祁洪刚
- 作品数：11 被引量：17H指数：3
- 供职机构：宁波大学医学院附属泌尿肾病医院更多>>
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- 来氟米特抑制大鼠心脏移植急性排斥反应时细胞间粘附分子-1表达的实验研究
- 目的:探讨大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达以及来氟米特(LEF)对ICAM-1表达的抑制和抑制排斥反应的作用。方法:建立大鼠腹部异位心脏移植模型,设Lewis大鼠心脏移植到Lew...
- 祁洪刚翁国斌陈栋
- 文献传递
- HLA-G1抑制人自然杀伤细胞杀伤猪血管内皮细胞的研究被引量：1
- 2003年
- 目的 研究HLA G1基因抑制人自然杀伤细胞 (NK细胞 )对猪血管内皮细胞杀伤的作用。方法 利用脂质体介导的基因转染技术将 pcDNA3 HLA G1转入原代培养的猪血管内皮细胞 ,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA G1分子在猪内皮细胞上的表达 ;以NK细胞系(NK92 )和外周血单个核细胞为效应细胞 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测转染细胞对NK细胞杀伤活性的抑制效应。结果 与未转染HLA G1的对照组相比 ,NK92和外周血单个核细胞对转有HLA G1的猪血管内皮细胞的杀伤效率均有明显降低 (P <0 .0 5 )。结论 HLA G1分子可以明显抑制人NK细胞对猪血管内皮细胞的杀伤。
- 王树森韩军艳曹荣华祁洪刚夏振雄陈栋吴雄文龚非力陈实
- 关键词：自然杀伤细胞异种移植
- 来氟米特抑制大鼠心脏移植急性排斥反应时细胞间粘附分子-1表达的实验研究
- 目的:探讨大鼠同种异体心脏移植急性排斥反应时细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达以及来氟米特(LEF)对ICAM-1表达的抑制和抑制排斥反应的作用.方法:建立大鼠腹部异位心脏移植模型设Lewis大鼠心脏移植到Lewi...
- 祁洪刚
- 关键词：心脏移植细胞间粘附分子-1急性排斥反应来氟米特
- 文献传递
- 小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立
- 2008年
- 目的探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA（SiRNA）转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰（RN～）转染体系。方法针对猪α1，3-半乳糖苷转移酶（α1，3-GT）基因合成数对SiRNA分子，运用不同转染体系（DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000）转染永生化猪血管内皮细胞系（PED）。分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1，3-GT作用下PED的α1，3一半乳糖残基（α-Gal）表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响。结果PED能有效发生特异性RNA干扰现象，且呈明显的剂量依赖性特征。SiRNA-1与脂质体Ribo—Juice在12nmol／L：6μl时，干扰效果最佳（67．3％～89．5％），整体量效优于DOSPA及Lipo—fectamine 2000转染体系。靶细胞转染SiRNA-1后48h时的α-Gal相对表达水平为10．5％，而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象。脂质体转染体系在转染后6～12h对靶细胞生长稍有影响，24h后细胞活性逐渐恢复。结论猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制，RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式，为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础。
- 朱珉曹荣华祁洪刚王璐胡枫陈栋刘斌陈刚张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰内皮细胞
