贝为成
- 作品数：65 被引量：94H指数：5
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省科技攻关计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一种猪链球菌2型双基因缺失活疫苗及应用
- 本发明涉及动物传染病疫苗制备技术领域。具体涉及一种猪链球菌2型双基因缺失活疫苗的制备及应用。本发明以猪链球菌2型地方分离株SC19为基础，采用同源重组的方法，在缺失了单基因Ece1的基础上，继续缺失另一个Salk/R基因...
- 方六荣龙田泗肖少波谭臣贝为成陈焕春
- 双组分信号转导系统CpxA/CpxR调控胸膜肺炎放线杆菌致病性机理研究
- 贝为成
- 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是严重危害养猪业的一种重要病原菌。双组份调控系统(TCS)具有参与调控细菌致病性、生长代谢、耐药性、毒力因子表达等多种重要生物学功能。该项目通过缺失猪胸膜肺炎放线杆菌双组份调控系统cpxA/cp...
- 关键词：
- 关键词：养猪胸膜肺炎放线杆菌病原菌基因表达
- 利用酵母双杂交系统筛选与猪2型链球菌透明质酸酶(HYL)相互作用的蛋白质被引量：2
- 2009年
- 以猪链球菌2型(SS2)透明质酸酶(HYL)作为诱饵蛋白,利用CytoTrap酵母双杂交系统,从人的肺组织cD-NA文库中筛选与HYL相互作用的蛋白,探索HYL在SS2致病中的作用。首先,通过PCR扩增SS2Hyl全长基因,定向克隆到pSos载体多克隆位点中,构建诱饵载体(pSos-Hyl)。同时,将Hyl克隆到pET-28c载体中,构建重组表达载体(pET28c-Hyl)。将pSos-Hyl和人肺cDNA文库(pMyr-cDNA)共转化cdc25H酵母细胞,筛选与HYL相互作用的阳性克隆。经过筛选和重复验证,并对所得到的载体插入片段进行测序,经BLAST分析,从人肺组织cDNA文库中得到2个与HYL相互作用的阳性克隆,2个基因分别与γ内收蛋白(Homo sapiens adducin 3(gam-ma)(NT_030059.12),ADD3)和装配架离子转运蛋白(Homo sapiens chromosome 6 genomic contig,reference as-sembly ion transporter protein(NT_034880.3),AITP)基因的同源性为99%和100%。将HYL原核表达,ADD3和AITP真核细胞表达后,用免疫共沉淀试验分别验证了HYL与ADD3和AITP之间的相互作用,为进一步研究ADD3和AITP可能与SS2致病的关系奠定了前期基础。
- 吴涛常海涛谭臣付婷司有辉贝为成陈焕春
- 关键词：猪链球菌2型透明质酸酶酵母双杂交
- 猪肺疫多杀性巴氏杆菌外膜蛋白免疫效果研究
- 本研究旨在选取猪多杀性巴氏杆菌中具有免疫保护效果蛋白，并对其免疫效果进行评价。选择猪多杀性巴氏杆菌外膜蛋白Omp87、OmpA、VacJ、OmpH、PlpE五种蛋白，设计特异性引物，扩增基因片段，连接至表达载体pET-2...
