王穆彬 作品数:11 被引量:26 H指数:3 供职机构: 江苏大学临床医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 镇江市科技支撑计划(社会发展)项目 江苏省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
线粒体参与银杏酸诱导HepG2细胞凋亡的研究 被引量:3 2012年 探讨银杏酸(Ginkgolic acids,GAs)诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的效应,初步探索其与线粒体相互作用的机制.以不同浓度的GAs作用于HepG2,MTT检测与相差显微镜观察相结合,分析GAs对细胞增殖的影响;Hochest染色观察细胞核变化;AnnexinⅤ/PI双标后流式细胞仪检测凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bax、Bcl-2)的表达;JC-1染色检测线粒体膜电位;DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)生成.结果发现,GAs以时间和剂量依赖性方式抑制细胞的增殖;GAs处理诱导HepG2细胞发生凋亡:细胞核皱缩及片段化,Caspase-3活化,Bax/Bcl-2比值增加,细胞凋亡率显著上升.此外,GAs可直接与线粒体发生作用,诱导HepG2细胞线粒体外膜膜电位下降,PTP孔道开放,ROS含量升高.研究结果表明GAs能够诱导肝癌细胞的凋亡,推测其主要通过影响线粒体功能而导致细胞的凋亡. 叶思思 高静 龚爱华 张严 王穆彬 杨小明关键词:银杏酸 抗肿瘤 凋亡 线粒体 纤维蛋白支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响 被引量:6 2009年 观察纤维蛋白-纤粘连蛋白-层粘连蛋白复合支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响,评价该支架移植修复脊髓损伤的可行性。本研究将圆柱状复合支架移植入大鼠脊髓完全横断缺损部位,同时以该模型动物作为对照组。分别于术后4w、8w、12w对动物下肢运动功能进行BBB评分。然后取出支架/脊髓组织,用免疫荧光双标和免疫印迹技术分析损伤部位神经纤维再生和胶质细胞增生情况;并用透射电镜观察支架移植部位的组织学结构。结果显示:术后4~12w支架移植组动物BBB评分明显高于对照组(P<0.05)。于术后4w,移植组可见支架内有少量神经纤维,此后神经纤维逐渐增多,而胶质细胞增生不明显;对照组脊髓损伤局部可见坏死空洞,空洞周边胶质细胞增生明显。免疫印迹检测结果表明,移植组神经丝蛋白(NF-200)相对含量高于对照组;对照组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的相对含量高于实验组。以上结果提示:纤维蛋白支架移植可促进大鼠脊髓损伤后神经再生,并抑制胶质瘢痕形成。纤维蛋白(原)作为生物材料用于构建修复脊髓损伤的组织工程支架具有良好的应用前景。 崔颜宏 王穆彬 陈静 龚爱华 步雪峰 孙湘兰 谷晓楚 庄琴 钱雷敏 姜平 张志坚关键词:纤维蛋白 纤粘连蛋白 脊髓损伤 神经丝 胶质纤维酸性蛋白 狂犬病毒糖蛋白重组的新城疫病毒诱导人胃癌SGC细胞自噬 被引量:1 2015年 目的:观察狂犬病毒糖蛋白重组的新城疫病毒(rabies virus glycoprotein recombinated Newcastle disease virus,r L-RVG)及野生型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)对胃癌SGC细胞自噬的影响。方法:将SGC细胞随机分为3组,rl-RVG组(转染rl-RVG)、NDV组(转染NDV)、对照组(转染PBS),24 h后观察细胞的形态变化,评价病毒对细胞的影响。用免疫双标记和免疫印迹法鉴定病毒感染是否成功;蛋白质印迹检测各组细胞自噬相关蛋白LC3及Beclin1的表达;透射电镜观察细胞内超微结构的变化和自噬体的形成。结果:病毒感染细胞24 h后,rl-RVG组及NDV组细胞皱缩明显,且rl-RVG组较NDV组变化明显,对照组无明显变化;rl-RVG组和NDV组细胞LC3及Beclin1蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05),且rl-RVG组明显高于NDV组(P<0.05);rl-RVG组及NDV组出现的自噬体明显多于对照组,且rl-RVG组较NDV组明显增多(P<0.05)。结论:r L-RVG较NDV更易引起胃癌SGC细胞的自噬。 王穆彬 严玉兰 张志坚 赵英海 李米 步雪峰关键词:胃癌细胞 新城疫病毒 狂犬病毒糖蛋白 重组新城疫病毒rL-RVG诱导人胃腺癌细胞内质网应激和凋亡 被引量:1 2016年 目的:观察新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)及稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(recombinant avirulent NDV La Sota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃腺癌HGC细胞内质网应激及凋亡的影响。