李劼
- 作品数：74 被引量：159H指数：6
- 供职机构：石河子大学更多>>
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- 相关领域：农业科学轻工技术与工程文化科学生物学更多>>
- 犊牛肺炎大肠杆菌的分离鉴定、耐药性及致病力检测
- 2023年
- 为确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为呼吸道症状病死犊牛的细菌性病原,本研究采用常规细菌分离、PCR及生化鉴定方法从采集的病牛组织中分离并鉴定病原菌,采用PCR方法对其系统进化分群、采用K-B纸片扩散法检测细菌的药物敏感性、采用PCR方法分别检测细菌的耐药基因和毒力基因,经腹腔注射菌液进行小鼠的致病性试验,对分离菌株进行生物学特性研究。分离及鉴定结果显示,从病死犊牛的肺脏分离鉴定出的2株大肠杆菌(E1和E2)分属于A群和B1群;药敏试验结果显示两株分离菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、头孢哌酮、美罗培南、链霉素、妥布霉素、多西环素、麦迪霉素、阿奇霉素、氟苯尼考、替考拉宁、克林霉素耐药;且2株分离菌均检测到β-内酰胺类的blaTEM、喹诺酮类的aac(6')-Ib、gyrA共3种耐药基因以及crl、csgA、fimH、pap、motA、hlyE、iucD、ompA、espA、LuxS、fyuA、pta共12种毒力基因;分离菌株耐药基因与耐药表型的结果表明分离菌株表现较强的多重耐药现象;小鼠的致病性试验结果显示分离菌株均为致病性大肠杆菌,E1菌株感染小鼠在32 h内全部死亡,E2菌株感染后36 h内死亡3只小鼠。感染小鼠死亡后剖检发现肺脏大面积出血。结果表明新疆石河子地区某规模化牛场表现为呼吸道症状病死犊牛的病原是致病性大肠杆菌,且分离菌表现较强的多重耐药现象并携带大量的毒力基因,但E2菌株的耐药基因与耐药表型相关性不强。本研究为新疆地区大肠杆菌所致犊牛肺炎的防治提供参考依据。
- 操义恒吴桐忠王子杰张乾义张星星张倩韩猛立钟发刚黄新周霞李劼
- 关键词：犊牛肺炎致病性大肠杆菌耐药表型耐药基因毒力基因
- 致犊牛脑炎大肠杆菌分离鉴定、耐药性及毒力基因检测被引量：1
- 2022年
- 为了确定新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原及其生物学特性,为后期新疆地区犊牛大肠杆菌病的防制及研究提供基础,研究采用常规细菌分离鉴定方法以及16S rRNA基因测序分析从病变组织中分离鉴定细菌,并对分离株进行药物敏感性试验、致病性试验以及特异基因PCR检测,对分离株进行耐药基因和毒力基因的分析。结果显示,从病死犊牛的肺脏和脑组织共分离鉴定出3株致病性较强的大肠杆菌;3株菌对青霉素、阿莫西林、头孢他啶、头孢唑啉、头孢拉定、链霉素、庆大霉素、多西环素、麦迪霉素、氟苯尼考、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、替考拉宁、克林霉素表现出100%耐药,对多黏菌素B、阿奇霉素表现出高度敏感;从3株分离菌中均检测到blaCTX-M、sul1、sul2、gyrA、aadA1、aacC2、aph(3’)-Ia、tetB等8种耐药基因以及crl、hlyE、iucD、papC、malX、ompA、opmC、ompF、irp2等9种毒力基因。结果表明,新疆石河子地区某规模化牛场表现为神经症状的病死犊牛的细菌性病原是大肠杆菌,且表现较强的多重耐药现象,分离株携带丰富的耐药基因以及毒力基因。
- 操义恒马雪张丽媛李劼周霞黄新韩猛立吴桐忠张星星钟发刚
- 关键词：致病性大肠杆菌耐药表型毒力基因耐药基因
- 基于氧化石墨烯-SELEX技术对氟苯尼考核酸适配体的筛选及其结构分析被引量：1
- 2021年
