漆正宇
- 作品数：32 被引量：156H指数：5
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞生殖细胞分化相关基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨不同基质蛋白对小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)分化形成拟胚体(embry-oid bodies,EBs)后生殖细胞分化相关基因表达的影响及机制。方法:mESCs分化形成EBs 3 d后接种于不同基质蛋白包被的培养皿中,包括人工基底膜(matrigel,M组)、纤维连接蛋白(fibronectin,F组)、层粘蛋白(laminin,L组)、胶原(collagen,C组)和非生物活性底物琼脂糖(agarose,A组),同时设不加任何基质蛋白的空白对照组(B组)。RT-PCR检测EBs在不同基质蛋白上d1～d4期间生殖细胞分化相关基因的表达,以及mESCs内源性基质蛋白FN(fibronectin)、LN(laminin)以及整合素受体β1基因的表达。结果:L组和F组EBs易贴壁分化,RT-PCR结果也证实原始生殖细胞(PGCs)分化基因Blimp-1、Stella、Mvh和减数分裂启动基因Stra8在L组和F组表达总体趋势为逐渐增强;M组和C组的表达趋势不明显;A组基因表达水平整体偏低;空白对照B组基因表达水平整体偏高但均呈下降趋势。L组和空白对照组细胞表达内源性基质蛋白FN、LN以及整合素受体β1。结论:层粘蛋白/β1信号途径可能对mESCs向PGCs分化具有指导作用,外源性层粘蛋白可能通过其受体β1亚单位传递诱导信号,调节mESCs来源的EBs向PGCs分化,FN可能通过其他整合素受体亚单位发挥作用。无任何外源性基质蛋白时,自身分泌的内源性基质蛋白也促进细胞分化。
- 郭新漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：基质蛋白小鼠胚胎干细胞拟胚体原始生殖细胞
- PcG蛋白EZH2在全反式维甲酸诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在小鼠iPS细胞系IP14D-1向生殖细胞分化过程中的作用。方法将小鼠iPS细胞系IP14D-1通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,1μmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7 d,采用实时RT-PCR、荧光定量RT-PCR、免疫荧光检测atRA处理前后EZH2和生殖细胞分化标志性基因Stra8在iEBs中的表达。结果在atRA诱导IP14D-1来源的iEBs中,EZH2表达在诱导后2 d达到高峰,伴随atRA诱导,EZH2表达减弱;而生殖细胞分化标志性基因Stra8其变化特点与EZH2相反,无atRA诱导时EBs表达Stra8较弱,伴随atRA诱导,Stra8表达增强。EZH2和Stra8阳性信号分别定位于胞膜和胞质,其变化特点与PT-PCP结果相一致。结论 atRA诱导使EZH2低水平表达时期提前出现,伴随Stra8增强表达,启动了小鼠iPS细胞向生殖细胞的分化进程。
- 张艳敏漆正宇郭新崔光辉秦洁
- 关键词：EZH2全反式视黄酸
- 我国人博卡病毒的发现及相关研究
- 刘巧突段招军熊波肖斌梅刘劲松瞿小旺漆正宇何吉娟谭金亮陈亚光候云德
- 该研究在湖南郴州市展开，共采集2005年10月至2006年2月间因急性呼吸道感染住院的儿童鼻咽抽吸物标本148例，经核酸扩增博卡病毒HBoVNS1基因，检测到11例博卡病毒感染，阳性率为7.4﹪，略高于国外报道的3.4﹪...
