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睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1互作蛋白质的筛选与鉴定被引量：2: 2008年; 小鼠睾丸生殖细胞瘤(testicular germ cell tumour,TGCT)易感基因Dnd1属于RNA结合蛋白基因家族成员.Dnd1在进化中具有保守性,Dnd1缺乏导致小鼠原始生殖细胞(primordialgerm cell,PGC)的丧失、TGCT的发生和部分胚胎死亡,但Dnd1作用机制还未明了.利用酵母双杂交系统,构建小鼠Dnd1基因诱饵载体pDBLeu-Dnd1,筛选10.5 d的小鼠胚胎cDNA文库,成功筛选到4个与Dnd1相互作用蛋白,其中之一为原癌基因Jun蛋白;进一步的酵母双杂交实验和GST pull down实验再次确认Dnd1与Jun蛋白之间的相互作用.研究发现Dnd1新的相互作用蛋白,这为探明其信号传导通路及Dnd1致病机制研究建立了基础.; 张菁罗畅丁小凤张健彭小宁; 关键词：酵母双杂交系统蛋白质相互作用

人KCTD1基因的克隆及功能研究: 我们从人脑cDNA文库中鉴定了一个新的钾离子通道蛋白四聚体1/(KCTD1/),但目前还没有KCTD1的相关研究报道。我们对人类KCTD1基因的结构和功能进行了初步研究。KCTD1包括7个外显子,编码257个氨基酸,蛋白...; 罗畅; 关键词：转录抑制; 文献传递

EPS8蛋白的表达、多克隆抗体制备及其亚细胞定位被引量：3: 2008年; EPS8(EGFR pathwaysub strate 8)是epidermal growth factor receptor(EGFR)重要的激酶活性底物之一,近年有研究表明其与神经胶质瘤密切相关.为了对该基因进行深入的功能研究,成功地将EPS8基因构建于原核表达载体pGEX-4T-2,转化BL21(DE3)获得融合表达产物,用GST-EPS8(-10-230aa)免疫新西兰大白兔获得兔抗EPS8多克隆抗体.采用Western Blot,用该抗体检测EPS8基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针对EPS8蛋白的专一性,可用于对EPS8的结构和功能研究.同时,用该抗体通过荧光免疫细胞对4种神经胶质瘤细胞系进行定位分析发现,EPS8蛋白主要分布于胶质瘤细胞的细胞质中.; 罗畅丁小凤孙一兵韩梅; 关键词：亚细胞定位

小鼠Dnd1酵母双杂交系统诱饵载体的构建及自身激活检测被引量：1: 2008年; 目的:构建用于酵母双杂交系统的诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其是否有自身激活作用。方法:设计引物引入SalⅠ、NotⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,连至pMD18-T载体。酶切验证及测序正确后,用SalⅠ,NotⅠ内切酶分别消化pMD-T-Dnd1及pDBLeu载体而后构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并检测其在G IBCO/BRL公司的酵母双杂交系统中的自身激活作用。结果:成功构建诱饵载体pDBLeu-Dnd1,并证明其在该系统中无自身激活作用。结论:pDBLeu-Dnd1可应用该酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白。; 张菁罗畅丁小凤张健彭小宁; 关键词：酵母双杂交系统

Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞增殖的抑制作用被引量：4: 2009年; 小鼠睾丸生殖细胞瘤易感基因Dnd1编码的蛋白是一个在进化中保守的RNA结合蛋白.为探讨小鼠Dnd1的蛋白亚细胞定位和对细胞增殖的影响及其机制,利用生物信息学技术,采用组合的亚细胞定位分析软件对Dnd1进行真核生物亚细胞定位预测;利用融合绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)定位的方法,通过构建pEGFP-Dnd1重组质粒,将重组质粒pEGFP-Dnd1转染HeLa细胞和GC-1细胞,在荧光显微镜下观察Dnd1的蛋白亚细胞定位;用MTT法和流式细胞技术测定Dnd1过表达对HeLa细胞的增殖能力的影响和细胞周期的改变;在HeLa细胞系中检测Dnd1对AP-1转录活性的影响.结果表明:①生物信息学预测Dnd1主要在细胞核表达,在细胞质中也有少量表达;荧光显微镜下观察发现,Dnd1蛋白主要定位在细胞核,在细胞质中也有少量分布;②Dnd1基因在HeLa细胞系中的过表达抑制细胞增殖和诱导细胞周期G1期阻滞;③Dnd1抑制AP-1的转录活性,从而抑制AP-1介导的转录是Dnd1抑制细胞增殖的可能机制.本研究初步明确了Dnd1的蛋白亚细胞定位及其对HeLa细胞的生长抑制作用,这为进一步研究Dnd1基因的功能建立基础.; 张菁丁小凤罗畅张健彭小宁; 关键词：绿色荧光蛋白细胞增殖

长沙地区民居建筑文化传统的研究: 从人类生产水平的不断发展和生活环境需求出发，在运用科技改善人类生存条件的同时，如何提高人类生活与工作的文化环境，为建筑设计带来新的发展机遇：在全球化高度统一的情况下，重新发掘和塑造城市特色的呼声已越来越高涨。中国灿烂的千...; 罗畅; 关键词：建筑文化民居建筑建筑特征; 文献传递

长沙地区居民建筑文化传统的研究: 从人类生产水平的不断发展和生活环境需求出发,在运用科技改善人类生存条件的同时,如何提高人类生活与工作的文化环境,为建筑设计带来新的发展机遇:在全球化高度统一的情况下,重新发掘和塑造城市特色的呼声已越来越高涨。中国灿烂的千...; 罗畅; 关键词：湖湘文化民居建筑; 文献传递

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罗畅