杜娟
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：质检公益性行业科研专项项目深圳出入境检验检疫局科研项目国家质检总局科技计划项目更多>>
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- 两株传染性造血器官坏死病病毒的分离及其糖蛋白基因序列分析被引量：3
- 2012年
- 对所分离编号为20101008和20101032的两株传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的糖蛋白编码基因进行遗传进化分析,以揭示我国毒株与其他不同国家和地区毒株间的遗传进化关系。以反转录RCR(RT-PCR)法扩增其糖蛋白(G)编码基因,然后克隆入PMD-18T载体并测序。应用DNAStar和MEGA4.0软件,将20101008和20101032的G基因与多株GenBank中已发表的IHNV毒株相应基因进行比较。结果表明两株病毒间G编码基因的核苷酸和推导出来的氨基酸同源性分别为98%和81.9%,其氨基酸序列分别发生了35和20处氨基酸的替换。20101008和20101032与日本、韩国分离株同源性较高,核苷酸及推导出来的氨基酸同源性分别为93.3%～96.4%和75.9%～84.6%;两株病毒在进化关系上亲缘关系最近,属于同一分支,均为基因U型传染性造血器官坏死病病毒,但其G基因的核苷酸序列以及推导出来的氨基酸序列与已知的基因U型IHNV都有一定的差异。
- 申斯思郑晓聪刘荭史秀杰贾鹏兰文升何俊强张朋余剑敏杜娟肖启明康林
- 关键词：糖蛋白同源性进化分析
- 枳低温响应基因ERF109和ZFP1转化柑橘及转基因植株鉴定
- 柑橘在我国水果产业中占据了十分重要的经济地位,然而其产量和品质受周期性冻害影响严重。因此,开展柑橘的抗寒育种研究十分重要。遗传转化是获得抗逆种质的途径之一。本研通过根癌农杆菌介导的方法将从枳(Poncirus trifo...
- 杜娟
- 关键词：柠檬低温胁迫
- 鱼类病毒性出血性败血症病毒单克隆抗体的制备及其核蛋白基因的原核表达
- 本研究利用纯化的病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus，VHSV)以及原核表达的VHSV核蛋白作为免疫原，分别制备了抗VHSV全病毒的单克隆抗体以及抗核蛋白的多克隆抗...
- 杜娟
- 关键词：单克隆抗体核蛋白基因原核表达
- 鲤春病毒血症病毒单克隆抗体的制备及其特性鉴定被引量：4
- 2011年
- 为获得针对鲤春病毒血症病毒(SVCV)特异性的单克隆抗体(MAb),以纯化的SVCV为抗原,免疫BALB/c小鼠。将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法筛选获得4个能稳定分泌抗SVCV MAb的杂交瘤细胞株;4个杂交瘤细胞制备腹水的MAb效价为1∶160000～1∶640000。亚型鉴定结果表明,这些MAb分属2个亚型(1F1、3E1,IgG2a;3F5、4F9,IgG1),轻链均为Κ链。Western blot分析显示,MAb1F1、3F5、4F9能特异性地识别SVCV的N蛋白(47ku),3E1能特异性地识别SVCV的G蛋白(69ku)。采用相加ELISA法对抗原表位分析结果显示,1F1、3F5、4F9可能识别相同的表位,3E1则识别不同的表位。间接免疫荧光试验结果显示4株MAb均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。这些MAb的制备为SVCV免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张朋刘荭陈孝煊吴志新余剑敏杜娟兰文升史秀杰郑晓聪何俊强贾鹏申斯思朱家增
- 关键词：鲤春病毒血症病毒单克隆抗体N蛋白
- 鱼类病毒性出血性败血症病毒核蛋白基因的原核表达被引量：1
- 2012年
- 通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)获得编码病毒性出血性败血症病毒(Viral hemorrhagic septicemia virus,VHSV)核蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET28a,并在E.coli BL21(DE3)中得到表达,用SDS-PAGE与Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 221bp核蛋白基因片段,诱导表达重组质粒pET28a-N,经SDS-PAGE检测,IPTG终浓度为1mmol/L时,诱导5h蛋白表达量最高,获得的目的蛋白大小与N蛋白的预测分子质量一致,约为48ku。诱导后的菌液进行超声波破碎后,将沉淀和上清分别用于SDS-PAGE电泳,结果表明目的蛋白主要以包涵体的形式存在。表达蛋白经过复性、纯化,得到了较高纯度的可溶性蛋白。经Western-blot检测表明,该表达产物能被羊抗VHSV阳性血清特异性识别。
- 杜娟兰文升刘荭郑晓聪陈孝煊
- 关键词：核蛋白基因克隆原核表达可溶性蛋白