- 红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后HSP72表达水平及肾功能影响的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨不同浓度的红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用以及HSP72表达水平的关系。方法将48只健康sD大鼠随机分为6组，分别为红景天苷5mg／kg组、10mg／kg组、20mg／kg组、40mg／kg组、假手术组和空白对照组。通过切除有肾，夹闭左肾蒂45min，建立肾脏缺血再灌注模型。分别检测大鼠血清肌酐（Scr）、尿素氮（Bun）、肾组织常规病理及肾组织中HSP72的表达。结果与红景天苷5mg／kg组、10mg／kg组、40mg／kg组相比，红景天苷20mg／kg组Scr水平、Bun水平明显下降（P〈0．01），病理损伤明显减轻，组织中HSP72表达也明显减少。与空白对照组比较，红景天苷20mg／kg组Scr水平、Bun水平略有上升，病理损伤较轻。结论应用红景天苷后，大鼠肾脏缺血再灌注损伤明屁减少，其机制与增强肾脏抗氧化能力，减轻肾脏组织炎性细胞浸润和抑制肾组织HSP72表达有关，其中20mg／kg浓度的红景天苷保护效果最佳。
- 高琨祁洪刚胡美琴高文波翁国斌姚许平
- 关键词：红景天苷肾脏缺血再灌注损伤HSP72
- RNA干扰在猪内皮细胞抵御补体介导的细胞毒中的作用被引量：4
- 2005年
- 目的 评价RNA干扰(RNAi)是否能有效抵御补体介导的对猪内皮细胞的细胞毒作用。方法 将小分子干扰RNA(SiRNA)转染猪内皮细胞系PED,检测PED转染前后α1,3 半乳糖转移酶(α1,3 GT)mRNA及α- 半乳糖糖链(αGal)抗原表位的表达,并评价RNAi对补体介导的细胞毒的影响。结果 SiRNA 1/PED的α1,3 GT基因异构体(isoform)表达量与空转组(Mock)相比减少了70%(isoform1,69%;isoform2,72%)(P<0 05),但SiRNA 2/PED的α1,3 GT表达量与错配组及空转组相比差异无统计学意义(P>0. 05),流式细胞学检查显示,SiRNA 1/PED的αGal平均荧光强度(52 9)明显小于错配组(493 9,P<0 01)及空转组(505 7,P<0. 01)。标准4h51Cr释放实验中SiRNA 1/PED的细胞溶解率较空转组分别减少了70%(20%正常人血清组)和60%(40%正常人血清组)(P<0. 05)。结论 PED在转染SiRNA- 1后发生了基因沉默,猪内皮细胞可以成为RNAi作用的靶细胞。本研究为更深层次探讨RNAi在异种移植中的作用奠定了基础。
- 朱珉夏振雄王树森曹荣华祁洪刚陈栋刘斌张伟杰陈实
- 关键词：RNA干扰补体介导半乳糖转移酶平均荧光强度PED内皮细胞系
- 人类白细胞抗原G1转染猪内皮细胞降低异种细胞排斥反应的研究被引量：1
- 2005年
- 目的研究转染人类白细胞抗原G1(humanleukocyteantigenG1,HLA-G1)基因后的猪内皮细胞系(porcineendothelialcells,PECs)细胞,对人外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcell,PBMC)和自然杀伤细胞92(naturekillercell92,NK-92)细胞介导的杀伤作用的改变。方法利用脂质体包裹的方法,将携带HLA-G1基因的真核表达载体pcDNA3.0转染PECs细胞,在蛋白质水平通过间接免疫荧光法、在RNA水平通过RT-PCR,检测HLA-G1的表达;取6名健康志愿者,每人5ml静脉血,分离出单个核细胞和NK-92作为效应细胞,利用51Cr释放试验来检测其杀伤作用的改变。结果转染HLA-G1基因后,在转染的内皮细胞中蛋白质水平和RNA水平均检测到HLA-G1基因的表达;PBMC和NK-92细胞介导的对PECs细胞的杀伤作用均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论转染HLA-G1后的PECs,可有效地降低由人NK细胞介导的杀伤作用,从而为抑制异种细胞排斥反应提供了新的思路。
- 夏振雄韩军艳王树森曹荣华朱珉祁洪刚陈栋吴雄文龚非力陈实
