杜晞
- 作品数：64 被引量：45H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项四川省科技计划项目中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
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- 不同β-淀粉样蛋白抗体含量的IVIG对阿尔茨海默病模型小鼠认知功能干预效果初探被引量：2
- 2022年
- 目的 探讨市售不同β-淀粉样蛋白(Aβ)抗体含量的静注免疫球蛋白(IVIG)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠认知功能的干预效果。方法 选取市售的国内8个不同血液制品公司的IVIG(IVIG1~8),酶联免疫吸附(ELISA)法检测其Aβ_(40/42)抗体含量后,按高、中、低分为3种Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG做动物干预实验:将40只3月龄三转基因AD(3xTg-AD)小鼠随机均分为4组,雌雄各半,实验组(实验组1~3)分别腹腔注射高、中、低3种Aβ_(42/40)抗体水平IVIG(1 g·kg^(-1)剂量、2次/周,持续12周),对照组等量生理盐水腹腔注射。注射24次后立即利用小鼠行为学分析系统对4组小鼠做认知行为学检测及分析。结果 8种国内不同厂家生产的IVIG Aβ抗体含量(μg/mL)差异较大,Aβ_(40)单体抗体为0.7±0.05~3.1±0.05、Aβ_(40)寡聚体抗体为11.7±0.7~32.0±2.2、Aβ_(42)单体抗体为1.8±0.1~27.9±0.3、Aβ_(42)寡聚体抗体为2.3±0.1~49.4±2。从高、中、低Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG中各选择1种(IVIG-1、IVIG-8、IVIG-6)分别注射给3个实验组小鼠;不同IVIG干预后实验组1~3组与对照组小鼠认知行为检测分析:旷场试验中进入中心区域时间(s)分别为0.5±0.9、23.4±6.1(P<0.01)、4.6±2.8、2.6±2.3,粪便数量(粒)分别为1.6±0.7、1.2±0.4、2.4±0.5、3.8±0.8(P<0.01);新物体识别试验:探索新物体分值分别为71.3±29.5、71.8±20.5、75.9±26.9、25.6±23.7(P<0.05);巴恩斯迷宫试验:实验组2与对照组小鼠探索目标洞时间(min)在d6为(50.3±19.3 vs 21±14.6(P<0.05)、d13为58.2±20.9 vs 19.2±15.9(P<0.05),其他各实验组与对照组相比无明显变化。结论 目前市售的产自国内的IVIG制品的Aβ_(40)/_(42)抗体水平存在明显差异;3月龄3xTg-AD小鼠经过其连续干预3个月后,认知功能均有所改善,改善效果与IVIG中Aβ抗体有关,但与抗体浓度不呈正相关。
- 费章城陈钟声裴仁俊杜晞叶生亮谯从超曹海军李长清
- 关键词：静注免疫球蛋白阿尔茨海默病
- 不同胶原包被条件对血管性血友病因子胶原结合法测定FⅧ制品中血管性血友病因子的影响
- 杜晞李长清林方昭叶生亮王宗奎曹海军袁靖
- 正交试验法优化凝血酶原复合物的制备工艺被引量：7
- 2012年
- 目的采用正交试验法优化凝血酶原复合物（Prothrombin complex concentrate,PCC）的制备工艺。方法取DEAE-Sephadex A-50凝胶平衡体系中的柠檬酸钠、氯化钠、pH值3因素,每因素取3水平设计正交试验;称取9等份DEAE-Sephadex A-50凝胶干粉,分别采用试验设计的平衡体系进行平衡;平衡后的凝胶分别与等量健康人去冷沉淀混合血浆混合,制备凝血酶原复合物浓缩物;测定浓缩物蛋白浓度及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性,获得4种凝血因子比活;通过正交试验直观分析及直接对比法确定较优及较差比活制备条件,对确定的条件进行验证;测定平衡体系电导率,分析正交试验中平衡体系电导率与4种凝血因子比活的相关性。