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秦堃: 作品数：20 被引量：28H指数：3; 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>; 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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中东呼吸综合征冠状病毒的实验室检测以及疫苗和治疗研究进展被引量：6: 2016年; 中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是2012年首次发现的具有高病死率、可感染人的一种新型冠状病毒,给全球公共健康带来严重威胁.目前,针对MERS-CoV的病毒分离、免疫学及核酸检测方法已经建立,特异性的疫苗和治疗药物也正在研发之中,成为控制MERS-CoV感染蔓延的有力武器.本研究就MERS-CoV的实验室检测及疫苗和治疗研究进展作一综述,以期为MERS-CoV的防控提供参考.; 卢帅秦堃谭文杰; 关键词：疫苗

全人源化抗中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体: 本发明公开了全人源化抗中东呼吸综合征冠状病毒中和抗体。本发明公开的中和抗体，由重链和轻链组成，轻链由VL和CL组成，重链由VH和CH组成，VH和VL均由决定簇互补区和框架区组成，决定簇互补区由CDR1、CDR2和CDR3...; 谭文杰周剑芳邓瑶秦堃卢帅余双庆刘雪王文玲舒跃龙; 文献传递

新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型的建立被引量：2: 2011年; 建立新甲型H1N1流感病毒小鼠致死模型,为研究致病性、宿主适应性以及疫苗保护性提供动物模型,并寻找病毒在适应宿主过程中影响毒力和适应性的关键位点。将新甲型H1N1流感病毒A/四川/SWL1/2009 H1N1在小鼠中连续传15代,各代次毒株均在MDCK细胞上增殖后进行测序,根据序列分析结果选择6个传代毒株感染小鼠,连续监测14 d体重和死亡情况;并对第14代和15代病毒在噬斑实验纯化后克隆和测序分析。原代病毒不致死BABL/C小鼠,经动物体内连续传代适应宿主动物后,其毒力增强,具体表现为所选的6个传代毒株中第7、11、15代毒株可以100%致死试验小鼠;分析这6个传代毒株的全基因组表明这些毒株的部分氨基酸位点发生突变。新甲型H1N1流感病毒经小鼠体内连续传代后,建立了小鼠致死模型,病毒毒力增强可能与某些氨基酸位点的改变有关。; 朱云刘丽琦周剑芳朱闻斐秦堃于在江王大燕赵翔李希妍蓝雨舒跃龙; 关键词：全基因组分析

干扰素诱导跨膜蛋白3对流感疫苗免疫反应的影响被引量：1: 2020年; 干扰素诱导跨膜蛋白3(Interferon-induced transmembrane protein 3,IFITM3)的单核苷酸突变位点(Singlenucleotide polymorphism,SNP)rs12252-C在中国人群的比例高,与流感病毒H1N1/09感染后疾病的严重性相关。本文主要探索流感病毒三价灭活疫苗(Trivalent inactivated vaccine,TIV)免疫IFITM3敲除小鼠后机体免疫反应的变化。采用转录激活因子样效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)技术构建IFITM3敲除小鼠模型,TIV肌肉注射免疫小鼠,使用流式细胞术检测小鼠脾脏的获得性免疫细胞,如T细胞、B细胞,以及固有免疫细胞,如自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK细胞)、树突状细胞(Dendritic cell,DC)、巨噬细胞(Macrophage,Mф)、中性粒细胞等的数量变化情况。TIV免疫后7d,IFIMT3敲除小鼠脾脏CD8^+T细胞、NK细胞的数量和活化水平升高,生发中心(Germinal center,GC)的B细胞数量下降,CD4^+T细胞、DC、Mф、中性粒细胞的数量没有显著变化。本研究提示,IFITM3敲除影响了TIV免疫后小鼠脾脏免疫细胞的数量和活化水平,为IFITM3与免疫反应的关系研究奠定了基础。; 雷娜雷娜鲁健孙强郭俊峰周剑芳郭俊峰李梓秦堃孙灵利; 关键词：流感病毒免疫反应

B型流感病毒系间重配进化方式对其生长特性的影响被引量：4: 2016年; 研究系间重配进化方式对B型流感病毒生长特性的影响。挑选2013-2015年中国分离的B型流感病毒野生型及系间重配代表毒株并传代扩增。以相同量的病毒感染细胞,检测不同时间点的TCID50值,测定生长曲线;进一步对病毒神经氨酸酶动力学常数（Km值）进行检测,分析神经氨酸酶活性。病毒生长曲线显示2013年和2014年病毒在感染后48h达滴度高峰,维持至72h后滴度逐渐下降;2015年病毒滴度则在24h达到高峰。2013年系间重配株B/福建同安/1565/2013与野生型病毒相当,而2013-2015年的其他系间重配病毒的生长曲线的峰值均不及同期的野生型病毒。通过神经氨酸酶活性实验得到病毒的Km值,显示系间重配病毒中B/福建同安/1565/2013NA蛋白的亲和力最高。2014年和2015年系间重配病毒的NA亲和力低于同期的野生型病毒。2014-2015年病毒检测结果显示,神经氨酸酶亲和力较强则生长特性较好,2013年病毒的神经氨酸酶活性与生长特性表现不一致。表面蛋白基因交换造成的系间重配毒株其神经氨酸酶活性与生长特性表现并不一致,提示2013-2015年,病毒的内部蛋白影响了病毒的生长特性,有待进一步研究。; 张瑶周剑芳李希妍鲁健秦堃舒跃龙王大燕; 关键词：流行性感冒 B型流感病毒

