范旭东
- 作品数：87 被引量：205H指数：11
- 供职机构：中国农业科学院果树研究所更多>>
- 发文基金：国家葡萄产业技术体系建设项目国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生自动化与计算机技术生物学更多>>
- 基于巢式反转录-聚合酶链式反应技术检测葡萄病毒A和葡萄病毒B被引量：2
- 2019年
- 皱木复合病在世界范围内普遍发生,是引起葡萄木质部畸形的一类病害的统称,在沙地葡萄、Kober5BB和LN33品种上表现茎痘、茎沟和栓皮等症状,其中葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)与Kober5BB品种上出现茎沟症状有关,而葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)与LN33品种上出现栓皮症状有关。
- 胡国君董雅凤张尊平范旭东任芳
- 关键词：检出率反转录-聚合酶链式反应
- 葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立被引量：18
- 2012年
- 以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)、沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)和葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳李亚惠
- 关键词：多重RT-PCR
- 苹果茎痘病毒外壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：5
- 2010年
- 利用基因重组技术将苹果茎痘病毒Applestempittingvirus(ASPV)完整cp基因在大肠杆菌中表达,以纯化蛋白为抗原免疫新西兰兔制备其抗血清,并采用ACP-ELISA法测定其效价和应用PAS-ELISA法对其抗血清的有效性进行初步鉴定。结果显示,cp基因获得了高效表达,表达产物与Anti-His抗体产生特异性免疫反应。制备的抗血清具有较强的特异性,效价为1:800。PAS-ELISA检测结果显示,9个苹果样品中有8个样品与RT-PCR检测结果一致,仅1个样品RT-PCR检测为阳性,而PAS-ELISA检测为阴性。表明所制备的抗血清具有一定的应用潜力。
- 李丽丽张志宏董雅凤张尊平范旭东裴光前
- 关键词：苹果茎痘病毒外壳蛋白抗血清
- 葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化被引量：2
- 2018年
- 葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。
- 任芳张尊平范旭东胡国君李正男董雅凤
- 关键词：外壳蛋白基因植物表达载体烟草
- 我国葡萄主栽区卷叶病相关病毒种类的检测分析被引量：11
- 2011年
- 田间调查200个葡萄品种,结果82个品种表现葡萄卷叶病症状,其中欧亚种群表现葡萄卷叶病症状的品种最多,发病率最高,发病症状最重;欧美杂种发病率和严重度均比欧亚种群低;未发现美洲种群的品种表现葡萄卷叶病症状。从58株表现卷叶病的葡萄上采集休眠枝条进行卷叶病毒ELISA和RT-PCR检测,葡萄卷叶病毒-1,2,3,4,5和7(GLRaV-1,2,3,4,5和7)等6种葡萄卷叶病毒的检出率分别为20.7%,17.2%,62.1%,3.4%,5.2%和15.5%。回收PCR产物进行克隆和序列分析,并将测序结果提交至GeneBank。以葡萄卷叶病毒HSP70基因序列构建系统进化树分析其进化关系,GLRaV-1、3和7,GLRaV-2、4和5分别聚为2大类,其中GLRaV-1和3,GLRaV-4和5在各自的聚类中关系更近。
- 裴光前董雅凤张尊平范旭东任芳
- 关键词：葡萄卷叶病毒田间调查RT-PCR进化树
- 葡萄A病毒辽宁分离物外壳蛋白基因克隆及序列变异分析
- 葡萄皱木复合病(Rugose wood complex disease)是为害葡萄的重要病毒病之一,可造成葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退死亡.葡萄A病毒(Grapevine virus A,GVA)是...
- 任芳范旭东董雅凤张尊平王教敏
- 关键词：外壳蛋白基因克隆
- 苹果4个器官不同部位RNA提取及病毒检测效果比较
- 2022年
- 为探究苹果各器官不同部位的RNA提取和病毒检测效果,以携带3种病毒的苹果植株为试验材料,采用吸附柱法提取苹果的花(雌蕊、花药、花丝、花瓣、花萼、花托和花柄)、叶片(叶柄、叶肉和叶脉)、果实(果柄、果皮、果肉、果核、种皮和胚乳)和枝条(韧皮部)4个器官共17个组织部位的总RNA,利用常规RT-PCR对不同部位进行病毒检测,并采用实时荧光定量PCR分析病毒在不同部位的相对含量。结果表明,苹果不同器官的RNA提取效果存在差异,叶片的浓度最高,其次是花和枝条,果实的浓度最低。花药、花丝、花柄在花中提取效果较好、胚乳和叶柄分别在果实和叶片中提取效果最好。除胚乳外,其余16个组织部位均能检测出3种苹果病毒。定量分析表明,苹果病毒在花中的相对含量最高,在雌蕊、种皮和叶柄中的相对含量分别高于花、果实和叶片的其他组织部位。此外,3种病毒在果实和叶片的不同组织部位的含量变化趋势相似,在花的不同组织部位的分布存在一定的差异。
- 贾晓君董雅凤张尊平范旭东任芳张宝东胡国君
- 关键词：苹果RNA提取病毒检测
- 葡萄A病毒外壳蛋白原核表达及抗血清制备被引量：2
- 2014年
- 葡萄A病毒（Grapevine virus A，GVA）为线性病毒科（Flexiviridae）葡萄病毒属（Vitivirus）的代表种，是葡萄皱木复合病（rugose wood complex disease）的重要病原之一，可引起葡萄嫁接成活率下降、春季萌芽延迟、生长减弱甚至衰退死亡等危害。GVA为线状单链RNA病毒，基因组共编码5个开放阅读框（ORF1-5），其中ORF4 编码外壳蛋白（coat protein， CP），是病毒粒子包裹和系统移动所必需的功能蛋白。GVA自然寄主为葡萄，机械摩擦可侵染本氏烟等草本寄主，由于嫁接和无性繁殖材料调运等因素造成该病毒远距离传播，目前在世界多个国家和地区均有发生。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君朱红娟
- 关键词：抗血清制备原核表达嫁接成活率VIRUSRNA病毒
- 一种简化的苹果田间苗脱毒及繁育方法
- 本发明公开了一种简化的苹果田间苗脱毒及繁育方法。属于农业栽培技术领域。包括以下步骤：植物材料的前处理、脱毒处理、茎尖再生、再生植株的病毒检测和无毒苹果苗的繁育。本发明利用苹果嫩稍进行组织培养，材料容易获取，缩短了试管苗的...
- 胡国君董雅凤张尊平范旭东任芳
- 文献传递
- 葡萄病毒研究最新进展被引量：12
- 2014年
- 对近5年关于葡萄病毒分离鉴定、基因组及遗传变异、传毒介体、寄主互作、检测技术、脱毒和抗病毒技术等方面的最新研究进展进行了综述。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊
- 关键词：葡萄病毒
