郭广君
- 作品数：92 被引量：180H指数：7
- 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金现代农业产业技术体山东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金系建设专项资金山东省自主创新成果转化重大专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 禽呼肠病毒套式RT-PCR检测方法的建立被引量：6
- 2011年
- 根据GenBank中登录的禽呼肠病毒(ARV)基因组序列,设计合成了2对引物,外部引物的扩增片段大小为478 bp,内部引物的扩增片段大小为247 bp,建立了适合ARV快速检测的套式RT-PCR方法(RT-nested-PCR)。采用该方法对REV毒株进行了检测,均能扩增到247 bp的条带,而禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性腔上囊病病毒、减蛋综合征病毒、禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生病病毒、马立克病病毒和鸭瘟病毒的扩增结果均为阴性。该方法第1次扩增的敏感性是100 pg,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高105倍。该检测方法表明,所建立的逆转录套式RT-PCR方法比普通RT-PCR方法敏感性高,具有重复性好、特异性强、敏感性高等优点,可用于禽呼肠病毒的临床诊断、病料检测和分子流行病学调查等。
- 毕研丽王金良郭广君杨慧吕素芳宋峰苗立中沈志强
- 关键词：禽呼肠孤病毒
- 猪大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因的克隆及序列分析
- β-半乳糖苷酶基因常作为报告基因用于基因工程研究的各个方面，本试验的目的是扩增得到β-半乳糖苷酶基因的全序列，为构建重组载体提供条件。方法为筛选高效表达β-半乳糖苷酶的大肠杆菌菌株，提取大肠杆菌DNA，根据Ceneban...
- 郭广君吕素芳管宇沈志强沈旭
- 关键词：大肠杆菌聚合酶链式反应
- 文献传递
- 副猪嗜血杆菌Shandong2007株的分离与鉴定被引量：9
- 2007年
- 对1例临床症状、病理剖检变化疑似副猪嗜血杆菌病的仔猪病料进行实验室诊断,进行了细菌形态观察、培养特性和生化特性等鉴定,根据副猪嗜血杆菌的16 S rRNA基因设计特异性引物进行PCR扩增,将822 bp片段连入T-载体后测序,再通过GenBank进行比对分析。生化试验结果为接触酶阳性,氧化酶和H2S阴性;生长需要NAD,发酵果糖、半乳糖和蔗糖等,不分解D-甘露醇和D-山梨醇。药敏试验显示,对氨苄青霉素、丁胺卡那霉素等药物敏感。PCR鉴定结果与国外副猪嗜血杆菌菌株16 SrRNA序列的同源性为99%以上,初步鉴定该分离菌株为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)。
- 吕素芳郭广君沈志强李峰刘吉山陈继春
- 关键词：副猪嗜血杆菌药敏试验
- 伪狂犬病病毒疫苗株SA738侵染BHK-21细胞诱导其凋亡及Caspase3表达情况分析被引量：2
- 2017年
- 旨在深入了解猪伪狂犬病病毒疫苗株PRV SA738侵染BHK-21细胞后,诱导细胞凋亡,细胞凋亡的时间及相关细胞凋亡因子表达情况。通过测定传统疫苗毒株Bartha-K61株和实验室人工筛选的gI-/gE-/PRV SA738病毒株滴度,分别利用2株疫苗毒株侵染BHK-21,采用原位双荧光染色法检测细胞凋亡,用分光光度法测定细胞凋亡因子Caspase-3表达情况。结果表明,低剂量gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株均延迟侵染细胞的凋亡。缺失疫苗毒株gI-/gE-/PRV SA738延迟侵染细胞的凋亡时间比Bartha-K61疫苗毒株时间长,但侵染细胞增殖速度下降。细胞凋亡后期最终细胞死亡,正常细胞细胞死亡后无凋亡小体。gI-/gE-/PRV SA738疫苗毒株和Bartha-K61疫苗毒株侵染细胞凋亡后期凋亡小体形成,并检测到膜结构。在病毒侵染早期细胞内关键凋亡细胞因子Caspase3表现为上调。Caspase-3参与了病毒侵染过程中细胞凋亡的调控。
- 郭广君吕素芳魏凤魏凤李峰肖跃强李峰
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 基于US区缺失位点猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别诊断方法的建立
- 2011年
- 依据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒全基因组序列,针对gI、gE、28K、TK四个基因序列,设计、合成了5条引物,并对野毒株SA株、gI-/gE-/PRVSA双基因缺失株和Bartha K61疫苗株进行了扩增,得到2061bp、1323bp、801bp和963bp特异性目的条带,其中BarthaK61疫苗株基因组检测最小浓度为136pg/μL。建立了针对野毒株和两种疫苗株的鉴别诊断方法。
