罗海华
- 作品数：29 被引量：37H指数：4
- 供职机构：南方医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金南方医科大学南方医院院长基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MRP8/MRP14对宫颈癌细胞增殖的影响及机制被引量：6
- 2016年
- 目的探讨髓样相关蛋白8/14异源二聚体(MRP8/MRP14)对宫颈癌细胞增殖的影响及机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,加入MRP8/MRP14(观察组),另设对照组加入等体积PBS,于培养12、24、48、72 h分别采用CCK8法检测两组细胞增殖能力。取Hela细胞进行核质分离,加入MRP8/MRP14共培养30 min,采用Western blot法检测细胞凋亡相关信号通路蛋白p38 MAPK、JNK及细胞增殖相关信号通路蛋白ERK1/2、NF-κB表达。将Hela细胞分为MRP8/MRP14组和p38 MAPK、JNK、ERK1/2、NF-κB抑制剂组,RP8/MRP14组加入MRP8/MRP14;抑制剂组先分别加入p38 MAPK、JNK、ERK1/2、NF-κB抑制剂预处理2 h,再加入MRP8/MRP14;采用CCK8法观察各组细胞增殖能力。结果观察组加入MRP8/MRP14培养12、24、48、72 h后,细胞增殖能力均高于对照组,且随时间延长,细胞增殖能力逐渐增强(P均<0.05)。观察组加入MRP8/MRP14培养30 min后,与对照组比较,p38 MAPK、JNK、ERK1/2活性明显升高,NF-κB在细胞核中的表达升高(P均<0.05)。p38 MAPK、JNK抑制剂组细胞增殖能力较MRP8/MRP14组增强;ERK、NF-κB抑制剂组细胞增殖能力较MRP8/MRP14组减弱(P均<0.05)。结论 MRP8/MRP14能够促进Hela细胞增殖,其机制与p38 MAPK、JNK、ERK1/2及NF-κB等多条相关信号通路被激活有关。
- 胡兵荣王娟罗海华姜勇
- 关键词：宫颈癌细胞增殖
- 组蛋白变异体macroH2A1真核表达载体构建及其细胞内定位的研究
- 2012年
- 目的构建带有血凝素(HA)标签的小鼠组蛋白变异体macroH2A1(mH2A1)的真核表达载体,并观察其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况。方法提取内毒素休克的BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应获得内毒素休克小鼠肝脏组织的cDNA,以cDNA为模板使用PCR方法扩增得到mH2A1编码序列,并将其酶切后连接至带有HA标记的载体pcDNA3-HA上;对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定。随后将重组质粒瞬时转染293T细胞,利用荧光显微镜观察。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明pcDNA3-mH2A1-HA真核表达质粒构建正确;经转染实验发现,该质粒能够在293T细胞中表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论 mH2A1真核表达载体pcDNA3-mH2A1-HA的成功构建及明确其在哺乳动物细胞中的具体核定位,为进一步研究mH2A1作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。
- 张菁罗海华王娟卢康荣姜勇
- 关键词：血凝素类细胞内定位
- 内毒素血症Rig-Ⅰ表达调控的机制研究
- 2017年
- [目的]探讨内毒素血症Rig-Ⅰ表达调控的机制。[方法](1)DNA-pull down、2D-DIGE结合生物质谱技术筛选分离、鉴定对照和内毒素血症小鼠肝组织核蛋白与Rig-Ⅰ基因启动子结合的差异蛋白质;(2)q PCR和细胞免疫荧光检测LPS刺激RAW264.7细胞hnRNP A3 mRNA表达及细胞内定位。[结果](1)筛选鉴定得到hnRNP A3等7种与内毒素血症Rig-Ⅰ基因启动子结合的蛋白质;(2)LPS刺激下hnRNP A3 mRNA显著升高(P<0.01),且具有明显的细胞核定位。[结论]共有7种蛋白质参与内毒素血症Rig-Ⅰ基因表达调控,为进一步Rig-Ⅰ表达调控的研究奠定了良好基础。
- 王娟赵晓辉罗海华姜勇
- 关键词：内毒素血症启动子DOWN
- 带中性电荷的细胞穿透肽及作为细胞内运送载体的用途
- 一类带中性电荷细胞穿透肽，在生理条件下净电荷为0，并提供具体的氨基酸序列。并提供中性电荷细胞穿透肽作为细胞内运送载体的用途以及带中性电荷细胞穿透肽作为治疗药物在细胞内的运送载体的医药用途及作为造影剂在细胞内的运送载体的医...
