邹海峰
- 作品数：17 被引量：48H指数：4
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- 程序性细胞死亡蛋白5在米非司酮诱导前列腺癌细胞凋亡中的协同作用被引量：4
- 2010年
- 目的:观察程序性细胞死亡蛋白5(programmed cell death 5,PDCD5)在米非司酮(mifepristone,MIF)诱导的前列腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制。方法:MTT法检测不同浓度(5、10、20、50、100μmol/L)的MIF作用前列腺癌PC-3M细胞24～96 h后的吸光度(D)值,找到最佳作用时间及浓度。将真核表达载体PCI-neo-PDCD5用脂质体介导的方法转染入PC-3M细胞后,采用细胞免疫荧光法检测PDCD5蛋白的表达水平。在转染PDCD5基因的细胞中加入最佳作用浓度的MIF,继续培养24、48 h后,采用TUNEL和吖啶橙(acrine orange,AO)/溴化乙锭(ethidium bromide,EB)法检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达变化。结果:MTT检测结果显示,与对照组相比,5、10μmol/L MIF组的D值没有显著变化(P>0.05),20、50和100μmol/L MIF组的D值显著降低(P<0.05),说明MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性。PDCD5基因真核表达载体成功转染入PC-3M细胞,并得到高表达。TUNEL和AO/EB检测结果显示,与对照组及单独应用MIF组相比,转染PDCD5基因并加入MIF后的细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Western印迹结果显示,caspase-3蛋白在PDCD5与MIF联合作用时的表达明显增加(P<0.01)。结论:外源性PDCD5在MIF诱导的前列腺癌细胞凋亡中有明显的正协同作用,推测其有望成为前列腺癌临床治疗的一个辅助药物。
- 于靖邹海峰裴天仙林平王爽姜雪于晓光
- 关键词：前列腺肿瘤细胞凋亡凋亡调节蛋白质类米非司酮
- 前列腺癌细胞中TGF-α的活化——ADAM-17的剪切作用
- ADAM-17(A disintegrin and metalloprotease domain-17)是一锚定于细胞膜的糖蛋白。1997 年,Moss ML 等人首次从能产生并释放有活性的 TNF-α的细胞中克隆出 A...
- 姜颖刘紫君肖莉杰林平邹海峰王淑娟于晓光
- 文献传递
- PGEM-T/TIMP-1重组质粒的构建及其在体外转录法合成dsRNA中的作用
- 2005年
- 目的 构建大鼠PGEM -T/TIMP 1重组质粒,获得TIMP -1基因的dsRNA。方法 RT PCR获得TIMP 1cDNA ,克隆于PGEM- T载体上,PCR鉴定并进行序列分析;以PGEM- T/TIMP- 1重组质粒为模板,PCR获得带有T7启动子的TIMP 1cDNA ;体外转录获得TIMP- 1dsRNA。结果 RT- PCR及测序分析证明成功构建PGEM- T/TIMP 1重组质粒;并获得带有T7启动子的TIMP- 1cDNA以及TIMP- 1dsRNA。结论 成功构建PGEM T/TIMP -1重组质粒,并获得TIMP -1dsRNA ,为RNAi实验奠定了基础。
- 徐华锋邹海峰刘洋林平司云峰于洪伟于晓光
- 关键词：TIMP-1T7启动子RNAIDSRNA
- 重组人α降钙素基因相关肽的克隆与表达(英文)
- 2004年
- 通过PCR方法从人类基因组中扩增出编码hαCGRP的片段,将该片段定向克隆到pET-32a(+)载体上,构建pET-hαCGRP重组质粒。转化E.coli JM109菌株,利用酶切和测序方法筛选后,经IPTC诱导再转化E.coli BL21trxB(DE3)pLYsS菌株。SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物,最后通过扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验来检测重组hαCGRP扩张血管的活性。结果表明,重组质粒含hαCGRP成熟肽编码基因序列(111bp),符合预想结果;表达出21 kD的融合蛋白,且主要以可溶性形式存在,其粗提物具有扩张血管能力。重组hαCGRP的成功表达为下一步纯化及研制基因工程药物奠定了重要基础。
- 赵丹丹于晓光班莺徐华锋林平邹海峰刘宇
- 关键词：PCR人类基因组融合蛋白克隆基因工程
- MMP-26/TIMP-1在肝纤维化形成过程中的作用
- 本文研究了MMP-26/TIMP-1在肝纤维化形成过程中的作用。研究采用皮下注射CCI4建立小鼠肝纤维化模型;RT-PCR扩增MMP-26与TIMP-1cDNA片段，定向克隆到转录载体pSPT18上，构建重组质粒，转化E...
