石朝辉
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：温州医学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫ROP2-P30重组真核表达质粒的构建及其免疫效应的初步分析被引量：4
- 2009年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)和膜表面蛋白1(P30)融合的重组真核表达质粒,观察融合抗原ROP2-P30以DNA免疫方式在体内的免疫学效应。方法以重组质粒pET28b/ROP2-P30为模板,利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30,经PCR和酶切鉴定正确后,体外转染COS-7细胞,Westernblot检测ROP2-P30表达。重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30以每鼠100μg混合透明质酸酶10U的剂量肌肉注射免疫BALB/c雌性小鼠,以弓形虫虫体裂解抗原作包被抗原,ELISA法测定免疫小鼠血清IgG抗体,免疫结束2周后,以约100个弓形虫速殖子攻击感染小鼠,观察小鼠生存状况。结果PCR和酶切鉴定表明重组质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建正确;West-ernblot显示该重组质粒在COS-7细胞中瞬时表达的产物可被重组ROP2-P30免疫兔血清识别;ELISA检测重组质粒免疫小鼠血清特异性IgG抗体水平升高;重组质粒免疫小鼠感染弓形虫后的存活时间较对照组有所延长。结论重组真核表达质粒pcDNA3.1/ROP2-P30构建成功,用该重组质粒DNA直接免疫小鼠,能够诱导产生特异的体液免疫反应,具有一定的免疫保护性;该重组质粒表达的融合抗原分子ROP2-P30具有免疫原性,可作为疫苗候选抗原深入研究。
- 钟晓芝李文姝张丽芳石朝辉陈俊闵太善
- 关键词：弓形虫真核表达质粒免疫效应
- 尖锐湿疣组织HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性分析被引量：1
- 2008年
- 目的:调查温州地区尖锐湿疣组织HPV6b和11型感染情况,分析其L1基因多态性及蛋白特性变化,为基因工程重组L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。方法:采用HPV6b和11型L1基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿疣组织标本进行PCR扩增,并各取7份阳性PCR产物直接测序,用软件分析HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性。结果:31份标本中,HPV6b和11型阳性率分别为35.5%和45.2%。与标准基因序列比较,HPV6b和11型L1基因分别形成5和6种突变模式,同源性分别为99.8%～99.9%和99.7%～99.9%。HPV6b型L1基因中仅1处碱基突变引起所编码氨基酸的变异(S→P),但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上无明显变化;HPV11型L1基因的碱基突变均为无义突变,所编码氨基酸与标准株完全一致。结论:HPV6b和11型是温州地区尖锐湿疣的主要感染型别;HPV6b和11型L1基因序列高度保守。
- 欧琴石朝辉朱珊丽张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒尖锐湿疣L1基因
- 温州地区人乳头瘤病毒(HPV)6和11型结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性分析
- 目的：调查温州地区尖锐湿疣组织 HPV6和11型感染情况,分析其 L1基因多态性及蛋白特性变化,为基因工程重组 L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。方法：采用 HPV6b 和11型 L1 基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿...
- 朱珊丽欧琴王鹏飞石朝辉陈俊张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒尖锐湿疣L1基因基因多态性
- 文献传递
- 密码子优化和蛋白加强免疫对CT-MOMP多表位基因重组质粒免疫原性的影响
- 目的：观察密码子优化的沙眼衣原体(CT)外膜蛋白(MOMP)多表位基因的重组质粒,以及DNA初始免疫-蛋白加强免疫方式诱导小鼠的免疫应答水平，探讨提高CT-MOMP多表位DNA疫苗免疫原性的途径。
方法：采用生...