方法:将HGC细胞随机分为对照组、NDV组和rL-RVG组,分别转染PBS、NDV和rL-RVG 24 h,免疫印迹法和免疫荧光检测糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)表达。再将HGC细胞随机分为对照组、4-苯基丁酸钠盐(sodium phenylbutyrate,4-PBA)组、rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组,4-PBA组和4-PBA+rL-RVG组分别加入4-PBA预处理4 h,然后rL-RVG组和4-PBA+rL-RVG组分别转染rL-RVG,对照组和4-PBA组转染PBS,免疫印迹法检测各组细胞GRP78、CHOP和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:感染HGC细胞24 h后,NDV组及rL-RVG组GRP78和CHOP表达明显高于对照组(P均<0.05),且rL-RVG组明显高于NDV组(P<0.01)。4-PBA预处理后,4-PBA+rL-RVG组GRP78、CHOP、caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率较rLRVG组明显降低(P<0.05)。结论:rL-RVG较NDV更易引起胃腺癌HGC细胞内质网应激,且与凋亡相关。 赵英海 严玉兰 李米 王穆彬 步雪峰关键词:新城疫病毒 狂犬病毒糖蛋白 内质网应激 纤维蛋白支架促进神经干细胞向神经元分化并抑制星形胶质细胞增生 被引量:2 2010年 目的探讨纤维蛋白支架对神经干细胞和星形胶质细胞分化及增殖的影响。方法分别培养胚胎大鼠脊髓来源的神经干细胞和新生鼠脊髓神经胶质细胞,接种于纤维蛋白支架上,同时用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照。于体外培养不同时间后,用神经丝蛋白(NF200)对神经细胞进行免疫荧光染色,测量各复孔(n=4)内NF阳性细胞的突起长度,计算其平均值;用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)对胶质细胞进行染色,各复孔(n=4)内统计5个不同视野的胶质细胞总数和GFAP阳性细胞数,计算GFAP阳性细胞相对数量的平均值。比较在纤维蛋白支架和玻片上神经干细胞分化、神经纤维延伸及神经胶质细胞增殖的差异。同时用免疫印迹技术对荧光染色结果进行验证。上述实验各重复3次。结果纤维蛋白支架组的NF阳性纤维明显长于对照组,GFAP阳性星形胶质细胞相对数量明显少于对照组,GFAP的表达水平明显低于对照组。结论纤维蛋白支架可促进神经干细胞向神经细胞分化,并有利于神经纤维的延伸而抑制星形胶质细胞的增殖和成熟。 崔颜宏 王穆彬 陈静 陈谦 孙湘兰 龚爱华 张志坚 陈永昌 姜平关键词:纤维蛋白 神经元 星形胶质细胞 免疫印迹法 重组新城疫病毒rl-RVG抑制人肺腺癌A549系细胞迁移及相关机制 被引量:3 2015年 目的观察表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(rl-RVG)对人肺癌细胞系A549的迁移影响,初步探讨其可能的机制。方法重组新城疫病毒rl-RVG直接感染A549细胞为rl-RVG实验组,新城疫病毒La Sota株处理的A549细胞组及未感染病毒的A549细胞组作为对照组。Western blot法检测NDV-HN蛋白及狂犬病毒糖蛋白(RVG),细胞增殖实验测定新城疫病毒使用的最佳作用浓度;划痕实验及Transwell法测A549迁移;Western blot法及免疫荧光法检测E-cadherin,MMP2蛋白表达。结果空白对照组无NDV、rl-RVG表达,rl-RVG仅在感染rl-RVG细胞组有表达,NDV在感染rl-RVG细胞组及感染NDV细胞组皆有表达;与空白对照组相比,rl-RVG及NDV稀释浓度大于5×10-5对细胞的增殖有抑制作用(P<0.05);rl-RVG组迁移的距离及细胞数明显减少(P<0.05)。与空白对照组及NDV感染组相比,rl-RVG组E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP2蛋白表达水平减弱(P<0.05)。结论重组新城疫病毒rl-RVG能抑制人肺癌细胞系A549的迁移,并可能通过影响肺腺癌A549上皮细胞-间质转化(EMT)过程中的调控因子E-cadherin,MMP2蛋白而对细胞迁移而作用。 金惠 步雪峰 王穆彬 苏春香 严玉兰关键词:肺癌 迁移 自噬参与表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒诱导的胃癌细胞的死亡 王穆彬文献传递 纤维蛋白胶支架搭载外胚间充质源雪旺细胞移植修复大鼠脊髓损伤 被引量:5 2015年 目的:观察外胚层间充质源的雪旺细胞在损伤脊髓中的迁移情况、组织相容性,评价纤维蛋白支架搭载该细胞移植治疗急性脊髓损伤的疗效。