- 邹海峰
- 关键词：基质金属蛋白酶蛋白酶抑制剂肝纤维化原位杂交
- 文献传递
- FAK反义寡聚脱氧核苷酸对FN诱导Hela细胞MMP-2表达的影响被引量：4
- 2004年
- 目的:利用反义核酸技术探讨纤黏连蛋白(fibronectin, FN)诱导Hela细胞中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)基因表达的机制。方法:无血清培养Hela细胞,以不同浓度及作用时间的FN诱导Hela细胞中MMPs基因表达, 并用反义寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)封闭焦点黏着激酶(focal adhesion kinase,FAK), 用酶谱分析方法检测MMPs的活性。结果:FN浓度为0 μg/mL时,Hela细胞无MMP蛳2基因表达;FN浓度为5 μg/mL^10 μg/mL、作用时间为12 h,MMP蛳2活性最大;当在培养液反义ODN后,MMP蛳2活性明显降低。结论:MMP蛳2基因表达与FN的浓度以及作用时间有关;FN可通过其整合素受体的信号转导通路启动Hela细胞中MMP蛳2基因表达、降解ECM,从而促进肿瘤的浸润和转移。
- 班莺于晓光赵丹丹林平徐华锋邹海峰刘洋
- 关键词：寡聚脱氧核苷酸
- 降钙素基因相关肽衍生物克隆表达与活性鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性。方法以pETC-GRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32 a(+)载体上,构建pETC-GRP-VY重组质粒,转化E-.coli JM109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pETC-GRP-VY转化E.coli BL21 trxB(DE3)pLysS菌株,经IPTG诱导后,收集并裂解菌体,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性,并与重组CGRP进行活性比较。结果获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列(111 bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pETC-GRP-VY,符合预期结果;经诱导后在E.coli中表达出21.2kD的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能。结论成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础。
- 林平邹海峰于靖边淑玲刘紫君于晓光
- 关键词：CGRP克隆表达
- 便捷式血压监测带
- 本实用新型公开了一种便捷式血压监测带，包括气囊，所述气囊下放设有2.5厘米长的拍拍尺，所述气囊两侧设有左侧绑带和右侧绑带，所述右侧绑带上设有插口，所述左侧绑带和右侧绑带上均设有魔术贴，所述左侧绑带和右侧绑带上均设有拉绳。...
- 王广友孙博李呼伦王丹丹王菁华孔庆飞穆莉莉刘玉梅刘希君张瑶张彤帅汪丹丹邹海峰刘心平
- 文献传递
- RNAi抑制肝星状细胞TIMP-1基因表达及对细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2007年
- 研究了siRNA对大鼠肝星状细胞(CFSC)TIMP-1基因表达及对细胞生物学行为的影响.用RT-PCR方法获得带有T7启动子的TIMP-1全基因序列,体外转录法获得TIMP-1dsRNA,Dicer酶切后得到siRNA,用质脂体将siRNA转染至CFSC,RT-PCR检测TIMP-1 mRNA的表达,MTT方法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果成功获得TIMP-1 siRNA,将TIMP-1 siRNA转染至CFSC12、24、48h后,与对照相比,TIMP-1 mRNA的表达逐渐下降,经Quanity One(BIO-RAD,USA)分析后,其抑制率分别为49.18%、58.72%和64.73%;siRNA转染CFSC细胞后,CFSC生长受到抑制,细胞凋亡不明显.实验结果表明体外转录法得到的siRNA能有效地降低大鼠CFSC中TIMP-1的表达,明显抑制CFSC的增殖,但不直接引起CFSC的凋亡.
- 徐华锋邹海峰林平刘鑫刘秀萍于晓光
- 关键词：RNAI基质金属蛋白酶组织抑制因子-1肝星状细胞
- 肝纤维化基质金属蛋白酶-26/基质金属蛋白酶抑制因子-1mRNA的表达被引量：5
- 2006年
- 基质金属蛋白酶（MMPs）是一组能降解细胞外基质（ECM）的酶，该家族的一些酶是迄今为止已发现的惟一能分解纤维类胶原的酶类，MMP-26是MMPs家族的一个新成员，又称endometase或matrilysin-2，MMP-26可能参与一系列与组织重建有关的事件。基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）是一组能特异性抑制MMPs活性的低分子蛋白质，
- 邹海峰刘洋徐华锋林平赵丹丹吴进荣刘鑫于晓光
- 关键词：肝纤维化基质金属蛋白酶原位杂交
