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汪振诚

作品数：11 被引量：66H指数：4
供职机构：第二军医大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金中国博士后科学基金中国科学院知识创新工程重要方向项目更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 10篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 6篇医药卫生
  • 5篇生物学

主题

  • 9篇线粒体
  • 4篇细胞
  • 4篇线粒体DNA
  • 4篇基因
  • 3篇合成酶
  • 3篇氨酰TRNA...
  • 3篇LEU
  • 2篇点突变
  • 2篇体外
  • 2篇体外转录
  • 2篇突变
  • 2篇肿瘤
  • 2篇转录
  • 2篇基因表达
  • 2篇肝肿瘤
  • 2篇MTDNA
  • 1篇电子传递
  • 1篇电子传递系统
  • 1篇动力学
  • 1篇动力学研究

机构

  • 11篇第二军医大学
  • 2篇中国科学院上...

作者

  • 11篇汪振诚
  • 10篇王学敏
  • 6篇焦炳华
  • 6篇缪明永
  • 3篇龙建纲
  • 3篇朱克军
  • 2篇金由辛
  • 2篇王洁
  • 1篇蒋雷
  • 1篇刘军华
  • 1篇高建国
  • 1篇韩伟国
  • 1篇孙青菊
  • 1篇于军

传媒

  • 6篇第二军医大学...
  • 2篇遗传
  • 1篇中国药理学通...
  • 1篇生物化学与生...

