蒋秀芹
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：南京医科大学第二附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 介导人血红素加氧酶-1基因真核表达质粒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建含人血红素加氧酶-1(HO-1)基因的重组pcDNA3.1质粒并进行鉴定。方法:利用分子生物学技术,从人肝脏标本中提取出RNA,进行RT-PCR后,做TA克隆,成功获得pMD/19-HO-1质粒,采用限制性内切酶BamHⅠ、EcoRⅠ从pMD/19-HO-1质粒中将目的基因片段切出,克隆到质粒pcDNA3.1的相应酶切位点中,构建重组质粒pcDNA3.1-HO-1,采用限制性酶切、DNA测序鉴定,将构建好的质粒瞬时转染ECV304细胞株,Western blot测定HO-1表达。结果:酶切、测序鉴定证实插入位点及方向与预期完全一致,测序证实hHO-1与Gene Bank提供的原始序列完全一致,瞬时转染细胞后HO-1蛋白表达明显增高。结论:成功构建了含人血红素加氧酶-1基因的真核表达质粒,为进一步研究该基因在糖尿病血管并发症中的作用奠定基础。
- 苏建华李慧敏缪珩鲁一兵蒋秀芹
- 关键词：血红素加氧酶-1真核表达质粒基因重组