- 氟苯尼考(FFC)具有胚胎毒性,在食用动物组织中残留会严重危害消费者的健康与安全。为建立快速检测动物性食品中FFC残留的方法奠定基础,本研究根据引物设计原则,设计了上下游引物,根据引物序列构建长度为80 bp的随机单链寡核苷酸(ssDNA)文库,其3'端和5'端为固定的20 bp引物结合位点,中间为40 bp的随机序列。通过氧化石墨烯-富集配体系统进化技术(GO-SELEX)筛选,即将经过预处理的ssDNA文库与等摩尔量的FFC及氧化石墨烯(GO)沉淀共孵育。通过GO的π-π共轭键吸附未结合靶标FFC的ssDNA,已结合靶标的ssDNA(FFC-ssDNA)则留在上清液中,通过离心获得FFC-ssDNA复合物。将每一轮筛选的FFC-ssDNA复合物经离心、抽提、醇沉淀回收所得到的ssDNA做为模板进行PCR扩增,通过链霉亲和素将PCR产物的双链DNA(dsDNA)彻底裂解为单链,作为次级ssDNA文库进入下一轮筛选。每一轮的筛选均计算一次回收率,当回收率变化趋于稳定时,引入反筛选物氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP),以去除与FFC特异性结合较差的ssDNA。当回收率达到饱和,筛选停止。最终,根据回收率的计算结果共进行了12轮核酸适配体的筛选,其中有10轮为正筛选,第7轮和第11轮为反筛选。PCR结果显示,经12轮筛选均得到了所需要的目的ssDNA片段。对第9轮和第12轮的筛选产物克隆并测序,共得到46条不同的核酸适配体序列。经对46条核苷酸序列的二级结构、自由能(△G)预测和亲缘性分析,最终得到A1、A26、A27、A31、B18、B28、B30、B37共8条候选核酸适配体。通过测定8条候选适配体的解离常数(Kd值)分析其与FFC的亲和性。结果显示,8条候选适配体的Kd值在11.811 nmol/L~54.097 nmol/L;利用相同浓度的FFC、CAP、TAP对其中亲和性较高的A26和B18进行特异性试验,结果表明两条核酸适配体均可以与FFC特异性结合,且B18与FFC的特异性结合作用更强,可作为FFC的特异性核酸�
- 肖海华王君雁李劼
- 关键词：氧化石墨烯氟苯尼考核酸适配体
- 一种芽孢杆菌、利用该芽孢杆菌进行抗生素残留检测的方法及其应用
- 本发明属于抗生素的微生物检测技术领域，尤其涉及一种芽孢杆菌、利用该芽孢杆菌进行抗生素残留检测的方法及其应用。该研究结果为TTC法的推广应用提供了一株方便易得的指示菌。该菌为革兰氏阳性菌，具体为地衣芽孢杆菌，该地衣芽孢杆菌...
- 李劼王震冶晓芳周坤张小千
- 文献传递
- 培养温度对嗜热链球菌抑制法检测结果的影响
- 2019年
- 为了了解培养温度对嗜热链球菌抑制法检测结果的影响,试验取装有浓度为1 mg/L的嗜热链球菌液体管,在6个不同温度下分别进行培养基划线培养与菌落计数,并进行加样牛奶的抗生素检测。结果表明:在49℃下嗜热链球菌抑制法检测效果最好,菌落生长情况最好。说明在49℃下进行试验有利于结果的判定,提高了嗜热链球菌抑制法检测的准确性。
- 张小千李劼
- 关键词：温度嗜热链球菌菌落计数
- 绵羊脑炎单核增生性李斯特菌LM90 SB_2鞭毛基因FlaA的敲除及对毒力影响的研究被引量：2
- 2018年
- 目的研究缺失了flaA基因编码的鞭毛蛋白对LM90 SB_2的毒力等方面的影响。方法应用同源重组技术构建LM90 SB_2的flaA基因突变株,通过生长曲线的测定、运动性试验、BF形成能力以及LD_(50)的测定来探究缺失flaA基因后对LM90 SB_2毒力的影响。结果与野毒株相比突变株菌落形态未发生改变,仍具有良好的遗传稳定性,但生长变缓,在25℃的环境中运动性显著降低,突变株BF形态结构更加松散和不完整;野毒株和突变株的小鼠LD_(50)的菌量分别为4.27×10~6cfu和1.62×10~7 cfu。结论 flaA基因可以影响LM90 SB_2的鞭毛的形成,缺失flaA基因后LM90 SB_2形成BF能力以及菌株的毒力显著下降。
- 孔静雅郭强强王燕如王蕾邬琴李劼马勋周霞
- 关键词：鞭毛生物被膜半数致死量
- 仙人掌粉对奶牛泌乳性能、乳成分及氮代谢的影响被引量：1
- 2020年