- 朱珊丽李文姝陈韶钟晓芝王鹏飞石朝辉张丽芳
- 关键词：多表位基因重组质粒免疫应答
- 文献传递
- HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合DNA诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫的研究
- 2010年
- 目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）6b结构蛋白L1和沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）多表位嵌合DNA（HPV6b L1/Ct MOMP）诱导BALB/c小鼠产生特异性细胞免疫效应,及HPV6b L1对Ct MOMP多表位基因诱导细胞免疫的增强作用.方法 将Ct MOMP多表位基因连接在经真核密码子优化的HPV6b L1羧基端,构建嵌合重组质粒pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位,经酶切和测序证实后,转染COS-7细胞,间接免疫荧光鉴定其在真核细胞中的表达;将纯化后的嵌合重组质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并设置pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒、pcD-NA3.1（＋）和PBS三组对照.采用0、2、4周免疫程序,DNA剂量为每只150μg/次.于末次免疫后2周,分别用乳酸脱氢酶（LDH）释放法和细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS-FAGS）检测小鼠脾细胞对Ct MOMP多表位蛋白和HPV6b L1蛋白的特异性CTL活性,胞内细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-10产生水平等细胞免疫应答指标.结果免疫后,在效靶比（E∶T）分别为40∶1、20∶1时,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合重组质粒免疫组小鼠产生了针对Ct MOMP多表位蛋白特异性CTL杀伤活性（44.56%±4.02%,35.35%±2.89%）和HPV6b L1蛋白特异性CTL杀伤活性（27.08%±2.04%,21.68%±4.06%）,与各对照组比较差异有统计学意义（F=72.87,F=114.55,P＜0.05;F=30.04,F=10.47,P＜0.05）,且显著高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（35.50%±2.68%,30.24%±1.75%;12.27%±3.36%,9.32%±3.07%;P＜0.05）;而pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组小鼠仅显示了Ct MOMP多表位特异性的CTL杀伤活性,与对照组比较差异也有统计学意义（F=58.85,F=120.21;P＜0.05）.胞内细胞因子IFN-γ的产生水平,pcDNA3.1（＋）/HPV6b L1/Ct MOMP多表位嵌合质粒组（4.34%±0.06%）高于pcDNA3.1（＋）/Ct MOMP多表位质粒组（3.14%±0.18%）,与对照组比较差异有统计学意义（F=473.83,P＜0.05）,而重组质粒组较空载体组和PBS对
- 石朝辉朱珊丽许文陆丽君李玲玲张丽芳
- 关键词：主要外膜蛋白细胞毒T细胞
- 沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位基因的免疫原性研究
- 2009年
- 目的构建包含沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein，MOMP）多表位基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CtMOMP168，检测其诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平。方法构建包含CtMOMP多表位基因的重组质粒pcDNA3．1，CtMOMP168并以肌肉注射方式免疫BALB／c小鼠，同时设置pcDNA3．1组和PBS组对照（每组12只，每只100μg/次）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳酸脱氢酶释放法及细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS—FACS）分别检测免疫小鼠血清中CtMOMP特异性抗体的滴度及其抗体亚型、脾脏中细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性及特异性分泌细胞因子，如γ-干扰素-（IFN-1）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）等的CD3^＋T细胞的水平。结果同pcDNA3．1（A490=0．180±0．025）和PBS免疫（A490=0．110±0．015）相比，pcDNA3．1-CtMOMP168免疫可刺激小鼠产生高效价0特异性IgG抗体（A490=0．973±0．136；血清滴度1：1000），且抗体亚型以IgG2a为主，差异有统计学意义（F=106．884，P〈0．05）；pcDNA3．1-CtMOMP168免疫组小鼠脾细胞中CTL杀伤活性（41．71％±8．34％）高于pcDNA3．1组（18．40％±3．45％）和PBS组（14．50％±2．42％），差异有统计学意义（F=22．315，P〈0．05；效靶比为50：1）；pcDNA3．1-CtMOMPl68免疫组小鼠的脾细胞中CtMOMP特异性CD3^＋IFN-γ^＋T细胞的水平（1．15％±0．16％）高于pcDNA3．1组（0．12％±0．08％）和PBS组（0．09％±0．03％），差异有统计学意义（F=99．638，P〈0．05），而pcDNA3．1-CtMOMP168组IL4^＋CD3^＋T细胞（0．13％±0．08％）和IL-10^＋CD3^＋T细胞（0．14％±0．08％）的水平与pcDNA3．1（0．07％±0．05％，0．13％±0．06％）和PBS（0．08％±0．04％，0．07％±0．04％）组比较差异无统计学意义（F值分别为0．886、1．112，P�
