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胆囊切除对小鼠肠道中碱性鞘磷脂酶的表达与活性影响研究: 2016年; 目的本研究通过小鼠胆囊切除模型探讨了胆囊切除对肠道内碱性鞘磷脂酶（Alk-SMase）表达和活性的影响以及熊去氧胆酸（UDCA）的干预效果.方法利用手术切除小鼠胆囊建立胆囊切除小鼠模型;利用高校液相色谱检测小鼠粪便中胆汁酸含量,利用蛋白印迹实验以及液闪烁仪计数发分别检测Alk-SMase蛋白表达水平及其活性.结果与对照组相比,切除了胆囊的小鼠的胆酸（CA）以及鹅脱氧胆酸（CDCA）水平降低;脱氧胆酸（DCA）的水平升高;而石胆酸（LCA）的水平没有发生变化.对切除胆囊的小鼠进行口服UDCA干预之后,胆囊切除的小鼠的CA以及CDCA水平升高,而DCA的水平降低;LCA的水平没有发生变化.在切除了胆囊之后,小鼠肠组织中的Alk-SMase蛋白的表达水平以及活性与对照组相比显著性的降低;在对胆囊切除的小鼠利用UDCA进行了干预之后,Alk-SMase蛋白的表达水平以及活性显著性的高于没有进行干预组.结论口服UDCA干预胆囊切除的小鼠可以有效阻止胆囊切除引起的粪便中胆汁酸含量以及肠组织中Alk-SMase蛋白的表达水平以及活性的变化.; 施文冯士春翟晓峰唐翀秦炜颜姜湉孙永强; 关键词：胆囊切除

B16F10-ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗抑制小鼠黑色素瘤肺转移的效应与机制初探被引量：2: 2014年; 目的探讨B16F10—ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗抑制小鼠黑色素瘤肺转移的效应和机制。方法将12只C57BL／6小鼠，分为瘤苗免疫组（给予B16F10-ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗免疫）和对照组（未给予瘤苗免疫）。B16F10—ESAT-6-gpi／IL-21瘤苗免疫小鼠后，经尾静脉注射B16F10细胞，观察肺转移情况；采用细胞毒实验分析瘤苗免疫小鼠的细胞毒性T淋巴细胞活性；酶联免疫吸附试验检测免疫小鼠的血清γ-干扰素（IFN-γ）水平；逆转录聚合酶链反应方法检测瘤组织中转化生长因子β2（TGF-β2）、锌指增强子结合蛋白1（ZEB1）、丝裂原活化蛋白激酶4和β-肌动蛋白的表达；免疫荧光检测瘤组织中E-钙黏蛋白和N-钙黏蛋白的表达。结果瘤苗免疫鼠肺部肿瘤的结节数明显少于对照组。对照组和瘤苗免疫组小鼠肺脏重量分别为（406．3±27．12）mg和（285．8±19．01）mg，差异有统计学意义（P=0．0054）。瘤苗免疫组小鼠CD8^＋T细胞对靶细胞的杀伤率[（42．62±3．465）％]明显高于对照组[（22．29±1．804）％]，差异有统计学意义（P=0．0032）。瘤苗免疫组和对照组小鼠血清中IFN-γ水平分别为（55．200±7．173）pg／ml和（6．435±1．339）Pg／ml，差异有统计学竞义（P=0．0003）。免疫鼠瘤组织TGF-β2、ZEB1、N-钙黏蛋白表达水平下降，而E-钙黏蛋白表达水平上升。结论B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫能抑制小鼠黑色素瘤肺转移，这与CD8^＋T细胞为主的细胞免疫应答有关，与瘤苗诱导高水平IFN-γ影响肿瘤组织上皮间质转换有关。; 何向锋施文赵枫姝王建红徐小红谭清和孙永强陈登宇窦骏; 关键词：黑色素瘤癌症疫苗小鼠

罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中新生血管及血管内皮生长因子表达的影响: 2010年; 目的探讨罗非昔布对裸鼠人胃癌组织中新生血管及血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达的影响。方法建立BALB/C nu/nu裸鼠人胃腺癌SGC-7901细胞株原位种植转移模型,在种植术后1周以罗非昔布0.2 mL,5 mg.kg-1.d-1给裸鼠灌胃,连续8周后,对荷瘤鼠行彩色多普勒探查,观察胃肿瘤新生血管的形态和数量,通过免疫组织化学Envision法及RT-PCR方法检测胃癌组织中的VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达。结果各治疗组肿瘤血管体积[罗非昔布组(9.96±3.58),5-FU组(9.74±2.83)及联合组(8.25±3.14)]与生理盐水对照组(13.10±4.00)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF蛋白表达及VEGFmRNA检测结果显示,各治疗组与生理盐水对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论环氧合酶-2抑制剂罗非昔布可以通过降低胃癌肿瘤组织中VEGF蛋白及VEGFmRNA的表达,减少肿瘤血管数量,抑制胃癌细胞的生长和转移。; 孙永强施文郑国静王强章建全; 关键词：血管内皮生长因子A

5-FU和奥沙利铂对结肠癌细胞自噬与外泌体释放的影响及其机制探讨被引量：1: 2023年; 目的:探究5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和奥沙利铂对小鼠结肠腺癌CT26.WT细胞自噬与外泌体释放的影响及两者之间的关联机制。方法:通过蛋白印迹试验(Western blot)检测经正常培养、5-FU、奥沙利铂和饥饿培养处理CT26.WT细胞后自噬相关蛋白以及胞吐调节蛋白Syntaxin的表达情况,利用激光扫描共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)检测CT26.WT细胞内多泡体与自噬小体的相对位置关系以及多泡体与溶酶体的相对位置关系。利用超速离心法提取定量培养各组细胞的培养上清液中的外泌体,用Western blot检测与多泡体的形成和外泌体的释放有关的Syntaxin及外泌体标志蛋白表达情况。结果:5-FU、奥沙利铂和饥饿处理CT26.WT细胞均可诱导细胞自噬的发生,CLSM下可分别观察到部分多泡体同自噬小体,部分多泡体同溶酶体发生位置重合。CT26.WT细胞经饥饿培养后,Syntaxin蛋白较正常对照组表达下调,经5-FU或奥沙利铂处理后,Syntaxin蛋白同正常对照组相比表达无明显变化。5-FU和奥沙利铂处理组的外泌体EGFP-CD63蛋白表达较正常对照组明显下降。结论:5-FU和奥沙利铂不影响CT26.WT细胞内多泡体的形成,但均可诱导CT26.WT细胞发生自噬,并促进多泡体经自噬溶酶体途径降解,从而下调外泌体的释放。; 施文何向锋陈锦鹏孙永强周志强蔡明邱建; 关键词：5-氟尿嘧啶奥沙利铂结肠腺癌细胞自噬外泌体

短发夹RNA干扰技术沉默趋化因子受体7基因表达对结肠癌LoVo细胞侵袭、转移能力的影响被引量：5: 2015年; 目的通过对趋化因子受体7（CXCR7）的基因干扰,观察其对人结肠癌细胞株LoVo的侵袭、转移能力的影响.方法将靶向CXCR7基因的携带短发夹RNA（shRNA）表达的质粒转入LoVo细胞株,以体外侵袭实验观察LoVo细胞侵袭能力的改变;将36只裸鼠分成3组,行种植成瘤肝转移实验观察LoVo细胞转移能力的改变.结果体外实验结果显示CXCR7-shRNA干扰组LoVo细胞穿膜数[（51.70 ±6.89）个]较空白对照组[（94.30±7.40）个]减少（P＜0.05）;动物实验结果显示3组裸鼠的中位生存时间分别为：CXCR7-shRNA干扰组52 d、空白对照组30 d、阴性对照组32 d.CXCR7-shRNA干扰组较空白对照组生存率明显提高（P＜0.05）,肝脏表面的转移瘤结节数较空白对照组明显减少（P＞0.05）.空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 shRNA干扰技术沉默CXCR7的表达能抑制人结肠癌细胞LoVo的侵袭和转移能力.; 钱益施文孙晋洁孙永强; 关键词：结肠癌短发夹RNA 基因沉默趋化因子受体7

