胡志明
- 作品数：42 被引量：168H指数：9
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广州市科技计划项目军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- GFP-SA融合蛋白的表达纯化及其锚定修饰肿瘤细胞的研究被引量：1
- 2008年
- GFP(绿色荧光蛋白)-SA(链亲和素)双功能融合蛋白的制备及其鉴定研究,以展示所建立的技术平台,即用含链亲和素的双功能融合蛋白对生物素化的细胞表面进行高效的锚定修饰。构建原核表达载体pET24d/GFP-SA转化大肠杆菌BL21(DE3)。用IPTG诱导重组蛋白的表达,用镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化。用制备的GFP-SA双功能融合蛋白,对B16肿瘤细胞已生物素化的细胞表面进行修饰,经荧光显微镜和流式细胞仪进行修饰效率分析。此外,用MTT法检测细胞表面修饰对肿瘤细胞活力及其生长情况的影响。GFP-SA重组融合蛋白在大肠杆菌实现了高效表达(约占细菌总蛋白的20%),通过纯化和复性制备的GFP-SA双功能融合蛋白具有双重活性,即:链亲和素介导的、对生物素高效特异的结合活性,和GFP发射绿色荧光的活性,并能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞。此外,GFP-SA双功能融合蛋白的细胞表面修饰对细胞的活力及其生长无显著影响。GFP-SA融合蛋白能高效修饰表面已生物素化的肿瘤细胞,可用作肿瘤疫苗研究的示踪蛋白及实验对照体系。
- 周明乾林来兴妹胡志明苏华徐翠香高基民
- 关键词：绿色荧光蛋白链亲和素融合蛋白肿瘤细胞
- 大肠杆菌表达的人血管内皮细胞生长因子的复性与纯化研究(英文)被引量：4
- 2006年
- 以包涵体的形式在大肠杆菌中表达人血管内皮细胞生长因子(VEGF121) , 采用发酵罐进行工程菌的高密度发酵,得到菌干重 46 g/L, VEGF121 包涵体 4.5 g/L。包涵体经洗涤、溶解、超滤法复性, 得率为 81%。复性后的目标蛋白经离子交换色谱及 Sepharcry S-100 凝胶过滤色谱纯化, 目标蛋白的纯度达到 95%, 目标蛋白的总得率 31%。采用该工艺制备的 VEGF121 能刺激人脐静脉血管内皮细胞增殖, 具有天然 VEGF 生物学活性。
- 胡志明马骊周明乾高基民王小宁
- 关键词：血管内皮细胞生长因子
- 去甲斑蝥素对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用被引量：15
- 2010年
- 目的本研究旨在明确去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)对肿瘤细胞DNA复制起始蛋白Cdc6的抑制作用。方法采用MTT法检测NCTD对多种肿瘤细胞,包括:HeLa、HepG2、Jurkat以及Ramos细胞增殖的抑制作用;采用Westernblotting检测NCTD对细胞Cdc6蛋白表达的影响;BrdU掺入实验检测NCTD对肿瘤细胞DNA复制的影响。结果 NCTD显著抑制上述4种肿瘤细胞的增殖,肿瘤细胞Cdc6蛋白被降解,DNA复制受到明显抑制。结论 NCTD可诱导多种肿瘤细胞Cdc6蛋白的降解并有效抑制肿瘤细胞的DNA复制及增殖,Cdc6蛋白可能是NCTD的一个有效抗肿瘤靶点。
- 李金龙蔡于琛胡志明高基民
- 关键词：去甲斑蝥素CDC6DNA复制
- Wnt基因的类别及功能被引量：5
- 2007年
- Wnt是一类癌基因,在动物发育过程中具有广泛的作用。该文介绍哺乳动物基因组中19个Wnt基因的功能。
- 向阳高基民胡志明周明乾
- 关键词：癌基因
- 预刺激淋巴细胞的伸瘤运动
- 2005年
- 目的对淋巴细胞的伸瘤现象进行描述,并探讨伸瘤的一些影响因素及伸瘤运动与淋巴细胞功能的关系。方法分离外周血淋巴细胞,用PHA、IL-2、a-CD3、PHA+IL-2预刺激后与口腔上皮癌细胞混合作用。于倒置显微镜下直接观察淋巴细胞的粘(伸)瘤情况;取混合细胞经冷丙酮固定并Gimasa染色后在镜下观察淋巴细胞与瘤细胞作用情况,并于1、2、4、6h,取混合淋巴细胞于扫描电镜下观察伸瘤运动的发生、发展变化。结果与未预刺激组比较,PHA组能提高粘瘤指数,IL-2、a-CD3、PHA+IL-2均能提高淋巴细胞的粘(伸)瘤指数,以PHA+IL-2对粘(伸)瘤率的提高作用最为显著,电镜下发现在粘(伸)瘤运动过程中,外周血淋巴细胞的形态也发生变化。结论淋巴细胞预刺激能促进伸瘤运动的发生,伸瘤运动可能是淋巴细胞的一种杀伤方式。
- 杨介钻马骊何小维周明乾胡志明王小宁
- 关键词：淋巴细胞预刺激扫描电镜
- 链亲和素－白细胞介素2融合蛋白
- 本发明提供一种融合蛋白，该蛋白由接头肽连接一链亲和素和一白细胞介素－2构成，其中所述的接头肽的氨基酸序列为SerSerGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySer。本发明融合蛋白同时具有...
