许飞
- 作品数：13 被引量：67H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- ERβ重组质粒的构建及其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达
- 2008年
- 目的:基因重组技术构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并检测其在结肠癌细胞株Caco-2中的表达.方法:应用RT-PCR从人结肠癌手术患者正常切缘组织中分离、扩增目的基因片段,将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,采用双酶切和测序分析鉴定插入基因的序列;脂质体介导重组质粒pEGFP-C1-ERβ瞬时转染Caco-2并上流式细胞仪分选,获得比较单一的转染细胞;分别采用RT-PCR、Western blot检测转染前后ERβ基因不同分子水平表达.结果:酶切鉴定和测序分析表明重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ构建无误;RT-PCR和Western blot分析均表明,与转染空质粒pEGFP-C1组和空白对照组细胞相比,转染重组表达质粒pEGFP-C1-ERβ组细胞ERβ基因表达水平明显提高.结论:成功构建重组质粒pEGFP-C1-ERβ并在Caco-2细胞株中表达,为进一步研究ERβ如何通过雌激素受体通路调控下游靶基因表达和参与结肠癌表遗传学发生机制奠定了基础。
- 翟荣林王国斌蔡开琳许飞田元
- 关键词：雌激素受体Β基因重组真核表达载体结肠癌
- 改良手助腹腔镜和完全腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术的比较研究被引量：18
- 2013年
- 目的 比较改良手助腹腔镜下和全腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术治疗肝硬化门静脉高压症的临床效果.方法 回顾性分析2007年1月至2011年12月进行的47例改良手助腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术（改良手助腹腔镜组）和38例完全腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术（完全腹腔镜组）的患者临床资料.改良手助腹腔镜组先在手助腹腔镜下完成脾切除术,再改为完全腹腔镜下行贲门周围血管离断术.比较两组患者的手术时间、术中出血量、术后并发症和术后住院时间等资料.结果 改良手助腹腔镜组47例患者手术顺利,无中转开腹手术；完全腹腔镜组有2例患者因为术中出血中转开腹手术.改良手助腹腔镜组的平均手术时间为（154±32） min,术中出血量为（115±73） ml,均显著低于完全腹腔镜组[分别为（212±45） min和（172±57） ml].两组均无围手术期死亡.两组患者在术后胃肠功能恢复、平均术后住院时间和围手术期并发症发生率上差异无统计学意义.结论 改良手助腹腔镜下脾切除联合贲门周围血管离断术安全性好,操作方便,术中出血少,兼具手助腹腔镜和完全腹腔镜手术的优势,值得临床推广.
- 帅晓明陈俊华韩高雄许飞蔡明陶凯雄王国斌
- 关键词：脾切除术腹腔镜
- 雌激素受体β过表达对大肠癌细胞增殖凋亡的影响被引量：6
- 2009年
- 目的观察雌激素受体β(ERβ)过表达对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法以脂质体介导的ERβ基因转染SW 480细胞,G418筛选阳性克隆(SW 480-C1-ERβ)。RT-PCR及W estern B lot鉴定ERβ的过表达。以正常SW 480细胞和转染了空质粒的SW 480细胞(SW 480-pEGFP-C1)作为对照,在无雌激素或有雌激素作用的条件下,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT-PCR方法检测凋亡相关基因survivin和Bax表达。结果SW 480和SW 480-pEGFP-C1细胞中ERβmRNA和蛋白表达较低,而稳定转染的SW 480-C1-ERβ细胞中ERβmRNA和蛋白表达明显增加。在有或无雌激素作用的条件下均可发现,与SW 480细胞或SW 480-pEGFP-C1细胞比较,SW 480-C1-ERβ细胞增殖速度减慢,凋亡率明显增高,survivin表达减低,Bax表达增高;在SW 480-C1-ERβ细胞中,有雌激素作用者较无雌激素作用者以上变化更明显。结论ERβ过表达可以同时以配体非依赖性和配体依赖性的方式抑制细胞增殖和增加细胞凋亡,可能与调控凋亡相关基因survivin和Bax表达有关。
- 许飞王国斌蔡开琳翟荣林
- 关键词：雌激素受体Β结肠肿瘤凋亡SURVIVINBAX
- 结直肠疾病的微创治疗体会被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨腹腔镜手术治疗结直肠疾病的适应证、安全性和可行性。方法:回顾分析2007年1月至2010年8月为226例结直肠疾病患者施行腹腔镜手术的临床资料。结果:222例成功完成腹腔镜手术,4例中转开腹。手术时间平均(172±65)min,术中出血量平均(95±41)ml。无死亡病例。随访186例恶性肿瘤患者平均26个月,局部复发4例(2.2%),远处转移5例(2.7%),肿瘤相关死亡7例(3.8%)。结论:腹腔镜手术治疗结直肠疾病安全、可行。腹腔镜手术治疗结直肠癌可取得与开腹手术相同的根治效果。
- 陶凯雄许飞帅晓明韩高雄王继亮王国斌
- 关键词：结直肠疾病结直肠外科手术腹腔镜检查
- 手助腹腔镜脾切除加贲门周围血管离断术治疗门静脉高压症
- ：探讨改良手助腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术治疗肝硬化门静脉高压症的临床应用价值.方法：2009年3月至2011年12月共对47例肝硬化门静脉高压症患者行改良手助腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术,先在手助腹腔镜下完...
