赵淑玲
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
- 供职机构：扬州大学生物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学文化科学农业科学更多>>
- 美洲棉铃虫细胞中dsRNA介导的egfp基因沉默分析
- 2011年
- 为了分析在美洲棉铃虫细胞(HzAM1)内RNAi的效果,将egfp基因克隆到含有双向T7启动子/终止子的质粒载体中,在体外合成全长的增强型绿色荧光蛋白(egfp)基因dsRNA,将dsRNA和含有能在昆虫细胞内表达eGFP的质粒一起转染HzAM1细胞,分析dsRNA对eGFP表达的抑制作用。结果显示,由egfp基因转录的长dsRNA能有效抑制HzAM1细胞内eGFP的表达,而且该抑制作用表现为剂量依赖效应。但是抑制作用并不彻底,在高剂量的dsRNA处理下,仍有部分细胞内能观察到eGFP的表达。
- 赵淑玲梁昌镛李敏王海花张高瞻
- 关键词：体外转录绿色荧光蛋白
- 水稻条纹病毒RNA聚合酶在昆虫细胞中的表达
- 2014年
- [目的]利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)RNA聚合酶(RdRp)基因。[方法]RT-PCR扩增RdRp基因功能区片段,克隆于转移载体p Fast Bac HTb上,转化到大肠杆菌DH10Bac中,得到重组杆状病毒表达载体Bacmid-rp。提取Bacmid-rp DNA,转染Sf9细胞获得重组病毒v Ac-rp。将重组病毒v Ac-rp感染Sf9细胞使目的蛋白在细胞内表达,并利用亲和层析纯化,SDS-PAGE检测RdRp的表达情况。将纯化的RdRp蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot分析RdRp的免疫原性。[结果]RSV RdRp基因功能区能够在Sf9细胞中表达,蛋白分子量约为45k Da,与预测大小一致,且可与RdRp抗血清发生特异性反应。[结论]在真核细胞中成功表达了RSV RdRp,并得到了纯化的RdRp和其多克隆抗体。
- 赵淑玲刘璐璐薛亚男郝佳慧
- 关键词：水稻条纹病毒RDRP杆状病毒表达系统纯化
- 病毒侵染过程中肌动蛋白的作用研究进展
- 2022年
- 从病毒进入、复制、释放以及在细胞间传播等方面概述肌动蛋白在其中的功能,重点介绍在病毒感染的不同阶段病毒招募、诱导肌动蛋白形成的具体过程、途径及作用,探讨病毒调控肌动蛋白细胞骨架重排的分子机制和调节方式。虽然目前对肌动蛋白参与病毒侵入及释放的过程了解较多,但对其参与病毒复制及组装的研究还较少,肌动蛋白调控的分子机制和信号途径还需更深入地研究,以期为进一步阐明病毒侵染的分子机制,发展新的抗病毒策略提供理论依据。
- 李杰赵淑玲
- 关键词：肌动蛋白病毒侵染细胞骨架
- 缺失pk-1影响AcMNPV启动子表达的分析
- 2015年
- [目的]分析缺失pk-1对AcMNPV早期、晚期及极晚期基因表达的影响。[方法]将egfp基因片段分别插入到pFastBacDual载体上的p10和ph启动子下游,得到供体质粒pBac-Pp10-egfp和pBac-Pph-egfp。PCR扩增ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39启动子片段,插入到pBac-egfp载体上的egfp基因上游,得到供体质粒pBac-Pie1-egfp、pBac-Pie2-egfp、pBac-Plef2-egfp、pBac-Pp6.9-egfp、pBac-Pvp39-egfp。将供体质粒分别转化含缺失pk-1基因的AcMNPV bacmid和Helper质粒的大肠杆菌DH10Bac中,得到一系列重组的AcMNPV bacmid。提取Bacmid DNA,转染Sf9细胞,转染120h后荧光显微镜下观察eGFP蛋白的表达。[结果]缺失pk-1后ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子均能启动下游egfp基因的表达。[结论]缺失pk-1不影响ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子启动的基因表达。
- 赵淑玲戴雪娟薛亚男郝佳慧
- 关键词：ACMNPV启动子
- 杆状病毒PK-1亚细胞定位分析
- 2014年
- 目的：制备苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒PK-1抗体，利用抗体分析PK-1在病毒感染过程中的亚细胞定位。方法：根据pk-1基因序列设计引物，扩增全长序列，将其克隆到原核表达载体pMal—c2x。利用原核表达目的蛋白质，将产物进行亲和层析，获得纯化蛋白。将纯化的融合蛋白免疫兔子制备抗血清，利用PK-1抗血清进行免疫荧光分析PK-1在病毒感染过程中的亚细胞定位。结果：成功原核表达并纯化PK-1融合蛋白，获得PK-1兔多克隆抗血清，并确定了PK-1在病毒的感染过程的亚细胞定位。结论：在杆状病毒感染后的16h，PK-1主要定位在细胞质中，随后扩散到细胞核中，在感染后24h分布在整个细胞中，到感染后48～72h，PK-1又重新定位在细胞质中，这些结果为进一步分析PK-1的功能奠定了基础。