方法:(1)成年大鼠鼻中隔活体取出部分鼻黏膜制成细胞悬液,自然纯化并扩增鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs),用雪旺细胞诱导培养基将其诱导为雪旺细胞并用红色荧光进行标记。(2)建立脊髓针刺损伤模型并移植标记细胞,术后10 d,观察雪旺细胞在组织内的存活和迁移情况,并评价其组织相容性。(3)健康SD大鼠60只,制作脊髓横断模型,随机分为3组:单纯脊髓横断(SCI)组、纤维蛋白胶(Fibrin)移植组和细胞-支架(F-C)移植组,术后每周进行运动行为学评分。术后12周取出脊髓组织,采用免疫组织化学染色和Western Blot方法检测脊髓横断部位神经纤维重建和髓鞘再生情况,以及神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:(1)EMSCs来源的雪旺细胞体外分化扩增良好,免疫荧光结果显示其高表达S100、GFAP、P75、CNpase等表面标志蛋白。(2)移植进入体内的雪旺细胞存活良好并发生一定距离的迁移,且与脊髓内神经纤维有良好的相容性。(3)术后2周开始直至12周,F-C组较SCI组大鼠后肢运动功能有较明显恢复,差异有显著意义(P<0.05);Fibrin组亦有一定程度的恢复,但程度较轻;SCI组几乎没有恢复迹象。免疫组化染色结果显示:SCI组断端未见神经轴索通过,Fibrin组可见少量神经纤维通过,F-C组可见多量神经网络状结构。Western Blot检测结果显示:F-C组神经丝蛋白(NF-200)、生长相关蛋白-43(GAP-43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)相对含量均高于Fibrin组和SCI组(P<0.05)。结论:外胚层间充质源雪旺细胞移植对于脊髓损伤后的组织学和功能学恢复有明显促进作用,纤维蛋白做为移植修复脊髓损伤的生物支架具有良好的应用前景。 崔学文 李正南 张志坚 张雪松 贺清华 束浩明 王穆彬 刘伦关键词:脊髓损伤 外胚间充质干细胞 雪旺细胞 纤维蛋白胶 神经再生 烟碱型乙酰胆碱受体对人肺腺癌细胞生长和凋亡的影响 被引量:4 2015年 目的:研究烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,n AChR)激动剂和拮抗剂对人肺腺癌A549细胞生长和凋亡的影响。方法:将A549细胞随机分成对照组、激动剂组和拮抗剂组,分别加入PBS、激动剂(10-3,10-4,10-5mol/L)、拮抗剂(10-3,10-4,10-5mol/L)作用细胞24,48,72 h;MTT筛选出n AChR激动剂和拮抗剂作用细胞的最佳浓度和时间点;RT-PCR法检测α7n AChR基因的表达,Tunel检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测Caspase-9,Bax和Bcl-2表达。结果:A549细胞株稳定表达α7 n AChR,与对照组相比,拮抗剂组α7n AChR基因表达明显减少,激动剂组增强;与对照组相比,拮抗剂各浓度组48 h细胞的增殖明显抑制(P<0.01),且10-3mol/L细胞增殖抑制明显强于10-5mol/L(P<0.05);10-3mol/L激动剂作用A549细胞48 h后细胞增殖明显增强(P<0.01)。Tunel检测结果显示,拮抗剂组细胞凋亡明显多于激动剂组和对照组(P<0.01),而激动剂组与对照组比较差异无统计学意义;与对照组相比,拮抗剂组α7n AChR表达降低,促凋亡蛋白Caspase-9,Bax表达增加,Bcl-2表达降低;激动剂组反之。结论:α7n AChR激动剂和拮抗剂分别与肺腺癌A549细胞增殖及凋亡密切相关,其中细胞凋亡可能与拮抗剂激活机体的Bax/Bcl-2和Caspase家族有关。 苏春香 刘沙 金惠 王穆彬 刘洋 张金 严玉兰关键词:烟碱型乙酰胆碱受体 肺癌 凋亡 IL-10在脊髓损伤SD大鼠脊髓神经组织中的表达及其动态变化 2008年 目的探讨内源性IL-10在脊髓损伤SD大鼠脊髓神经组织中表达的动态变化及其意义。方法采用成年SD大鼠脊髓横断损伤(SCI)模型,经ELISA方法检测脊髓损伤急性期内IL-10在脊髓神经组织中表达的动态变化。采用免疫荧光双标记技术,于荧光显微镜下观察IL-10在脊髓神经细胞和胶质细胞内的表达,及其与神经丝蛋白(NF)和神经胶质细胞标志蛋白(GFAP)的共定位情况。结果①免疫荧光结果显示:正常对照组IL-10在脊髓神经细胞和胶质细胞表达较弱;脊髓损伤后IL-10在脊髓神经细胞和胶质细胞的表达明显增强,且中央管的室管膜细胞亦有较强表达;②定量检测结果表明:IL-10在损伤大鼠脊髓中的表达,从脊髓损伤后第3天呈上升趋势,至第5天出现最大峰值,至第7天有所下降,14 d接近正常水平。结论在脊髓损伤急性期内,脊髓神经细胞和胶质细胞均可表达大量的炎症抑制因子IL-10,根据其动态变化规律,笔者推测IL-10表达上调可能与中枢神经系统内固有免疫反应相关,IL-10可抑制炎症因子的过度表达,从而保护中枢神经系统免受继发性炎症反应造成的损伤。 孙湘兰 许燕 龚爱华 刘锦波 崔颜红 王穆彬 谷晓楚 张志坚关键词:脊髓损伤 胶质细胞 IL-10