中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）中和单抗研制技术进展: 2017年; 中东呼吸综合征冠状病毒（Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV）2012年在中东地区的大暴发及其快速传播能力,已成为了全球科研工作者关注的重点,寻找有效的治疗和预防措施对MERS-CoV感染防治起着至关重要的作用.临床研究证实,病毒感染者恢复期血清中含有大量的中和抗体,并具有有效的临床治疗作用,说明中和抗体能有效、安全的作为病毒感染治疗手段.纤突（spike,S）蛋白是介导MERS-CoV感染宿主细胞的关键结构蛋白,是目前此病毒中和性单抗研究的关键位点.本文综述了MERS-CoV S蛋白结构特点、中和性单抗制备免疫原类型及不同种类中和性单抗的制备方式,并结合当前研究现状展望了MERS-CoV中和单抗研发前景.; 陈迎珠秦堃谭文杰; 关键词：单克隆抗体纤突蛋白

H5N1禽流感病毒headless HA基因在杆状病毒中的表达被引量：3: 2012年; 目的建立能有效表达禽流感病毒A／Hubei／1／2010（H5N1）无头HA（headlessHA）的杆状病毒系统。方法利用RT—PCR扩增获得headlessHA基因，克隆至杆状病毒转移载体pFastBacl，命名为pFastBaclheadlessHA。将pFastBaclheadlessHA转化到DH10Bae感受态细胞，获得重组穿梭质粒HeadlessHA—Bac。利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并进行WesternBlot和红细胞凝集试验检测。结果HeadlessHA在St9细胞中能有效表达，不能使红细胞发生凝集。结论本研究为利用headlessHA表达蛋白研制广谱流感疫苗奠定了基础。; 张立霞于在江周剑芳秦堃许应天舒跃龙; 关键词：基因流感病毒A型

一种重组流感病毒及其应用: 本发明公开了一种重组流感病毒及其应用。本发明提供了一种制备重组病毒的方法，包括如下步骤：将HA6亚型流感病毒血凝素的编码基因、流感病毒神经氨酸酶NA基因、流感病毒内部6个基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS共同导入宿...; 周剑芳秦堃朱云白天王大燕舒跃龙; 文献传递

中东呼吸综合征冠状病毒刺突蛋白受体结合区蛋白的原核表达纯化及鉴定: 2016年; 目的对中东呼吸综合征冠状病毒（MERS—CoV）刺突蛋白受体结合区（RBD）蛋白进行原核表达、纯化与鉴定及抗原性初步研究。方法人工合成密码子优化的MERS—CoVRBD编码基因，克隆至pET30a（＋）载体，构建重组表达质粒，转化至BL21（DE3）。利用IPTG诱导，探索优化表达条件，并用镍离子亲和层析纯化，SDS—PAGE和Westernblot进行鉴定，并采用间接ELISA对原核表达的RBD进行抗原活性和特异性初步分析。结果重组RBD蛋白主要以包涵体形式表达，以37℃0．5mmol／LIFFG诱导4h表达量最高；变性复性后纯化获得了较纯的重组RBD蛋白，相对分子质量大小约为29×10^3，与预期一致；Westernblot表明其能与感染MERS—CoV的小鼠血清发生特异性反应；间接ELISA显示原核表达RBD蛋白在检测正常和MERS—CoV感染患者血清方面表现出较好的抗原活性和特异性。结论本研究首次利用原核表达系统成功表达并纯化获得重组MERS—CoVRBD蛋白，为MERS—CoV的免疫学检测及疫苗学研究提供了基础。; 卢帅蓝佳明陈迎珠周剑芳秦堃楼永良谭文杰; 关键词：冠状病毒原核表达纯化

利用反向遗传技术进行B型重配流感病毒的构建被引量：1: 2016年; 目的反向遗传技术是流感病毒疫苗株构建和基因特性研究的重要方法，本研究旨在构建B型流感病毒反向遗传平台，进而拯救B型流感病毒。方法研究中利用含有双启动子的pHW2000为载体，对B／Florida／4／2006病毒的8个基因片段构建质粒，获得8个节段的重组质粒后，共转染293T及MDCK混合细胞，收集上清液及细胞碎片，采用接种鸡胚及细胞传代方法，拯救B型流感病毒。结果研究中发现可以利用该系统拯救B／Florida／4／2006病毒，拯救病毒的血凝滴度为HA128～256／50μl，电镜下重配病毒颗粒多呈球形。结论研究结果表明该系统可用于B型流感病毒的拯救，并可进一步利用该系统构建基因突变病毒，用于B型流感病毒的特性分析和疫苗株的构建。; 张瑶周剑芳秦堃曾晓旭舒跃龙王大燕; 关键词：B型流感病毒

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