- 姜勇刘芸罗海华
- 文献传递
- HuR蛋白118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1的转录后调控
- 2014年
- 目的探讨RNA结合蛋白HuR 118位苏氨酸对热应激状态下的双特异性磷酸酶1(DUSP1)转录后调控机制。方法构建HuR 118位苏氨酸突变体真核表达质粒,并用脂质体转染NIH 3T3细胞,Real-time PCR检测其对DUSP1 mRNA水平的影响,Western blotting检测其对DUSP1蛋白表达的效应。结果 (1)小鼠HuR不同突变体真核表达载体质粒构建成功;(2)热休克刺激后,HuRT118磷酸化明显增强;(3)过表达HuR(WT)与HuR(T118E),经过热休克刺激后,DUSP1 mRNA水平明显升高,其蛋白表达也有上调;过表达HuR(T118E)时,DUSP1的mRNA水平明显上调,而蛋白水平在热休克刺激前后均上调,其表达变化无差异而过表达HuR(T118A),热休克刺激前后DUSP1 mRNA水平及蛋白表达均下调;(4)热休克刺激下,HuR(WT)可以从细胞核内转位到细胞质并形成颗粒;当过表达HuR(T118E)时,在静息状态下,HuR(T118E)弥散分布于细胞质,热休克刺激会使其在细胞质形成明显的颗粒;而过表达HuR(T118A)时,热休克刺激并不能使其移位出核。结论 RNA结合蛋白HuR参与了DUSP1的转录后调控,可以通过其118位的苏氨酸磷酸化提高热休克刺激后的DUSP1的基因及蛋白水平。
- 张传丽罗海华姜勇
- 关键词：转录后调控
- 晚期糖基化终末产物受体胞外段不同功能段在前列腺癌细胞中的表达与定位
- 2012年
- 目的构建晚期糖基化终末产物受体(RAGE)胞外段不同功能段V/VC1真核细胞表达载体,并在前列腺癌细胞株PC-3中表达,为进一步研究其在前列腺癌发病中的作用和机制打下基础。方法采用PCR方法扩增RAGE不同功能段V/VC1的序列,利用分子克隆技术将其重组于pcDNA3-HA载体中。利用PCR和测序鉴定克隆正确性。转染PC-3细胞,用Western blotting检测其表达,免疫荧光检测其在细胞中的定位。结果克隆的RAGE不同功能段V/VC1真核表达载体完全正确,Western blotting检测到RAGE不同功能段V/VC1的表达,免疫荧光检测其主要定位于细胞浆中。结论成功地构建了RAGE不同功能段V/VC1真核表达载体,其能够在PC-3细胞中表达。
- 李炬聪宋先璐陆斌李煜生洪英洽邓鹏赵楚标罗海华赵善超姜勇
- 关键词：晚期糖基化终末产物受体真核表达载体前列腺癌
- 利用噬菌体展示技术构建细胞穿透肽表达文库的方法
- 一种利用噬菌体展示技术构建细胞穿透肽表达文库的方法，采用噬菌体展示技术，结合全细胞筛选模式，筛选具有细胞膜穿透活性的多肽；再利用所筛选的胞穿透肽构建细胞穿透肽原核表达文库。选用Ph.D.‑C7C噬菌体展示肽库，将随机七肽...
- 姜勇刘芸罗海华
- 文献传递
- PXD101诱导人前列腺癌细胞PC3凋亡的线粒体信号通路被引量：5
- 2017年
- 目的:探讨PXD101(又称belinostat)诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的线粒体通路。方法:PXD101以不同刺激时间和剂量处理PC3细胞,CCK-8法检测细胞的活力;流式细胞术检测细胞的凋亡率和线粒体膜电位;Western blot检测线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)和Bax;caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。结果:PXD101能以时间和剂量依赖的方式抑制PC3细胞的存活(P<0.05),流式细胞术检测结果表明PXD101处理后PC3细胞的凋亡率明显增加(P<0.01)。PXD101能时间依赖性致线粒体膜电位降低和Bcl-2蛋白含量明显下降,Bax蛋白含量上升,促进线粒体释放Cyt C蛋白,caspase-3活性明显增强。结论:PXD101通过线粒体途径诱导人前列腺癌细胞系PC3细胞凋亡。
- 胡明珠李磊曹蕾张一梅罗海华胡水旺刘爱华姜勇
- 关键词：前列腺癌线粒体PC3细胞
- NF-κB信号通路对BLP耐受巨噬细胞iNOS表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的通过检测细菌脂蛋白(BLP)耐受巨噬细胞感染细菌时诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达情况及其表达是否受NF-κB信号通路调控,探讨BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的机制。方法比较BLP耐受和非耐受(Naive)小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMM)对大肠杆菌的吞噬及杀灭情况,评价BLP耐受巨噬细胞的细菌清除能力;用定量PCR技术检测BLP耐受的BMM内iNOS mRNA表达情况和细胞免疫荧光技术观察p65从胞质向胞核的移位情况;最后观察抑制NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达的影响。结果 BLP耐受巨噬细胞吞噬细菌和杀灭细菌的能力较Naive细胞显著增强(P<0.05);iNOS mRNA表达水平较Naive细胞显著(P<0.05);如果抑制BLP耐受巨噬细胞NF-κB通路活化对iNOS mRNA表达有显著影响(P<0.05)。结论本研究结果提示细菌脂蛋白耐受通过NF-κB通路活化增强细菌感染巨噬细胞iNOS表达。
- 李雪王义乾罗海华钟玙沄雷烨铭雷山蔡军伟姜勇刘靖华
- 关键词：INOS
- LPS刺激小鼠不同时间点肺组织IncRNA及microRNA测序分析
- 脓毒症(sepsis)是全球范围内急危重症,病死率居高不下,每小时将近1000人死于脓毒症。目前,由于对脓毒症发病机制研究仍不透彻,导致临床上对脓毒症的治疗不及时、疗效不显著。细菌脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌细胞壁的主...
- 罗海华
- 关键词：LPSMICRORNA