- 朱珊丽石朝辉李文姝陈俊张丽芳
- 关键词：细菌外膜蛋白质类表位
- E血清型沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位的预测被引量：2
- 2008年
- 基于E血清型沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）主要外膜蛋白（Major outer membrane protein，MOMP）氨基酸序列，采用Hopp-Woods的亲水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf抗原指数方案和Janin可及性方案等，辅以对MOMP蛋白的二级结构中的柔性区域及跨膜区域的分析，预测CTMOMP蛋白的B细胞表位。推测最有可能的B细胞表位位于MOMP蛋白N端第73～81区段、217～225区段、第377～386区段、第261～270区段和第161～175区段内或它们的附近。用多参数预测CTMOMP蛋白的B细胞表位，为进一步研究蛋白特性及表位疫苗研制奠定了基础。
- 朱珊丽石朝辉王鹏飞李文姝张丽芳
- 关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位
- HPV6L1/CtMOMP多表位融合基因在COS-7细胞的表达及其在小鼠的免疫效果观察被引量：2
- 2010年
- 研究人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6b结构蛋白L1(HPV6b L1)基因佐剂增强沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(MOMP)多表位(Ct MOMP168)DNA疫苗的免疫效果的可能性.构建pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168融合重组质粒,转染COS-7细胞,用RT-PCR、激光共聚焦显微技术及Western印迹技术检测其表达.分别用pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/Ct MOMP168、pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168及pcDNA3.1(+)质粒肌肉免疫BALB/c小鼠,ELISA检测外周血中IgG及阴道分泌物中sIgA.结果表明,pcDNA3.1(+)/HPV6b L1/CtMOMP168可在COS-7细胞中表达;Ct MOMP168组和HPV6b L1/Ct MOMP168组均可刺激小鼠产生抗Ct MOMP特异性的抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高,且HPV6b L1/Ct MOMP168组小鼠产生的抗体滴度明显高于Ct MOMP168组(P<0.05).结果提示,分子佐剂HPV6b L1与CtMOMP多表位基因融合能够显著增强Ct MOMP多表位DNA疫苗的体液免疫应答.
- 许文石朝辉朱珊丽陆丽君孟锐峰李玲张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒沙眼衣原体主要外膜蛋白DNA疫苗
- 温州地区人乳头瘤病毒(HPV)6和11型结构蛋白L1基因多态性及蛋白特性分析
- 目的：调查温州地区尖锐湿疣组织HPV6和11型感染情况，分析其L1基因多态性及蛋白特性变化，为基因工程重组L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。
方法：采用HPV6b和11型L1基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿疣...
- 朱珊丽欧琴王鹏飞石朝辉陈俊张丽芳
- 关键词：人乳头瘤病毒尖锐湿疣L1基因基因多态性蛋白疫苗
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒11型E7蛋白在原核细胞的表达及其诊断尖锐湿疣的价值被引量：2
- 2007年
- 目的研究人乳头瘤病毒(HPV)11型 E7蛋白在原核细胞的表达及其在尖锐湿疣(CA)血清学诊断中的应用价值。方法用 PCR 从 CA 患者组织中扩增 HPV11 E7全长基因,构建重组质粒 pET32a(+)/HPV11 E7,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后表达,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹法(WB)分析鉴定;经镍螯合亲和层析胶体(Ni-NTA Agarose)纯化 HPV11 E7融合蛋白后作抗原,用间接 ELISA 法对93例 CA 患者、43例宫颈癌患者和58名健康对照者血清标本进行 IgG 抗体检测。结果 HPV11 E7融合蛋白在原核表达系统中呈较高效表达(浓度为40μg/ml)。CA 组、宫颈癌组和健康对照组血清 IgG 抗体均值分别为1.545±0.131、0.586±0.155和0.674±0.150,阳性率分别为76.3%(71/93)、11.6%(5/43)和5.2%(3/58);CA 组血清 IgG抗体均值及阳性率均高于宫颈癌组和对照组(均 P<0.01)。结论 HPV11 E7融合蛋白具较强的抗原性,用于 CA 血清学诊断试剂的研制具有临床应用价值。
- 郑丹张德意石朝辉涂权梅欧琴李琼英张丽芳
- 关键词：尖锐湿疣乳头瘤病毒蛋白