- 高基民胡志明周明乾林来新妹
- 文献传递
- CD80-链亲和素融合蛋白锚定的鼻咽癌CNE2细胞增强T细胞的杀伤活性被引量：1
- 2010年
- 目的:制备CD80-链亲和素(streptavidin,SA)融合蛋白,研究CD80-SA锚定的鼻咽癌CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。方法:pET21a-CD80-SA-6His质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导CD80-SA融合蛋白的表达,经Ni-NTA亲和层析纯化后透析复性。流式细胞仪检测CD80-SA融合蛋白在CNE2细胞表面的锚定效率;LDH释放法检测CD80-SA锚定的CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。结果:成功制备和纯化了CD80-SA融合蛋白。CNE2细胞表面低表达CD80分子[(2.2±0.18)%]。CD80-SA融合蛋白可有效地锚定于生物素化的CEN2细胞表面,锚定效率可达73%。CD80-SA锚定的CNE2细胞可有效激活T细胞的杀伤作用,效靶比在1∶1、1∶20、1∶40时T细胞的杀伤率分别约为(37±3.12)%、(51±2.63)%和(58±2.47)%,均显著高于对照CNE2细胞激活的T细胞(均P<0.01)。结论:CD80-SA融合蛋白可有效锚定于生物素化的CNE2细胞表面,从而增强T细胞对CNE2细胞的杀伤活性。
- 李金龙常红胡志明高基民
- 关键词：CD80链亲和素鼻咽癌细胞T细胞杀伤
- 细胞膜表面锚定修饰技术与新型肿瘤细胞疫苗
- 何秋山尹卫华张信基张振李金龙石小军胡志明许晓玲谭万龙高基民
- 课题组发明了一种快速、高效、安全的细胞膜表面锚定修饰技术。这个技术平台的基本原理是充分利用了细胞膜表面蛋白质的伯氨(即-NH2)易生物素化以及生物素与链亲和素的高效而超强结合-这两个特性。该课题依据该技术平台，研制出了链...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤细胞疫苗肿瘤治疗
- SA/TNFα双功能融合蛋白的克隆、表达及活性研究
- 2010年
- 目的:制备链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白,并对其活性进行研究。方法:构建原核表达质粒pET24a-SA-TNFα和pET21a-TNFα-SA;转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲合层析纯化后进行透析复性;流式细胞仪检测融合蛋白对生物素化MB49细胞的锚定活性,L929细胞杀伤实验检测融合蛋白的TNFα活性。结果:成功制备了两种链亲合素标记的TNFα双功能融合蛋白SA-TNFα和TNFα-SA;其表达量分别约占总蛋白的30%和23%,纯化效率均达90%以上;两种融合蛋白均能有效地锚定于生物素化的MB49细胞表面,其锚定效率分别为95%和92%;L929细胞杀伤实验显示SA-TNFα具备TNFα活性,但TNFα-SA不具备TNFα活性。结论:成功制备了具备双功能活性的链亲合素标记的TNFα融合蛋白,TNFα在该融合蛋白中的位置与其活性有重要的关系。
- 李金龙徐翠香胡志明高基民
- 关键词：人肿瘤坏死因子Α链亲和素融合蛋白
- 一种用于治疗股骨头坏死的复合制剂
- 本发明公开了一种用于治疗股骨头坏死的复合制剂，由具有促进血管生成作用的血管内皮细胞生长因子(VEGF121)脂质体缓释剂和具有抗炎作用的肿瘤坏死因子受体(TNFR－FC)脂质体缓释剂复合而成，其中VEGF121脂质体缓释...
- 王小宁胡志明马骊
- 文献传递
