许琳
- 作品数：22 被引量：60H指数：4
- 供职机构：第二军医大学南京临床医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省重点实验室开放基金江苏省科技厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- rhBTR基因与基因探针的制备及其应用
- 本发明涉及rHBTR基因及其克隆方法以及rHBTR基因酶蛋白和基因探针的制备及其应用。该基因是从新鲜人脑组织中获取总RNA，通过RT-PCR方法，克隆、筛选得到全基因，并克隆测序，构建表达载体，导入工程菌，表达酶蛋白。可...
- 许琳徐江英戴荣
- 文献传递
- rhBTR基因与基因探针的制备及其应用
- 本发明涉及rHBTR基因及其克隆方法以及rHBTR基因酶蛋白和基因探针的制备及其应用。该基因是从新鲜人脑组织中获取总RNA,通过RT－PCR方法,克隆、筛选得到全基因,并克隆测序,构建表达载体,导入工程菌,表达酶蛋白。可...
- 许琳徐江英戴荣
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒C基因重组逆转录病毒的构建和在真核细胞的表达被引量：4
- 2003年
- 目的 构建含HBVC基因的重组逆转录病毒以用于慢性乙型肝炎的免疫治疗。方法 用PCR法扩增HBV的C基因片段 ,定向插入逆转录病毒质粒载体pLXSN中 ,重组质粒用脂质体转染包装细胞PT67,G418筛选抗性细胞 ,用抗性细胞培养上清液中的重组病毒感染NIH3T3、EL4和鼠骨髓来源的树突状细胞 (DC) ,用PCR检测目的基因的插入 ,用间接免疫荧光和流式细胞仪检测目的基因的表达 ,基因修饰的DC免疫C57BL 6鼠观察其诱导细胞免疫的能力。结果 含HBVC基因重组质粒载体经PCR、酶切和序列分析鉴定为阳性 ,转染PT67后经G418筛选获得抗性细胞 ,抗性细胞培养上清液中含有重组逆转录病毒 ,病毒效价达 3× 10 5CFU ml,感染NIH3T3和EL4细胞后PCR鉴定含目的基因 ,间接免疫荧光、流式细胞仪鉴定有HBcAg表达 ,基因修饰后的DC免疫C57BL 6鼠能诱导特异性CTL应答。
- 丁传林姚堃张天泰徐江英许琳彭光勇
- 关键词：乙型肝炎病毒逆转录病毒科基因表达
- 人脑硫氧还蛋白还原酶基因的克隆及测序
- 2003年
- 目的:从人脑组织中克隆硫氧还蛋白还原酶基因。方法;从胎脑中提取总RNA,采用RT-PCR技术,获得该基因的cDNA,构建pHBTR重组质粒,通过蓝白斑筛选及限制性内切酶鉴定,选择阳性克隆并测序。结果:测序结果显示该基因的开放读码框为1500 bp,用计算机软件处理后推导出相应的氨基酸序列为500个氨基酸的多肽链,将该基因与人胎盘TR基因比较发现两者的同源性为99％,在核苷酸序列上有5处碱基不同;且在氨基酸序列上也有4处不同。结论:首次获得中国人脑TR基因。
- 孙茂民徐江英夏春林许琳
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶基因克隆基因测序RT-PCR技术
- 叠氮钠、过氧化氢对SH-SY5Y细胞内硫氧还蛋白还原酶的影响被引量：2
- 2004年
- 过度氧化应激是诱发许多神经退变病的重要因素。叠氮钠(NaN3)是线粒体有氧呼吸链细胞色素c氧化酶(COX)的特异性抑制剂,过氧化氢(H2O2)释放氧自由基造成氧化损伤,两者都可以用于氧化应激情况下神经元损伤模型的建立。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)特异性的还原氧化型的硫氧还蛋白(thioredoxin,TRx),调节细胞中氧化还原的平衡。现以不同浓度NaN3或H2O2处理人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞),建立损伤模型。通过MTT法、形态学方法检测SH-SY5Y细胞损伤程度。同时,通过Western blot定量法、免疫细胞化学法,检测损伤的SH-SY5Y细胞中TR含量的改变,观察TR在胞内的分布。实验表明,NaN3、H2O2均以浓度依赖方式损伤SH-SY5Y细胞;TR分布于SH-SY5Y细胞的胞浆,表明TR是一种分泌蛋白,损伤后分布无明显变化。但一定浓度的NaN3作用后3h,胞内TR水平显著降低,即神经系统内呼吸链受损可抑制TR的表达,为神经退变病的防治提供了新的思路。