- 文章旨在评估日粮添加不同水平的烘干仙人掌粉对奶牛泌乳性能、乳成分及氮代谢的影响。试验将体重为(514±48)kg、泌乳量为(13.4±1.87)kg的40头荷斯坦奶牛随机分为5组,每组8个重复,每个重复1头奶牛。对照组饲喂基础日粮,处理组分别饲喂基础日粮添加2%、4%、6%和8%的仙人掌粉,各组保持营养水平一致。结果:与对照组相比,日粮添加不同水平的仙人掌粉显著降低了奶牛干物质、有机物、粗蛋白质、总可消化养分和非纤维碳水化物的摄入量及干物质占体重的摄入量(P<0.05),2%仙人掌粉组干物质表观消化率显著降低(P<0.05)。日粮添加不同水平的仙人掌粉对奶牛血清代谢物浓度无显著影响(P>0.05)。氮摄入量在添加不同水平的仙人掌粉组表现为显著降低(P<0.05),同时日粮添加不同水平的仙人掌粉显著降低了乳中脂肪、蛋白质、总固形物的含量(P<0.05)。结论:随着仙人掌粉的添加水平的升高,奶牛泌乳量显著升高,添加水平达到8%时可以达到玉米-牧草-青贮高粱的饲喂效果。
- 陈强斌李新萍李劼李留疆张孝恩赵艳梅胡青
- 关键词：仙人掌粉奶牛乳成分氮代谢
- 牛源A型多杀性巴氏杆菌(Pm12)灭活疫苗的制备及小鼠攻毒保护试验被引量：3
- 2021年
- 为了防控新疆北疆A型多杀性巴氏杆菌(Pm)引起的牛纤维素性化脓性肺炎,分析制备的A型Pm12灭活疫苗在试验小鼠体内抗体产生情况和保护作用,试验按细菌灭活疫苗制备程序将分离筛选自新疆北疆部分地区发病牛场的1株毒性强、免疫原性好的牛源A型Pm12制备成灭活疫苗,并进行安全检验。根据棋盘法对全菌抗原包被浓度、封闭液、血清稀释度、酶标二抗工作浓度、封闭时间、一抗孵育时间、二抗孵育时间及底物反应时间等检测条件进行筛选,建立检测小鼠血清抗体的间接ELISA方法,用建立的间接ELISA方法测定免疫小鼠血清抗体产生规律,对免疫小鼠以不同半数致死量(LD50)的Pm12进行攻毒保护试验,同时用A型和B型Pm对免疫小鼠进行交叉保护试验。结果表明:制备的牛源A型Pm12灭活疫苗含菌量为8×109cfu/mL,安全检测合格。根据棋盘法确定全菌抗原包被浓度为1∶25,最佳血清稀释度为1∶320~1∶640,最适封闭液为5%BSA,最适封闭时间为1 h,血清最适作用时间为1 h,酶标抗体最适稀释度为1∶3 000,底物最适作用时间为15 min;用制备的疫苗免疫小鼠后,60天的血清抗体效价均高于28天水平;Pm12灭活苗对不同LD50攻毒小鼠的保护率为80%、80%、50%,对A型Pm保护率为80%,对B型Pm的交叉保护率为60%。说明可用试验建立的方法检测小鼠血清抗体水平,制备的牛源A型Pm12灭活疫苗能够诱导小鼠产生较高水平且持续较长时间的血清抗体,能够有效保护小鼠对抗A型Pm感染,且对B型Pm呈现部分交叉保护作用。
- 陶乔孝慈邬琴顾晓晓马雪李劼周霞张星星黄新吴桐忠韩猛立钟发刚
- 关键词：灭活疫苗小鼠抗体水平免疫保护
- 市售鱼体中总汞和铅含量的检测被引量：1
- 2007年
- 采集石河子市的5个主要农贸市场所售的4种鱼类,首次对鱼体中总汞和铅含量进行检测。结果表明,产自不同地方鱼体中总汞和铅含量存在显著差异;27.8%的鱼体总汞含量超标,72.2%的鱼体铅含量超标。
- 李劼张玲白丰岭
- 关键词：总汞铅
- flaA基因的缺失对绵羊脑炎单核细胞增生李斯特菌的细胞黏附、侵袭能力及生物被膜形成能力影响的研究被引量：1
- 2020年
- 为了探究flaA基因对单核细胞增生李斯特菌LM90SB_2黏附和侵袭MBMEC、RAW264.7能力、生物被膜(BF)形成能力的影响,本研究分别进行了flaA基因缺失株LM90SB_2-ΔflaA与野毒株LM90SB2对细胞黏附和侵袭试验,定性定量分析了他们生物被膜形成能力以及小鼠不同脏器中载菌量差异。结果显示:LM90SB_2-ΔflaA对MBMEC的黏附菌数较野毒株LM90SB_2低,且两者差异性显著(P<0.05),两者对MBMEC的侵袭数差异性不显著(P>0.05),而LM90SB_2-ΔflaA对RAW264.7的黏附和侵袭数均显著低于野毒株LM90SB_2(P<0.05);LM90SB_2-ΔflaA与LM90SB_2的BF形成规律基本相同,但缺失株形成的BF总量显著低于野毒株的(P<0.05),且与野毒株相比,缺失株的BF结构中核酸与多糖的分布均松散、稀疏、散点状分布。本研究结果表明,flaA基因对LM90SB_2的细胞黏附和侵袭能力均有影响,在其BF形成过程中发挥着重要的作用。
- 柴迎锦孔静雅邬琴李劼周霞马勋韩猛立
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌细胞黏附细胞侵袭生物被膜
