郭云云
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- mSAP转基因小鼠模型的建立
- 转基因动物技术是一项新兴的生物技术，是常规分子生物学技术和基因工程技术在研究层次上的拓展和延伸。转基因动物的出现，使人类可以通过基因重组的各种方法人为的改造动物基因组，在动物活体水平上研究有关基因的结构与功能，是一个四维...
- 郭云云
- 关键词：转基因小鼠显微注射法基因阳性孟德尔遗传规律外源基因导入系统发生学
- 文献传递
- 血清淀粉样P成分转基因小鼠模型的建立
- 2006年
- 目的:建立可表达血清淀粉样P成分(SAP)转基因小鼠模型,以研究SAP基因的功能。方法:采用基因重组技术将SAP基因插入到pCMV-Tag5A真核表达载体上。经BciVI限制性内切酶酶切后,琼脂糖凝胶电泳回收2.7 kb目的片断,受精卵原核显微注射法将其注入雄原核,制备转基因小鼠。采用PCR法在基因水平筛选SAP转基因小鼠阳性小鼠;免疫沉淀法结合免疫印迹法在蛋白水平检测SAP基因在PCR阳性转基因小鼠中的表达情况。结果:成功构建了pCMV-Tag5A/mSAP真核表达载体。经显微注射法将2.7 kb线性目的基因片断注射入受精卵雄原核,移植入代孕母鼠,所生127只小鼠,其中PCR鉴定获得10只转基因阳性小鼠。免疫沉淀法和免疫印记法随机检测83#♂founder、7#♀founder与C57 BL/6J小鼠回交F1代PCR阳性转基因小鼠血清中外源SAP基因蛋白水平的表达,发现均有表达。结论:该研究以C57BL/6J小鼠为研究对象,成功地产生能稳定遗传SAP基因的过表达转基因小鼠模型,它将有利于研究SAP基因在炎症、淀粉样沉淀、自身免疫系统中的作用。
- 郭云云张英汉耿建国辛亚平
- 关键词：显微注射转基因小鼠
- 小鼠SAP基因的克隆、表达及多抗制备
- 2006年
- 目的制备小鼠SAP多克隆抗体,为进一步研究其功能和探讨其与炎症、肿瘤等疾病的相关性提供素材。方法PCR扩增小鼠SAP基因编码区的DNA片段,将其重组入原核表达质粒PET30a(+),转化入大肠杆菌BL21中,异丙基-βD硫代办乳糖苷(IPTG)诱导产生His/mSAP融合蛋白,SDS-PAGE分析结果表明,蛋白主要以包涵体形式存在。采用割胶回收的方法纯化目的蛋白,免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、Western印迹来检测抗血清效价及特异性。结果成功的构建了PET30a(+)/mSAP重组质粒,表达融合蛋白,免疫家兔所获得的mSAP多克隆抗体。结论mSAP多克隆抗体特异性强,效价高。
- 郭云云张英汉耿建国
- 关键词：SAP基因克隆原核表达多克隆抗体