- 张婷婷高静杨晓荷许琳徐江英
- 关键词：叠氮钠过氧化氢SH-SY5Y细胞硫氧还蛋白还原酶神经退行性疾病
- 爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏期膜蛋白2AcDNA的克隆及序列分析被引量：3
- 2002年
- 目的 :克隆爱泼斯坦 巴尔病毒 (EBV)潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)基因 ,进一步研究其基因工程疫苗。方法 :用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出EBVB95 8株LMP2A全部编码蛋白的基因 ,并克隆至载体pGEM T中 ,通过α 插入失活、PCR及EcoRⅠ、SmaⅠ限制性内切酶双酶切等鉴定重组质粒 ;采用Sanger双脱氧终止法测定cDNA片段的核苷酸序列。结果 :克隆出LMP2A第 1个外显子到第 8个外显子的全部编码蛋白的cDNA ,测序结果与EB病毒B95 8原型株LMP2AcDNA作同源比较 ,完全一致。结论 :本实验克隆了LMP2A基因的全部编码蛋白的cDNA全长片段。
- 彭光勇姚堃许琳徐江英谢芳艺
- 关键词：爱泼斯坦-巴尔病毒克隆
- 两种激发光诱导的硫氧还蛋白还原酶分子荧光光谱研究
- 2005年
- 分别以波长为 253. 7nm的紫外光及波长为 407nm的紫色发光二极管为激发光源, 诱导硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase,TR)分子产生荧光,用组合式多功能光栅光谱仪记录荧光谱。通过分析比较TR溶液与溶剂的荧光光谱,得到了这 2种激发光诱导的TR分子荧光光谱的特性。该文的研究结果为进一步将荧光光谱法用于TR的定性、定量分析乃至结构分析提供了依据。
- 杨涛兰秀风骆晓森倪晓武许琳
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶荧光光谱激发波长
- 治疗肿瘤的自体免疫细胞及其制备方法
- 本发明涉及医学生物工程技术领域，是一种治疗肿瘤的自体免疫细胞及其制备方法，包括制备自体肿瘤组织mRNA；由自体血分离制备单核细胞；加细胞因子诱导扩增抗原递呈细胞；再用肿瘤mRNA转染抗原递呈细胞即得负载肿瘤抗原的抗原递呈...
- 许琳卢是月戴荣徐江英
- 文献传递
- 激发波长为253.7nm的TR溶液分子荧光光谱测定
- 2003年
- 观测 2 5 3 7nm的紫外光诱导的硫氧还蛋白还原酶 (TR)溶液的分子荧光光谱 ,用组合式多功能光栅光谱仪记录荧光谱 ,经分析、比较确定了TR在这种激发光源下分子荧光光谱的 9个特征峰 ,为荧光光谱法进一步用于TR的定性。
- 杨涛兰秀凤许琳骆晓森高淑梅蔺凯成蓥徐爱莲
- 关键词：硫氧还蛋白还原酶荧光光谱
- 透析袋电洗脱法在蛋白质回收和纯化中的应用被引量：23
- 2003年
- 将初步纯化后的已构建的人脑硫氧还蛋白还原酶基因PET HBTR表达产物进行SDS PAGE电泳 ,分离纯化目的蛋白 ,免疫动物制备抗体。SDS PAGE电泳鉴定确证该抗体具有很高的纯度 ,抗体滴度可达 1∶10 0 0。改进后的透析袋电洗脱法较适合在大批量蛋白纯化之前进行少量蛋白的纯化 。
- 黄轶华超徐江英卢是玥许琳
- 关键词：蛋白质回收纯化