一种麻坑底贴壁细胞培养容器: 本实用新型公开了一种麻坑底贴壁细胞培养容器，所述贴壁细胞培养容器底部的细胞附着面表面设有麻点状凹坑，所述麻点状凹坑在细胞附着面表面均匀分布，麻点状凹坑的密度为10～100个/cm<Sup>2</Sup>。本实用新型所提供...; 施文孙晋杰孙永强王斐姜湉何向锋; 文献传递

表达ESAT-6-gpi和IL-21的B16F10瘤苗免疫鼠伴发自身免疫损伤初探: 2012年; 初步探讨B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗诱导抗肿瘤免疫的同时伴发自身免疫相关毒性作用。采用Western blot方法检测B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫小鼠自身抗体产生情况;采用免疫荧光技术检测瘤苗免疫小鼠血清对正常小鼠眼、睾丸、皮肤、肝及肾组织冰冻切片的反应;瘤苗免疫小鼠的生殖功能检测。结果显示B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗免疫会引起部分C57BL/6小鼠发生鼠毛色素脱失现象,其免疫血清可同皮肤、睾丸等组织正常成分发生抗原抗体反应,瘤苗免疫过的雌雄小鼠合笼后能够正常繁育子代小鼠。实验说明B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗诱发小鼠产生抗肿瘤免疫反应的同时,部分受试鼠可伴发自身免疫损伤,但对机体并未产生危及生命的严重病理反应。本实验为全面评估B16F10-ESAT-6-gpi/IL-21瘤苗应用价值奠定了基础。; 何向锋谭清和王建红孙永强陆俊国徐小红杨磊施文; 关键词：B16F10 自身免疫

一种新型无菌吸管支架: 本实用新型公开了一种新型无菌吸管支架，包括底部两根纵杆、固定在所述纵杆上的两根前立杆、两根后立杆及固定在所述前后立杆上的两根横杆，所述纵杆、前立杆、后立杆和横杆采用不锈钢材料制成并组成立方体框架结构，所述横杆呈波浪形且由...; 何向锋强福林沈康蔡晶张一心王建红王健杨莉萍施文陈海珍赵文静邵晶晶钱红燕李静; 文献传递

趋化因子受体CXCR4在结肠癌中的表达及其临床意义: 2015年; 目的探讨趋化因子受体4(chemokine receptor4,CXCR4)在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选择2012年南通大学第二附属医院普外科施行的结肠癌手术组织标本及对应癌旁组织,应用免疫组织化学方法检测不同临床分期结肠癌组织(50例)及癌旁组织(10例)CXCR4表达。结果结肠癌CXCR4阳性表达率明显高于癌旁组织[72.0%(36/50)vs.10%(1/10),P<0.05];其表达水平在肿瘤侵犯浆膜层、淋巴结转移,TNM高分期明显增高(P<0.05);但与结肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学类型无关。结论 CXCR4蛋白在结肠癌高表达,并与肿瘤恶性程度和病人预后相关。; 钱益施文孙晋洁孙永强; 关键词：结肠癌趋化因子受体4 免疫组化

CFSE荧光负染法检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞摄取超顺磁性氧化铁纳米粒子: 2015年; 目的:探讨CFSE荧光负染法用于检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吞噬超顺磁性氧化铁纳米粒子(super paramaganetic iron oxide nanoparticles,SPIO)的可行性及其荧光特征。方法:体外对RAW264.7细胞进行SPIO的标记,然后分别采用普鲁士蓝染色方法和CFSE荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取情况;用台盼蓝染色法检测CFSE荧光负染细胞的活力;应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取。结果:普鲁士蓝将RAW264.7细胞内吞噬的SPIO标记为醒目的蓝色,核固红将细胞核标记为红色,在荧光图像上表现为荧光负染区,呈筛孔状。CFSE荧光负染法与普鲁士蓝染色法的检测结果具有很好的对应性。RAW264.7细胞经过SPIO和CFSE双重标记后,对细胞活力的影响较小,死细胞比例较低。结论:CFSE荧光负染法可用于RAW264.7活细胞吞噬SPIO的检测,同普鲁士蓝染色法具有很好的对应性,两者的检测结果可相互印证。; 何向锋杨俐萍陈宝安王建红文颂施文徐薇薇凌国杰; 关键词：单核巨噬细胞白血病细胞

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