- 郭广君吕素芳沈志强丁壮张松林肖跃强毕研丽魏凤
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 细胞凋亡体外检测方法的研究进展被引量：2
- 2015年
- 细胞凋亡贯穿于生物体生命活动的全部过程,在生命活动中具有重要的地位,是生命科学领域研究的热点。目前,用于检测细胞凋亡的方法很多。为了准确、快速地检测细胞凋亡,文章在介绍细胞凋亡的形态变化和生化特征、刺激细胞凋亡发生机制的基础上重点综述了常用的细胞凋亡的体外检测方法。
- 魏凤郭广君吕素芳肖跃强张文通管宇王金良沈志强
- 关键词：细胞凋亡体外
- 猪伪狂犬病病毒 gE-/gI-/TK-多基因缺失活疫苗对猪的安全性与免疫效力研究被引量：19
- 2014年
- 为了研制猪伪狂犬病病毒三基因缺失疫苗,本试验在前期工作的基础上,将TK基因缺失的质粒pBTK与gI-/gE-PRV SA738病毒基因组共转染BHK21细胞,通过蚀斑法进行筛选。用鉴定成功的重组病毒制备活疫苗,分别接种新生仔猪及妊娠母猪,观察仔猪、妊娠母猪产仔数及仔猪健康情况,并进行抗体中和试验和攻毒保护试验。同时与双基因缺失株gI-/gE-/PRV和PRV Bartha k61做对比,以生理盐水做对照。结果成功筛选到重组病毒,命名为gI-/gE-/TK-/PRV SA738,TCID50为5.75~6.125。重组病毒制备的活疫苗,对仔猪和妊娠母猪健康状况均无影响,安全性好,免疫保护率为100%(5/5),有效诱导了机体的保护性免疫应答。结果表明,gI-/gE-/TK-PRV SA738突变株适合作为疫苗毒株使用。
- 吕素芳郭广君魏凤王文秀董炳梅毕研丽苗立中沈志强
- 关键词：伪狂犬病病毒安全性免疫效力
- 产肠毒素性大肠杆菌F41与987P菌毛蛋白的串联表达被引量：6
- 2008年
- 根据GenBank中发表的E.coli F41、987P基因序列,分别设计合成一对引物。利用PCR技术,分别以大肠杆菌C83707的基因组和C83710的质粒为模板扩增F41、987P基因。通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切、连接和转化,构建了含F41-987P串联表达载体的重组菌株BL21(DE3)/pETF41-987P。经酶切、PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETF41-987P中含有F41-987P融合基因,且基因序列和阅读框架均正确。经过SDS-PAGE分析,串联表达蛋白含量在30%左右,经Western blot检测,该串联表达蛋白能被大肠杆菌F41、987P阳性血清识别。反向间接血凝试验结果,F41效价为26～28,987P效价为28～210。说明F41-987P融合蛋白具有良好的抗原性。表明构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株。
- 逄媛沈志强崔言顺聂小想王金良郭广君李建亮
- 关键词：大肠杆菌F41
- 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因的分子特征被引量：1
- 2013年
- 本研究于2011年8月从山东省某鸡场鸡群中分离一株病毒,通过对分离株进行病毒致鸡胚矮小化试验、RT-PCR、动物回归试验等方法证实分离到鸡传染性支气管炎病毒(AIBV),命名为SDLVS株。根据GenBank上发表的AIBV的S1基因序列,用Oligo6.0设计引物,对分离株SDLVS株S1基因进行序列扩增,测序及序列分析。将分离的AIBV毒株与中国常用疫苗毒株、其他血清型参考毒株分别进行核苷酸和氨基酸系统发生进化关系分析。SDLVS S1基因由1611个核苷酸组成,编码含537个氨基酸残基的多肽。SDLVS株与55株参考毒株的同源性比较,核苷酸同源性在72.4%～99.6%之间,推导氨基酸序列同源性在71.2%～99.3%之间。从进化树分析中SDLVS株与Mass型参考毒株核苷酸同源性最高,特别是与H120核苷酸同源性最高为99.6%,进化亲缘关系最近,提示这2株毒株的存在可能与长期使用Mass血清型AIBV疫苗,从而产生疫苗的免疫压力有关。
- 毕研丽苗立中王金良郭广君吕素芳沈志强
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒遗传进化分析
- 一种用于狐狸逆转录病毒检测的特异引物组及PCR检测试剂盒的应用
- 本发明提供了一种用于狐狸逆转录病毒检测的特异引物组及PCR检测试剂盒的应用，引物组包括两对引物，其中：第一对引物：上游引物1如SEQ ID No.1‑F所示、下游引物1如SEQ ID No.1‑R所示；第二对引物：上游引...
- 王玉茂韩强于新友郭广君付石军庄金秋王建军沈志强