- 关键词：
- 关键词：人博卡病毒呼吸道
- 5-Aza-dC在mES细胞向生殖细胞分化中的DNA甲基化调控机制被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)向生殖细胞(Embryonic germcells,EG)分化过程中5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)对DNA甲基化转移酶Dnmt1和Dnmt3a及生殖细胞特征基因Mvh表达变化的DNA甲基化调控机制。方法:将mES细胞分化形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,采用不同浓度(0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,3μmol/L)处理EBs,RT-PCR实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测检测在5-Aza-dC处理前后Dnmt1和Dnmt3a在ES细胞和EBs中的表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测原始生殖细胞分化特征基因Mvh启动子甲基化状态。结果:5-Aza-dC的浓度在0.05μmol/L～1μmol/L之间时,EBs保持较高的存活率而EBs的形态明显发生了变化;5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a在EBs中mRNA表达量明显降低,其变化特点与WB结果相一致。MSP和测序结果显示,Mvh启动子区表现为部分甲基化,5-Aza-dC处理后的4d EBs中Mvh CpG岛有4个CG位点发生突变,而mES细胞中未见突变。结论:EBs经5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a的表达明显下调;同时,Mvh启动子发生部分甲基化,有可能启动了向生殖细胞的分化进程。
- 秦洁漆正宇张艳敏郭新崔光辉桂耀庭
- 关键词：DNA甲基化拟胚体
- ACRV1在正常男性和弱精子症患者精液精子中的表达差异
- 目的 研究精子顶体小泡蛋白-1 (ACRV1)在正常人和弱精子症患者精液精子中的表达差异,探讨ACRV1在弱精子症发生机制中的作用.方法 采用计算机辅助精液分析(CASA)技术对精液进行常规分析,经非连续密度梯度离心分离...
- 颜秋霞漆正宇赵晓英郭晓燕陈彩蓉蔡志明唐爱发
- 人肝癌细胞株FOXP3基因启动子区甲基化状态的研究被引量：2
- 2015年
- [目的]检测人肝癌细胞株FOXP3基因启动子区域的甲基化状态。[方法]选取人肝癌细胞株HepG2、SMMC7721为研究对象,采用亚硫酸氢盐修饰后的测序方法检测FOXP3启动子区CpG岛的甲基化水平。[结果]在人肝癌细胞株HepG2与SMMC7721中,FOXP3基因启动子区域CpG岛甲基化水平均比较高,其中SMMC7721的甲基化频率约80%;HepG2的甲基化频率约86%。[结论]人肝癌细胞株SMMC7721与HepG2中FOXP3基因启动子处于高甲基化状态,为进一步的肝癌细胞FOXP3基因的表观遗传学研究打下一定基础。
- 王芳秦洁漆正宇刘晓平
- 关键词：FOXP3DNA甲基化肝癌细胞株
- AngⅡ通过刺激肝癌细胞发生上皮间质转换促进肝癌转移被引量：1
- 2017年
- 目的探讨肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)在肝癌组织中的表达及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肝癌细胞发生上皮间质转换现象.方法搜集56例肝癌手术标本,组织标本石蜡切片,免疫组织化学法测定血管紧张素转化酶1(angiotensin converting enzyme 1,ACE1)、ACE2、vimentin、ecadherin蛋白表达定量;将细胞分组,用AngⅡ刺激肝癌细胞系,比较不同分组细胞系vimentin、ecadherin蛋白表达差异.结果与正常组织相比,肝癌组织ACE1、AT1表达上升,上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)标志物vimentin蛋白表达均上升,ecadherin均下降.AngⅡ刺激下,SSMC7721细胞系的vimentin基因和蛋白表达均上升,ecadherin下降;加入AngⅡ的抑制剂Ang1-7后,这种变化受到抑制;加入Ang1-7的抑制剂A779后,再次出现vimentin上升,ecadherin表达下降.单独加入A779与对照组差别不大.结论 AngⅡ可能通过刺激肝癌细胞发生EMT对肝癌的转移起到促进作用.