- 帅晓明韩高雄陈俊华许飞蔡明陶凯雄王国斌
- 关键词：门静脉高血压腹腔镜脾切除加贲门周围血管离断术临床疗效
- 手助腹腔镜脾切除加贲门周围血管离断术治疗门静脉高压症被引量：26
- 2012年
- 目的探讨改良手助腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术治疗肝硬化门静脉高压症的临床应用价值。方法2009年3月至2011年12月共对47例肝硬化门静脉高压症患者行改良手助腹腔镜下脾切除加贲门周围血管离断术，先在手助腹腔镜下完成脾切除术，再改为完全腹腔镜下行贲门周围血管离断术。结果全组患者均完成改良手助腹腔镜下脾切除联合贲门周围血管离断术，无中转开腹，平均手术时间（154±32）min，术中平均出血量（115±73）ml，术后平均住院时间（9．2±1．6）d。围手术期并发症包括胸腔积液3例，腹水4例，胰漏1例，伤口裂开1例。无围手术死亡。结论改良手助腹腔镜下脾切除联合贲门周围血管离断术安全性好，操作方便，术中出血少。
- 帅晓明韩高雄陈俊华许飞蔡明陶凯雄王国斌
- 关键词：肝硬化腹腔镜脾切除术断流术
- 正常SD新生大鼠结肠上皮细胞体外分离的培养与鉴定研究被引量：4
- 2008年
- 目的：改进和优化正常SD新生大鼠结肠黏膜上皮细胞原代培养的方法。方法：采用Ⅰ、Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶消化加密度差异沉淀离心法分离SD新生大鼠结肠隐窝单位和肠上皮细胞,用含10%胎牛血清及EGF等因子的DMEM原代培养并维持,免疫组化方法检测细胞角蛋白并鉴定。结果：成功分离出增殖活性良好的结肠隐窝单位、结肠上皮细胞团块以及单个结肠上皮细胞。体外培养表明,结肠隐窝单位增殖旺盛,7～9 d即可形成细胞单层,2周左右达到高潮,以后逐渐开始出现凋亡坏死,3周以后细胞大量崩解并消亡。结论：SD新生大鼠结肠上皮细胞原代培养方法为结肠相关疾病的研究提供了稳定可靠的正常上皮细胞模型。
- 翟荣林王国斌蔡开琳田元许飞
- 关键词：鼠科结肠上皮细胞
- 小干扰RNA沉默zeste基因增强子同源物2对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响
- 2013年
- 目的观察小干扰RNA（siRNA）沉默zeste基因增强子同源物2（EZH2）对阿霉素诱导胃癌细胞MKN28衰老的影响。方法体外化学合成EZH2基因特异性小干扰RNA，脂质体Lipo-fectamine2000介导转染人胃癌细胞MKN28；实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测特异性siRNA对EZH2基因mRNA水平的沉默效果；采用阿霉素诱导细胞衰老，衰老相关．p．半乳糖苷酶（SA—B．gal）染色检测各组细胞衰老情况，激光共聚焦显微镜检测各组细胞胞核中衰老相关异染色质灶（SAHF）的形成。流式细胞仪和噻唑蓝实验（MTF）检测siRNA对细胞周期和生长的影响，并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化。结果EZH2siRNA能有效抑制MKN28细胞中EZH2mRNA表达，促进阿霉素诱导的MKN28细胞衰老和SAHF形成，EZH2siRNA＋阿霉素组细胞SA-13-gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于对照组，分别为（87．88±2．66）％、（96．27±1．71）％和（42．01±7．50）％、（51．72±2．97）％，且EZH2siRNA能阻滞MKN28细胞周期于Go／G．期，比例为（47．41±10．68）％，抑制细胞增殖，并促进阿霉素的阻滞细胞周期和抗增殖效应。结论EZH2siRNA可有效抑制胃癌细胞MKN28中EZH2表达，促进阿霉素诱导的胃癌MKN28细胞衰老，抑制细胞增殖。