年份

  • 2篇2006
  • 1篇2005
  • 4篇2004
  • 4篇2003
共 11 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因A3243G点突变对其亮氨酰化活性的影响被引量：4
2003年
化学法合成人线粒体野生型与A3243G点突变型tRNA^(Leu(UUR))基因,体外转录生成相应的tRNA^(Leu(UUR)),表达并纯化人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS),用mtLeuRS催化野生型与突变型tRNA^(Leu(UUR))与亮氨酸结合,分别检测两种类型tRNA^(Leu(UUR))的氨酰化动力学常数。结果表明,野生型tRNA^(Leu(UUR))的K_m/K_(cat)仅为突变型tRNA^(Leu(UUR))的63.9％,A3243G点突变使tRNA^(Leu(UUR))接受亮氨酸的能力明显下降,提示此为A3243G点突变致病机制之一。
汪振诚王学敏金由辛缪明永韩伟国焦炳华
关键词：基因点突变
人线粒体亮氨酰tRNA合成酶的表达、纯化及其动力学研究(英文)被引量：1
2003年
目的:构建含人线粒体亮氨酰tRNA合成酶(mtLeuRS)基因的重组表达载体,表达纯化mtLeuRS并检测其酶促动力学参数。方法:克隆mtLeuRS基因,构建入pET-24a(+)表达载体,转化大肠杆菌BL21-codonPlus(DE3)-RIL,经诱导产生带6-His标签的mtLeuRS融合蛋白,再经Ni2+亲和层析柱一步法纯化后用酶促反应检测其氨酰化活力。作为mtLeuRS酶促反应底物,人tRNALeu(UUR)由T7 RNA聚合酶体外转录生成。结果:经IPTG诱导,人mtLeuRS蛋白表达量约占细菌总蛋白量的1％～2％,1 L培养液的菌体内可收获约2 mg的纯化酶蛋白。通过体外转录生成的酶底物tRNALeu(UUR)可达转录模板的100倍。经酶促反应,人mtLeuRS可氨酰化人线粒体内tRNALeu(UUR)。反应的亲和常数(Km)为16.67μmol/L,催化常数(Kcat)为0.17s-1。结论:本实验成功克隆并表达了人mtLeuRS,并成功用于催化tRNALeu(UUR)的氨酰化。
汪振诚王学敏金由辛缪明永焦炳华
关键词：线粒体基因表达动力学纯化
人线粒体tRNA^(Leu(UUR))基因氧化损伤与修复研究被引量：4
2004年
人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤 ,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复 ,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素 .为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响 ,采用四氧嘧啶处理LO2 细胞 ,这种试剂进入细胞后 ,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似 ,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化 .由于线粒体的正常功能为修复机制所必需 ,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力 ,发现 9mmol/L四氧嘧啶培养细胞 1h后 ,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后 0 ,2 ,8和 2 4h时间点均无明显变化 .提取各组细胞的mtDNA ,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸 ,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA ,进行DNA印迹实验 ,地高辛 抗体 碱性磷酸酶系统显色 ,检测完整与断裂的mtDNA量 ,利用Poisson公式 (s=-lnP0 /P ,P0 为未断裂链光密度值 ,P为所有链光密度值总和 )计算一个mtDNA分子的平均损伤频率 ,结果显示 ,9mmol/L四氧嘧啶处理细胞 1h ,链平均损伤频率由对照的 0 11个 /分子增加至 5 6 0个 /分子 ,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤 ,除去药物后 8h ,绝大部分损伤可被修复 ,损伤频率减至
汪振诚王学敏缪明永焦炳华
关键词：线粒体DNATRNA^LEU(UUR)体外转录
一种改进的提取人外周血和组织线粒体DNA的方法被引量：7
2004年
目的 :建立一种简便、快捷地从人外周血和组织中制备高质量线粒体 DNA的方法。 方法 :以差速离心法分离线粒体 ,用碱性 SDS法裂解线粒体膜 ,释放线粒体 DNA后用酚 /氯仿抽提 ,TE或 dd H2 O溶解。然后将所得线粒体 DNA进行纯度鉴定并和其他现有方法制备的线粒体 DNA用 PCR进行长片段扩增 ,比较扩增效果。结果 :用改进的方法制备的线粒体 DNA中没有检测到核 DNA,并能有效扩增 8kb长的目的片段。 结论 :改进后的方法简便、快捷 ,制备的线粒体 DNA纯度高 ,也有利于长片段
朱克军汪振诚王学敏缪明永焦炳华
关键词：外周血线粒体DNA聚合酶链反应骨骼肌