结果正交试验直观分析法与直接对比法确定的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ较优比活凝胶平衡条件一致：柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.06~0.10 mol/L,pH 6.9~7.2;两种方法确定的较差平衡条件不同,分别为：柠檬酸钠0.012~0.02 mol/L、氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5及柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5,经实验验证,两种方法确定的较优条件比活均优于较差条件,但两种较差条件中,直接对比法确定的条件更符合实际。平衡液电导率与4种凝血因子比活之间不存在线性关系,但在不同电导率条件下,4种凝血因子比活有较大波动,电导率9.67~10.34 ms/cm,4种凝血因子比活均较高;电导率12.16~12.90 ms/cm,4种凝血因子比活均较低。结论正交试验可用于凝血酶原复合物制备工艺优化,但不同分析方法结果有一定差异。平衡体系电导率对凝血酶原复合物比活有一定影响,在工艺优化时应予注意。
- 曹海军叶生亮王宗奎张学俊杜晞刘彬李志雄狄姗姗李长清
- 关键词：正交试验凝血酶原复合物
- 毛细管区带电泳用于血浆蛋白质混合物的分析被引量：2
- 2012年
- 目的探索建立采用毛细管区带电泳(CZE)法分析血浆相关蛋白质的条件和方法。方法 1)以血浆COHN法组分Ⅳ(CFⅣ)抽提液为样品,代表蛋白质混合物,分别从波长、基本缓冲液、添加剂、PH、温度等方面,摸索CEZ分析蛋白质混合物的较优条件和方法;2)将摸索得到的较优条件下的CZE分析CFⅣ抽提液的结果,并与通过高效液相色谱(HPLC)法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及双向电泳(2-DE)法分析CFⅣ抽提液的结果比较;3)采用较优条件下的CZE法分析标准血浆、标准血浆经离子交换层析(IEC)的FⅧ粗提液等,考察该条件是否适用于血浆中的其他组分。结果 1)CZE法分析CFⅣ抽提液的较优条件为:20℃以214 nm紫外吸收波长,0.5 psi压力进样10 s,10 kV恒压分析50 min,缓冲体系为pH 9.0的0.04 mol/L硼酸硼砂、0.05%SDS、0.007 5%腐胺;2)采用此条件的CZE法分析CFⅣ得到14个蛋白峰、分析时间50 min,HPLC法分析得到10个蛋白峰、分析时间60 min,SDS-PAGE法分析得到11条蛋白条带、分析时间120 min,2-DE法分析得到14个蛋白点数(与CZE分析的蛋白峰数数量相同)、分析时间3 d;3)CZE法用于标准血浆、标准血浆经离子交换层析的FⅧ粗提液的分析可分别分辩出22和11个蛋白峰。结论以CZE法分析血浆相关蛋白混合物与现有分析方法比较,能达到较好的分析效果,经摸索确定的较优分析条件具有一定的通用性。
- 魏薇李长清林方昭杜晞张学俊肖小璞
- 关键词：毛细管区带电泳血浆蛋白质高效液相色谱
- ThT结合试验法检测Aβ42聚集情况的条件探讨被引量：2
- 2018年
- 目的探讨硫黄素（ThT）结合试验法检测β-淀粉样多肽1-42（Aβ42聚集情况的条件。方法 Aβ42六氟异丙醇（HFIP）单体化处理后,进行复溶,然后将Aβ42ThT溶于缓冲体系,一定温度下于96孔板中共孵育不同时间,酶标仪检测450 nm激发下485 nm的荧光强度。分析Aβ42同的浓度,孵育温度,96孔板类型,缓冲液种类以及复溶方式对ThT结合试验法测定Aβ42集情况的影响。结果在ThT结合试验法中,Aβ42育浓度与荧光值成线性正比关系,孵育温度对此正比关系无较大影响;选用半透明板及PBS缓冲体系与其它条件相比,此线性正比关系更稳定;以最终NH3·H2O 20 mmol/L的浓度加入1%NH3·H2O对单体化处理后的Aβ42溶,并进行过滤的方法,与其它方法相比,寡聚体更少,以最终2%v/v（DMSO/PBS）的比例加入二甲基亚砜（DMSO）进行复溶的方法,寡聚体较多,且Aβ42快更多地发生了聚集;而利用ThT结合试验法研究Aβ42单体到聚合体进程变化的动力学时,使用20 mmol/L NH3·H2O复溶方式进行复溶,观察到的动力学趋势过程更明显直观。结论不同条件对ThT结合试验法检测Aβ42集情况的结果影响较大,条件不同结果不同,实验中应根据实验目的及具体情况来选择不同的条件。
- 刘园园杜晞刘凤娟林方昭曹海军李长清
- 关键词：Β-淀粉样多肽缓冲液
- 不同胶原包被条件对血管性血友病因子胶原结合法测定FⅧ制品中血管性血友病因子的影响
- ＜正＞目的通过考察不同胶原包被条件对vWF与胶原的结合的影响,建立1种灵敏度高、重复性高的vWF:CBA法用于检测FⅧ制品中的vWF活性。方法将胶原Ⅲ分别按以下4组不同条件包被:不同pH的缓冲液（pH分别为2.8,4.0...