- 红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的预防保护时限被引量：9
- 2012年
- 目的:探讨红景天苷对大鼠肾脏缺血再灌注损伤预防保护时限,阐明其可能机制。方法:54只健康成年SD大鼠随机分成9组,分别为空白对照组、缺血再灌注夹闭15、30、45和60min组、腹腔注射红景天苷水溶液夹闭15、30、45和60min组,每组6只。缺血再灌注组和红景天苷组大鼠分别制作肾脏缺血再灌注模型,红景天苷组大鼠实验前采用红景天苷水溶液预处理。检测各组血清肌酐(Scr)水平;切除右肾,夹闭左肾蒂相应时间后取左肾组织HE染色,用光镜观察肾组织病理改变,蛋白质印迹法和免疫组织化学法分别检测肾组织中热休克蛋白72(HSP72)和核转录因子κB(NF-κB)的表达。结果:与缺血再灌注各组比较,红景天苷夹闭15、30和45min组大鼠Scr水平明显下降(P<0.01),病理损伤明显减轻,肾脏组织中HSP72和NF-κB表达也明显减少。与空白对照组比较,红景天苷各组大鼠血清Scr水平有所上升,其中夹闭60min明显上升(P<0.05),夹闭15、30和45min时病理损伤变化不明显。结论:应用红景天苷后,大鼠肾脏缺血再灌注损伤明显减轻,其机制可能是通过抑制肾组织中Hsp72和NF-κB的表达,增强肾脏抗氧化能力,从而减轻肾脏组织炎性细胞浸润和细胞凋亡。
- 高琨胡美琴祁洪刚翁国斌高文波姚许平
- 关键词：红景天苷肾脏缺血再灌注损伤热休克蛋白72核转录因子ΚB
- 新生猪胰岛细胞的HLA-G_1基因转染被引量：1
- 2005年
- 目的探讨HLA-G1基因转染新生猪胰岛细胞的可行性,检测其表达和功能状况。方法体外分离纯化新生猪胰岛细胞,脂质体载体转染HLA-G1基因。免疫荧光法检测HLA-G1基因在胰岛细胞上的表达状况;51Cr释放实验分析其对人NK细胞细胞毒的抑制作用。结果新生猪胰岛细胞HLA-G1基因表达率大约为50%,体外转染24-48 h达高峰;混合淋巴细胞培养(胰岛细胞+ NK细胞)后,空质粒转染组的胰岛细胞溶解率为71.57%,而转染组胰岛细胞溶解率为53.5%。结论利用脂质体Genejammer转染体外培养的新生猪胰岛细胞,可以获得靶基因的瞬时高效表达; HLA-G1基因转染可以有效抑制NK细胞对异种胰岛的细胞毒作用。
- 曹荣华韩军艳吴雄文王树森陈栋祁洪刚夏振雄陈实
- 关键词：猪胰岛细胞基因转染混合淋巴细胞培养脂质体载体人NK细胞异种胰岛
- α1，3-半乳糖基转移酶基因沉默对NK细胞介导的异种细胞毒作用的影响
- 2008年
- 目的探讨α1，3-半乳糖基转移酶（α1，3-GT）基因沉默对人自然杀伤（NK）细胞介导的异种细胞毒作用的影响。方法将培养的永生化猪血管内皮细胞系细胞株PED分为3组。转染组：PED转染了特异性α1，3-GT核糖核酸干扰分子（siRNA-1）；错配组：PED转染了错配的SiRNA；空转染组：PED未转染SiRNA。观察各组PED与人NK细胞系细胞株NK92在静止和流动状态下的粘附作用、不同效靶比下的NK92细胞毒作用以及PED和NK92混和培养上清液中γ干扰素（IFN-γ）的水平。结果PED转染后48h，转染组、错配组和空转染组在静止状态下粘附NK92的数量（个）分别为262±26、275±24和252±23；流动状态下分别为132±12、125±15和110±20，无论是静止还是流动状态下，各组PED对NK92的粘附能力的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。无论PED是否被活化，在相同效靶比下NK92对各组PED的杀伤率的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05），但杀伤率与效靶比呈正相关。NK92与PED共孵育早期即有反应性IFN-γ分泌，其分泌水平[（366．9±28．7）ng／L]较其自发分泌水平[（60．1±6．4）ng／L]增加了5倍，在共孵育后12h分泌值最高，但各组间不同时段IFN-γ分泌值的比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论利用RNA干扰技术下调PED上的α1，3-半乳糖残基（reGal）的表达，未引起NK92和PED相互作用的明显改变。α-Gal可能并非是NK细胞作用的靶位点，其表达量的高低对NK细胞的活化、粘附及杀伤能力未产生负性影响。
- 朱珉祁洪刚曹荣华王璐黄亚冰刘斌林正斌陈知水陈刚陈实