人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体基因表达的研究被引量：4
2006年
目的:观察人肝癌SMMC-7721细胞株部分线粒体DNA(mtDNA)基因表达的情况。方法:根据人线粒体DNA(mtDNA)基因序列,利用primer premier 5.0生物软件设计了4对PCR引物,分别是扩增D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6、16sRNA基因,采用RT-PCR方法对SMMC-7721细胞线粒体DNA上D-loop区及其他3个基因的表达进行了检测,并与其在正常人肝细胞株(L02)线粒体中的表达作了比较。结果:我们发现,与正常人肝细胞株(L02)相比,在SMMC-7721细胞中,D-loop区、ND6、ATPase8-ATPase6基因表达总体是增高的,16sRNA基因表达基本不变,同时在同一基因两条链(重链和轻链)之间的表达也存在差异。结论:我们认为,由于线粒体DNA编码的多肽均是氧化磷酸化酶复合物的亚单位,这些基因表达的异常可能造成细胞对氧利用障碍,细胞能量产生减少,成为造成SMMC-7721细胞主要以糖酵解的方式提供能量的重要原因之一。
王洁王学敏龙建纲于军汪振诚焦炳华
关键词：DNA线粒体基因表达肝肿瘤细胞株
人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38年轻和衰老细胞中线粒体量和mtDNA相对含量以及功能变化的比较被引量：2
2006年
目的培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38,比较年轻和衰老细胞中线粒体量和线粒体DNA(mtDNA)相对含量的变化,以及线粒体功能的改变,探讨线粒体与衰老的关系。方法培养人胚肺二倍体成纤维细胞WI-38;四氮唑盐(MTT)比色法测细胞活力;差速离心分离线粒体,BCA-100Pr定量试剂盒测定线粒体蛋白的含量;竞争PCR法分析mtDNA的相对含量;流式细胞仪测定线粒体膜电位的变化;分光光度法测定线粒体呼吸链氧化酶-NADH氧化酶活性。结果衰老细胞较年轻细胞形成单层时间明显延长,细胞圆缩蜕变,细胞活力明显低于年轻细胞;线粒体膜电位约下降为原来的50%;NADH氧化酶活性也降低,最大反应速度由66.73nmol/(mgprotein·min)降为36.01nmol/(mgprotein·min);衰老细胞线粒体蛋白含量(0.78±0.02mg/ml)高于年轻细胞(0.56±0.03mg/ml);以核18SrDNA为内参,衰老细胞mtDNA相对含量(1.557±0.072)明显高于年轻细胞(1.292±0.068)。结论衰老细胞中,线粒体量和mtDNA相对含量的增高可能是功能下降的一种代偿性反应,为探讨线粒体与衰老的关系提供一定参考。
孙青菊龙建纲汪振诚缪明永王学敏
关键词：线粒体线粒体衰老
线粒体DNA修复系统相关酶的研究进展被引量：10
2004年
线粒体DNA(mtDNA)编码线粒体电子传递系统的亚单位以及构建翻译机器所需的各种rRAN和tRNA。mtDNA编码的每一个亚单位都是线粒体完成正常的氧化磷酸化过程所必需的,因此,线粒体DNA的完整性对于生物体的生存十分重要。长期以来,人们一直认为线粒体中不存在DNA的修复。近年来在线粒体提取物中却检测到了一定数量的修复因子,提示线粒体中存在DNA的修复。主要对线粒体修复系统中相关酶的研究进展进行综述。
朱克军汪振诚王学敏
关键词：线粒体DNAMTDNA修复系统电子传递系统
人线粒体tRNA<'Leu(UUR)>基因点突变的研究
人线粒体DNA(mtDNA)是存在在于线粒体内的双链环状DNA分子,长16,569bp,基因编码产物包括2种rRNA、22种tRNA及13种多肽链.其中多肽链是氧化磷酸化酶复合体的重要组成成分,而rRNA和tRNA则参与...
汪振诚
关键词：点突变体外转录缺失突变
文献传递
^(60)Co照射后SMMC7721细胞线粒体DNA部分非编码区断裂敏感位点初探被引量：1
2005年
目的:观察SMMC7721细胞在接受不同剂量60Coγ射线照射后线粒体DNA非编码区是否存在特定的断裂敏感点。方法:根据人线粒体DNA非编码区的基因序列设计相应的引物序列,再通过接头介导PCR(LMPCR)及基因扫描来检测其断裂程度和位点。结果:PCR产物电泳结果显示,接受不同剂量γ射线照射后,各剂量都有相同大小的片段。通过基因扫描的方法,发现不同照射剂量下的断裂位点位置是相同的。结果说明这些断裂敏感位点不是随机分布的。并且,位点的损伤频率也是随着剂量的增加而呈现递增趋势,随着剂量的增加还出现了新的断裂位点。结论:SMMC7721细胞线粒体DNA非编码区确实存在对γ射线敏感的位点。
王洁王学敏龙建纲汪振诚高建国
关键词：线粒体Γ射线肝肿瘤
线粒体:新的细胞内药物作用靶点被引量：22
2003年
线粒体除了作为细胞内能量生成的关键细胞器 ,还与细胞凋亡、自由基生成、脂质代谢等重要生化过程密切相关。近年来随着对线粒体结构和功能的深入研究 ,发现线粒体是多类药物的细胞内作用靶点 ,与相关药物之间存在广泛而复杂的相互作用。研究线粒体与相关药物之间的相互作用对于明确药物作用机制、研发新药和避免药物毒副作用等方面具有重要意义。
龙建纲汪振诚王学敏
关键词：药靶线粒体氧自由基线粒体K+通道
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