- 陈雅婷郭凯李敏赵淑玲吕孝敏梁昌镛
- 关键词：杆状病毒原核表达免疫荧光亚细胞定位
- 分子生物学教学质量提高措施被引量：1
- 2016年
- 分子生物学是一门重要的基础学科,提高分子生物学教学质量能有效促进学生对其他专业课程的理解。探讨了提高分子生物学教学质量的一些方法和途径。强调了教师业务素质的提高非常关键,另外,分析了现代教学设备和手段在提高分子生物学教学中的作用。
- 梁昌镛赵淑玲
- 关键词：分子生物学教学质量多媒体
- 非包膜病毒进入细胞基质的研究进展被引量：2
- 2011年
- 病毒是最简单的生命形态，必须在宿主细胞中才能繁殖。为了增殖，病毒需要将它们的基因组运送到宿主细胞中。而要达到这一目的，病毒必须通过宿主细胞的主要屏障——细胞质膜，不同病毒会根据宿主细胞膜的特点运用不同的进入策略。根据病毒的外表是否具有脂双层膜可将病毒分成两类：包膜病毒和非包膜病毒。包膜病毒外表有一层来源于宿主细胞的脂双层膜，膜上整合了病毒编码的膜融合蛋白。包膜病毒主要通过膜融合蛋白的作用促使病毒的包膜与细胞膜融合，从而介导病毒核衣壳的侵入。对于非包膜病毒来说，由于缺乏包裹在外面的脂双层膜，因此不能利用膜融合的方式进入细胞。非包膜病毒的表面一般都含有一种或多种核衣壳蛋白，其中有些蛋白可以介导病毒进入细胞，这些蛋白就是所谓的“透过蛋白”。
- 赵淑玲梁昌镛
- 关键词：细胞基质核衣壳蛋白
- 杆状病毒P6.9蛋白的表达及自身互作研究
- 2012年
- 目的:在大肠杆菌中表达苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒P6.9蛋白并制备抗体,研究P6.9的自身互作。方法:用PCR方法扩增p6.9基因,将其分别克隆到原核表达载体pMAL-c2x、pGEX-4T-1、pET28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。选取可溶性较好的融合蛋白纯化后免疫家兔制备抗体。然后利用该抗体进行Western blot检测、分析P6.9的自身互作。结果:构建了pMAL-P6.9、pGEX-P6.9、pET-P6.9三种原核表达质粒,分别在大肠杆菌中经IPTG诱导表达产生了与预期分子量相符的MBP-P6.9(49.4kDa)、GST-P6.9(32.9kDa)、HIS-P6.9(12.5kDa)融合蛋白。制备了P6.9的多克隆抗体,能与P6.9蛋白发生特异反应。Pull-down结果表明P6.9自身互作。结论:获得了兔抗P6.9的多克隆抗体,为深入研究P6.9的功能提供了检测工具。证明了P6.9之间的互作,说明该蛋白功能的发挥可能是通过多聚体起作用的。
- 梁昌镛张高瞻赵淑玲李敏戴雪娟侯艳玲
- 关键词：原核表达抗体
- 酵母双杂交系统筛选与水稻条纹病毒Pc2互作的寄主蛋白基因片段
- 2012年
- 水稻条纹病毒编码的Pc2蛋白在病毒侵染及宿主症状发生中起作用。研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染与致病的分子机制。分别将编码Pc2N端（Pc2-N）与Pc2C端（Pc2-C）的基因片段克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7上．并构建水稻叶片cDNA文库．然后分别用Pc2-N和Pc2-C为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明．诱饵载体中插入的Pc2-N和Pc2-C编码框和氨基酸序列均正确。Pc2-N对酵母菌株AHl09无毒性和自主激活能力，但Pc2-C对酵母具有细胞毒性。文库滴度为4x107CFU／mL．且大多数插入片段在500～2000bp之间。利用Pc2-N为诱饵筛选水稻cDNA文库．获得有8个候选阳性克隆。经序列测定和BLAST分析结果表明．这些克隆共编码5种蛋白．主要为胁迫相关蛋白与光系统相关蛋白。
- 梁昌镛赵淑玲侯艳玲戴雪娟
- 关键词：水稻条纹病毒CDNA文库酵母双杂交筛选
- 甲型肝炎病毒VP4-VP2在昆虫细胞膜表面的表达
- 2013年
- 目的:利用杆状病毒表面展示系统将甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的衣壳蛋白VP4-VP2展示在昆虫细胞膜表面,为甲型肝炎病毒的免疫检测奠定基础。方法:将HAV VP4-VP2基因片段插入杆状病毒膜蛋白基因gp64信号肽序列和水疱口膜炎病毒G蛋白跨膜区基因片段之间得到重组质粒pBac-sp-VP0-VSVtm。利用Bac-to-Bac系统获得含有该融合基因的重组病毒Ac-VP0-VSV。重组病毒感染昆虫Sf9细胞,免疫荧光分析目的蛋白在昆虫细胞的表达。结果:免疫荧光结果显示HAV VP4-VP2蛋白可在Sf9细胞的膜表面大量表达。结论:昆虫细胞膜表面展示系统构建成功,利用该系统HAV VP4-VP2蛋白可在昆虫细胞内表达并被展示到了细胞膜表面。
- 梁昌镛蓝丹丹刘璐璐赵淑玲陈雅婷
- 关键词：甲型肝炎病毒杆状病毒