- 杜晞李长清林方昭叶生亮王宗奎曹海军袁靖
- 文献传递
- 洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物有效成分的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子(F)Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及蛋白(P)C、S、Z、抗凝血酶(AT)8种有效成分收率及比活的影响。方法选择洗脱条件中柠檬酸钠、NaCl、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据正交表配制不同洗脱体系;采用DEAE-Sephadex A-50凝胶,相同平衡、洗涤条件及上述不同洗脱体系,批式吸附法制备PCC浓缩物;检测浓缩物中8种成分的活性或含量,获得各成分的收率及比活;正交试验分析不同洗脱条件及其因素对8种成分收率及比活的影响。结果不同洗脱条件8种成分收率及比活有一定差异,2.4 mol/L NaCl条件比活总体较高。在所考察范围内,柠檬酸钠对FⅡ、FⅨ、FⅩ、PC、AT收率和PC、PS、AT比活有较大影响;NaCl对FⅦ、FⅩ、PS、PZ收率和FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、PZ比活有较大影响。不同水平条件,柠檬酸钠及NaCl含量越高,4种凝血因子收率与比活越高,但对4种抗凝蛋白收率及比活影响无规律;pH6.6水平,4种凝血因子收率较高,pH6.9,其比活较高,pH对4种抗凝蛋白收率与比活的影响无规律。结论洗脱条件中高浓度的NaCl可提高PCC的整体比活;低浓度的柠檬酸钠对PCC有效成分收率及比活也有较大影响;pH对PCC中凝血因子(FⅡ,Ⅶ,Ⅸ,Ⅹ)收率及比活的影响分别有共性,对抗凝蛋白(PC,PS,PZ,AT)的影响则无规律。
- 曹海军李志雄叶生亮王宗奎杜晞张学俊林方昭李长清
- 关键词：凝血酶原复合物凝血因子抗凝蛋白收率
- 献浆者因素及保存条件对部分凝血因子的影响被引量：5
- 2016年
- 目的系统分析ABO血型系统、年龄、性别及保存条件等对血浆中凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性和纤维蛋白原(Fbg)含量的影响。方法用凝固法检测101份不同血型、年龄、性别的来自正常献浆者的新鲜冰冻血浆中的FⅧ活性和Fbg含量。10份非O型(A、B、AB型)的血浆在融化分样后分别保存在4℃和室温(24±2℃)条件,然后在0、1、2、3、4、5、6、8、12、16、20和24 h分别检测FⅧ:C和Fbg含量。结果血型对FⅧ:C有显著性影响,O型比非O型个体低约28%(P<0.05),但对Fbg含量无影响。FⅧ(r=0.41,P<0.05)和Fbg(r=0.46,P<0.05)与年龄有显著的线性相关,都随年龄的增加而增加,每增长1岁,FⅧ:C约增加1%。51-56岁的比小于30岁的人群中FⅧ和Fbg均高约30%。性别对FⅧ和Fbg均无显著性影响。4℃和室温两种保存条件对FⅧ和Fbg无显著性影响。保存24 h,FⅧ活性减少约30%(P<0.05),Fbg含量基本无变化。结论 FⅧ:C和Fbg含量随年龄的增高而增高,O型人群比非O型的FⅧ显著地低,性别对FⅧ和Fbg均无影响。24 h内,4℃和室温2种保存条件对FⅧ和Fbg无显著性影响,FⅧ随时间降低,而Fbg基本无变化。
- 王宗奎窦苗苗杜晞曹海军叶生亮马莉张容刘凤娟李长清李天成谯时文
- 关键词：ABO血型年龄性别纤维蛋白原
- ThT试验法探究不同Aβ42抗体含量IVIG干预Aβ42聚集的能力被引量：1
- 2019年
- 目的探讨检测国产IVIG中β-淀粉样蛋白1-42(Aβ42)抗体含量与检测干预Aβ42聚集能力间的关联性,为我国IVIG防治阿尔茨海默症的临床前评价提供研究基础。方法采用ELISA法,选择Aβ42抗体含量成梯度浓度的5种国产IVIG作为检测对象;利用正交试验探索硫磺素T(Th T)试验测定Aβ42聚集的最佳Th T、Aβ42工作浓度并进一步确定IVIG检测浓度;采用上述优化的Th T试验条件检测5种国产IVIG对Aβ42聚集的干预效果,并与其Aβ42抗体含量作对比分析。结果 5种国产IVIG中Aβ42抗体含量(μg/m L)分别为2.08、14.79、25.42、51.41、84.24;确定Th T法测定Aβ42聚集的Th T、Aβ42最佳工作浓度(μmol/L)分别为6.3、12,3种浓度(0.5、5、50)均适宜于检测IVIG;Th T试验:5种IVIG抑制Aβ42聚集的能力在3个浓度水平间均未出现一致的强弱趋势,也未出现随Aβ42抗体含量升高而增强的趋势。结论 ThT试验测得IVIG抑制Aβ42聚集的能力与ELISA法测得的Aβ42抗体含量间没有明显关联性,IVIG制品中Aβ42抗体含量在体外并不能直接反映其抑制Aβ42聚集的能力。
- 吕兆吉杜晞刘园园张容马莉王宗奎叶生亮曹海军李长清
- 关键词：IVIG阿尔茨海默症
- 液体加热装置
- 本实用新型专利涉及加热用具，具体涉及液体加热装置，包括杯体和液体容器，该液体容器可分离的设置于杯体内，用于使杯体内壁与液体容器外壁之间形成填料空腔；其中，所述液体容器内侧设置有连通所述填料空腔的排气管，该排气管设置有用于...
- 曹海军杜晞李长清王宗奎刘凤娟叶生亮