- 齐明华刘吉奎叶静李明华万汇涓漆正宇尹耀新欧希余光银
- 关键词：肾素血管紧张素醛固酮系统肝癌细胞
- 从我国儿童呼吸道标本中首次检出人博卡病毒被引量：11
- 2007年
- 目的调查国内儿童急性呼吸道感染中是否存在人类博卡病毒(human Bocavirus)感染。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术对湖南地区急性呼吸道感染儿童的鼻咽抽吸物(NPA)进行包括HBoV等12种病毒基因筛查,然后将PCR扩增阳性产物构建到Ppbs-T载体进行TA克隆及步移法测序,获取全长cDNA,登录Gen Bank作对比研究。结果从某儿童急性肺炎的呼吸道标本中,检获到HBoV基因,该患者11种常见呼吸道病毒PCR均为阴性,唯检出HBoV。患者表现咳嗽、低热、呼吸困难等临床症状,在儿科诊断为肺炎。结论国内儿童急性呼吸道感染中,特别是在中国南方地区的急性呼吸道感染患儿中,有部分可能系HBoV感染引起,应引起临床医护人员重视。
- 刘巧突瞿小旺熊波刘劲松漆正宇肖斌梅谭金亮何吉娟
- 关键词：儿童急性呼吸道感染人类博卡病毒
- Lin28调节小鼠胚胎干细胞向原始生殖细胞分化
- 2011年
- 目的探讨小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells，mESCs）向原始生殖细胞（primordial germcells，PGCs）分化过程中特异基因表达变化及可能机制。方法mESCs分化形成拟胚体（embryoid bodies，EBS），不同浓度atRA（1uM，2uM，5uM）持续诱导EBS16h、2d和5d，RT—PCR、和免疫荧光分别检测Lin28和Blimpl以及相应蛋白的表达变化。结果atRA诱导16h的EBs其Lin28mRNA表达量较高，随着诱导时间延长而逐渐降低，Blimpl则无明显变化。WB结果显示EBs的Lin28蛋白表达随诱导时间延长逐渐减弱，而Blimpl蛋白表达逐渐增强。免疫荧光显示Lin28和Blimpl阳性信号均定位于细胞胞浆，其变化特点与WB结果相一致。结论EBs经atRA诱导后可影响Lin28的表达，Lin28和Blimpl的变化并不协调，其蛋白表达随着诱导会随之发生变化。atRA诱导可能使PGCs分化的Lin28低水平表达时期提前出现。
- 郭新张艳敏漆正宇秦洁崔光辉桂耀庭蔡志明
- 关键词：小鼠胚胎干细胞生殖细胞
- LIN28在膀胱癌和膀胱癌细胞系中的表达及意义被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨LIN28在膀胱癌组织和细胞系中表达情况,以及与microRNA初级Let-7g(pri-Let-7g)之间关系,推测其可能临床意义及对肿瘤进展的影响。方法:采用常规RT-PCR、miRNA转录、免疫荧光和免疫组化方法,检测LIN28 mRNA和pri-Let-7g表达,以及LIN28蛋白表达定位。结果:2例膀胱癌细胞系均表达LIN28 mRNA,T24表达较强,免疫荧光显示这两个细胞系均表达LIN28蛋白,阳性部位位于细胞胞质,T24荧光强度强于5637。所选10例膀胱癌和相应癌旁组织均表达LIN28 mRNA,二者并无明显不同,与临床分级也无明确关系。免疫组化显示癌组织LIN28表达阳性并定位于胞质,而癌旁正常组织LIN28表达为阴性。此外,两个细胞系pri-Let-7g表达较强,而癌和癌旁组织的pri-Let-7g表达强度无明显差异,需进一步检测其成熟Let-7g在这些组织中是否存在不同,以明确这些miRNA是否发生生物合成的转录后阻断。结论:明确T24和5637两个膀胱癌细胞系均可作为研究LIN28、Let-7与其相应靶基因关系的体外实验模型。尽管并不确定膀胱癌和癌旁组织LIN28、Let-7g表达强度与临床分级是否相关,但至少明确LIN28/LIN28在膀胱癌中表达,为探讨LIN28和Let-7在泌尿系统来源的其他恶性肿瘤中的作用提供借鉴和实验依据。
- 郭新张艳敏孙亮周亮王勇漆正宇秦洁李贤新陈静桂耀庭蔡志明
- 关键词：膀胱癌LET-7