- 白洁一马牧原蔡明许飞陈俊华韩高雄帅晓明陶凯雄
- 关键词：小干扰RNA
- EGCG对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响
- 2013年
- 目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate,EGCG)]对阿霉素诱导的胃癌细胞MKN28衰老的影响.方法:Western blot检测EGCG对EZH2蛋白表达的影响;阿霉素诱导经EGCG处理的MKN28细胞衰老,衰老相关--半乳糖苷酶(senescence associated--galactosidase,SA--gal)染色检测各组细胞衰老情况,激光共聚焦显微镜检测各组细胞核中衰老相关异染色质灶(senescence-associated heterochromatic foci,SAHF)的形成;噻唑蓝比色法(MTT)和流式细胞术检测EGCG对MKN28细胞生长和周期的影响,并比较在阿霉素诱导下各组细胞的相应变化.结果:EGCG可明显抑制EZH2蛋白表达,经EGCG处理的MKN28细胞在阿霉素诱导下SA--gal染色阳性率和SAHF形成比例明显高于阿霉素组和EGCG组,分别为72.16%±4.03%、34.42%±7.06%、15.40%±1.70%和86.44%±4.33%、47.73%±3.03%、80.28%±1.24%;与空白对照组相比,经不同浓度EGCG处理的MKN28细胞其周期G0/G1比例以及生长抑制率会随浓度的增高而增大(P<0.05),在阿霉素的诱导下此趋势更为明显.结论:EGCG可通过抑制EZH2表达来促进阿霉素对MKN28细胞的衰老诱导作用.
- 白洁马牧原蔡明许飞陈俊华帅晓明陶凯雄
- 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯EZH2细胞衰老阿霉素
- 雌激素受体β过表达对大肠癌细胞侵袭的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:观察雌激素受体β(ERβ)过表达对侵袭转移相关基因E-钙黏蛋白和CXCR4表达的影响,研究其对大肠癌细胞侵袭能力的影响。方法:以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆(SW480-C1-ERβ)。以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞(SW480-pEGFP-C1)作为对照,在有或无雌激素作用的条件下,利用Transwell小室法测定SW480、SW480-pEGFP-C1和SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力;采用Western blot法检测各组细胞中E-钙黏蛋白和CXCR4蛋白的表达。结果:在无雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力和CXCR4的表达显著低于另两株细胞(P<0.05)。有雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞在三者中的侵袭能力最低,E-钙黏蛋白的表达最高(P<0.05),而CXCR4表达无明显变化。在SW480-C1-ERβ组细胞中,雌激素作用时肿瘤细胞的侵袭能力和E-钙黏蛋白的表达分别明显低于和高于无雌激素作用时的细胞(P<0.05),而CXCR4的表达无明显差异。结论:ERβ可以以配体非依赖性的方式和配体依赖性的方式抑制大肠癌细胞的侵袭转移,这种效应可能与调控E-钙黏蛋白和CXCR4的表达有关。
- 许飞王国斌蔡开琳翟荣林
- 关键词：肠肿瘤雌激素受体ΒE-钙黏蛋白