- 赵海旭邓立美刘峰贝为成
- 关键词：猪多杀性巴氏杆菌外膜蛋白免疫效果
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅡ^-/Amp^r突变株的构建被引量：5
- 2004年
- 根据已发表的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清5型核苷酸序列设计并合成了一对引物,从自行分离的APP菌株PCR扩增apxⅡCA基因,将该片段与pBluescriptSK(+)载体连接,得到质粒pSK CA。另外,从质粒pIC neo中得到的Ampr基因经XbaⅠ酶切消化后,克隆到pSK CA中的XbaⅠ位点,获得了重组转移质粒pSK CAmpr。pSK CAmprDNA通过电转化导入亲本菌,电转化后的产物涂布于TM平板,可获得突变株。提取突变株和亲本菌基因组DNA,用PCR检测含有apxⅡC基因的胸膜肺炎放线杆菌染色体区域。从突变株基因组DNA扩增得到的一条PCRDNA片段比从亲本菌基因组DNA扩增得到的一条DNA片段大1 3kb,增大的片段与所插入的Ampr基因大小相符合。用合成的Ampr基因引物从突变株基因组DNA中也能扩增到一条1 3kb的特异性DNA片段。同时South ernblot鉴定有特异性带。这表明我们所构建的突变株是成功的。测定了突变株的遗传稳定性及突变株对动物的安全性,为进一步研究用其它报告基因置换Ampr基因后,研制单基因工程疫苗及以APP毒力缺失突变菌株为载体,表达外源基因的APP基因工程菌的研究奠定了坚实的基础。
- 贝为成何启盖陈焕春徐晓娟洪文洲肖少波宋云峰刘建杰
- 关键词：传染性胸膜肺炎放线杆菌基因构建
- 表达ApxIA的血清7型胸膜肺炎放线杆菌弱毒菌株的构建及特性分析被引量：4
- 2010年
- 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染疾病,严重阻碍着全球养猪业的发展,疫苗接种是控制该病的有效措施。为提高胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的免疫效力,以及探索胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗作为呼吸系统病原疫苗载体的可行性,通过穿梭质粒pJFF224-XN将完整的apxIA基因导入apxIIC基因缺失突变株HB04C-中,构建了含有apxIA和apxIIA基因的弱毒疫苗菌株HB04C2(apxIIC-/apxIIA+/apxIA+)。通过对HB04C2的生物学特性分析发现,穿梭质粒可稳定传代,并表达ApxIA,其生长特性未受穿梭质粒的影响。将HB04C2以气管接种方式免疫仔猪,可产生针对ApxIA和ApxIIA的抗体。二免后2周以高致病性的血清1型胸膜肺炎放线杆菌攻毒,该弱毒疫苗可提供良好的免疫保护效果。
- 刘金林陈砚胡琳琳贝为成陈焕春
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗多价疫苗
- 区分疫苗免疫和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失突变株的疫苗及应用
- 本发明属于动物细菌基因工程领域，具体涉及一种区分疫苗免疫和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型双基因缺失突变株的构建、疫苗及应用。本发明得到一株区分疫苗免疫动物和野毒感染动物的猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型基因缺失突变株...
- 贝为成陈焕春刘金林周锐何启盖金梅林方六荣吴斌肖少波曹胜波
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I基因的克隆、表达及其ELISA检测方法的建立被引量：23
- 2004年
- 根据胸膜肺炎放线杆菌S4 0 74菌株毒素I的序列 ,设计了 1对引物 ,从本室自己分离的菌株中扩增了猪胸膜肺炎放线杆菌毒素I的结构基因 (apxICA) ,扩增的DNA片段大小为 36 4 0bp(4 6 87～ 832 6bp) ,将其克隆到pMD18 T载体中 ,酶切鉴定和序列测定后 ,进一步将其插入pET 2 8a中构建了原核表达载体 ,SDS PAGE和Westernblotting分析表明 ,该基因在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中获得了表达 ,而且表达的蛋白质具有免疫学活性。利用表达的蛋白作为抗原包被酶标板 ,建立了检测毒素I血清抗体的ELISA方法。临床应用表明 。
- 刘建杰何启盖陈焕春吴斌徐晓娟刘军发唐先春贝为成
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌毒素ELISA检测
- 一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株及其应用
- 本发明公开了一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株及其应用，属于细菌基因工程技术领域。本发明的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株为缺失了apxIC基因、apxIIC基因、apxIV‑orf1基因、c...
- 贝为成袁芳艳游武进王斌陈焕春
- 文献传递
- 猪链球菌病防控关键技术研究与应用
- 金梅林陈焕春张安定康超石健徐高原贝为成周锐周明光谭臣陈波陈关平
- 该项目属于家畜传染病学领域。为人畜共患病范畴。该项目以猪链球菌病防控为总体目标，系统开展猪链球菌病流行及病原分子进化规律，揭示致病和免疫机制，从应用基础和应用推广的角度开展防控技术研究。1.系统地进行了流行病学、致病和免...
- 关键词：
- 关键词：猪链球菌病人畜共患病家畜传染病学
