键词：动物细胞培养U-PARCHO细胞
- 用国产微孔玻璃珠初步纯化人u-PA
- 1999年
- 用国产微孔玻璃珠从ＣＤ－１工程细胞株培养上清中纯化ｕ－ＰＡ，摸索了微孔玻璃珠结合ｕ－ＰＡ的条件和洗脱方法，比较了硫酸铵线性梯度洗脱或２５％乙二醇洗脱ｕ－ＰＡ活性的结果，最后确定洗脱的条件为０．２５ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ、１～２ｍｏｌ／Ｌ（ＮＨ４）２ＳＯ４、ｐＨ９．３。经此一步纯化，ｕ－ＰＡ比活性达到１５３２９ＩＵ／ｍｇ，回收率７８％，还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分子量为５２×１０３的单链ｕ－ＰＡ占７４％。
- 郭志霞叶建新张正光高丽华黄子才肖成祖
- 关键词：尿激酶型纤溶酶原激活剂纯化
- 重组人尿型纤溶酶原激活剂的冻干及其稳定性观察
- 1999年
- 由血栓引起的心血管系统疾病严重威胁着人类健康，临床上急需一种溶栓效果好、副作用小的药物。尿型纤溶酶原激活剂（ｕ－ＰＡ）作为一种有前景的溶栓药物已受到国内外普遍重视，我所构建的表达重组人ｕ－ＰＡ的ＣＨＯ工程细胞（ＣＬ－１１Ｇ株）培养上清经纯化可获得含约...
- 郭志霞肖成祖张正光于芳孙彦洵胥照平
- 关键词：U-PA纤溶酶原激活剂冻干稳定性
- Streamline SP扩张柱层析在重组人尿型纤溶酶原激活剂中试生产中的应用被引量：1
- 2001年
- 王菲胡显文张正光郭志霞孙彦洵胥照平肖成祖
- 关键词：中试生产
- 重组人糖基化尿型纤溶酶原激活剂中试产品抗原特异性的分析
- 2000年
- 尿型纤溶酶原激活剂 (u PA)是新一代的基因工程溶栓药物。建立了重组人糖基化尿型纤溶酶原激活剂的中试生产工艺。中试产品的结构正确性和一致性分析是证明产品质量的重要依据 ,所以 ,对三批产品进行了抗原特异性分析。结果 ,u PA三批中试产品SDS PAGE显示的蛋白区带与免疫印迹显示的免疫活性区带没有批次差别 ,说明u PA三批中试产品表现了一致的u
- 郭志霞王菲胥照平张正光胡显文肖成祖
- 关键词：U-PA免疫原性免疫印迹溶栓药物
- 通过加速贮存试验估算u-PA产品在不同温度时的贮存寿命被引量：4
- 1999年
- 通过在 6 0℃、70℃、80℃的加速贮存试验 (MIS)观察了 u- PA冻干产品的热稳定性 ,并对其活性的热降解速度和不同温度时贮存寿命进行了估算。在 3 7℃ ,2 5℃ ,4℃ ,0℃贮存时 ,活性单位损失 5 0 %所需的时间为 1 73 d、2 .78a,70 .8a,1 1 8a:活性单位损失 1 0 %需的时间分别为 2 0 d、1 0 0 d、7.6 4 a、1 1 a。
- 郭志霞肖成祖张正光于芳孙彦洵胥照平
- 关键词：U-PA
- 重组人尿激酶型纤溶酶原激活剂的冻干及活性贮存时间估计被引量：1
- 1999年
- 研究重组人尿激酶型纤溶酶原激活剂 ( u- PA)的冻干工艺 ,并对冻干产品的稳定性进行了观察。产品放置在 - 70℃和 4℃一年 ,活性和纯度未见明显变化。同时 ,通过在 80℃、70℃和 60℃的加速贮存试验 ( MIS) ,观察了 u- PA冻干产品的热稳定性 ,并对其活性的热降解速度和贮存寿命进行了估算。结果在 37℃、2 5℃、4℃和 0℃贮存时 ,活性单位损失 5 0 %所需时间分别为 1 73天、2 .78年、70 .8年和 1 1 8年 ;活性损失 1 0 %所需时间分别为 2 0天、1 0 0天、7.6年和 1 1年。说明 u- PA经冷冻干燥后保存 。
- 郭志霞肖成祖张正光于芳孙彦洵胥照平
- 关键词：U-PA
