施军霞
- 作品数：12 被引量：95H指数：4
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子。方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统。检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性。应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子。结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P>0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P<0.05)或极显著地(P<0.01)高于CASI以及CAG的表达活性。结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU。
- 李振海吴红平徐增辉吕赛群施军霞刘品一李林芳金华君吴孟超钱其军
- 关键词：腺病毒启动子
- 表达SIRPα-Fc的基因-溶瘤腺病毒对胆管癌治疗作用的实验研究
- 2015年
- 目的:研究表达SIRPα-Fc融合基因的基因-溶瘤腺病毒SG655-SF对胆管癌的治疗作用。方法:将信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)突变体CV1与人Ig G1 Fc段融合(简称SF),构建SF编码序列(基因)。将SF基因插入条件增殖型腺病毒载体SG655,构建基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。重组病毒经鉴定正确后,经扩增、滴度测定,感染293细胞。Western blot检测外源基因的表达情况。间接免疫荧光检测293细胞表达的SF蛋白对胆管癌细胞的结合能力。噻唑蓝(MTT)法测定病毒对胆管癌细胞的杀伤作用。建立人类胆管细胞癌裸鼠移植瘤模型,用SG655-SF治疗,观察疗效。取肿瘤组织进行切片检查,验证其抗肿瘤作用。结果:成功构建SF表达框、基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。SG655-SF感染293细胞后,能高效表达SF蛋白。293细胞表达的SF蛋白能有效结合CD47高量表达的胆管癌细胞株EH-CA1-T、EHCA1-Y。SG655-SF能有效杀伤胆管癌细胞。SG655-SF可以有效抑制肿瘤在裸鼠体内生长。肿瘤组织切片检查提示有肿瘤坏死和病毒浸润。结论:基因-溶瘤腺病毒SG655-SF具有良好的抗胆管癌活性。
- 巩睿智吕赛群马宜冬左明辉叶真龙朱海莉吴红平施军霞李林芳金华君钱其军
- 关键词：胆管癌溶瘤腺病毒CD47
- 细胞融合肝癌疫苗体内抗肿瘤特异性及T细胞作用的初探被引量：2
- 1998年
- 目的：观察大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与自体激活Ｂ细胞的融合细胞作为疫苗抗肿瘤作用的特异性，并观察该肝癌疫苗体内抗肿瘤作用与Ｔ细胞亚群的关系。方法：（１）应用聚乙二醇（ＰＥＧ）融合大鼠ＢＥＲＨ－２肝癌细胞与激活Ｂ细胞制备细胞融合大鼠肝癌疫苗；（２）事先经该肝癌疫苗免疫的大鼠分别接种肝癌ＢＥＲＨ－２细胞和大鼠膀胱癌ＮＢＴ－Ⅱ细胞，观察该肝癌疫苗抗肿瘤作用的特异性；（３）该肝癌疫苗免疫大鼠之前或之后，以小鼠抗大鼠ＣＤ４单抗或抗ＣＤ８单抗多次注射，以清除大鼠ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞，随后观察大鼠的成瘤性。结果：ＢＥＲＨ－２细胞不能在经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫的大鼠体内致瘤，而ＮＢＴ－Ⅱ细胞可致瘤；事先清除ＣＤ４＋或ＣＤ８＋Ｔ细胞的大鼠经细胞融合大鼠肝癌疫苗免疫后仍能被肝癌ＢＥＲＨ－２细胞致瘤；而经该肝癌疫苗免疫的大鼠，清除了ＣＤ４＋细胞后不能被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤，清除了ＣＤ８＋细胞后则可被ＢＥＲＨ－２细胞致瘤。结论：细胞融合大鼠肝癌疫苗有特异性抗肿瘤作用。
- 卫立辛钱卫珠闫振林沈锋谢天培王皓刘彦君施军霞吴孟超郭亚军
- 关键词：肿瘤疫苗T细胞免疫疗法
- 肿瘤特异增殖腺病毒CNHK200-hEndo的构建及其抗裸鼠肺癌移植瘤疗效被引量：1
- 2008年
- 目的:构建一种携带抗肿瘤血管生成基因Endostatin的新型肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,观察其对人肺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗效果。方法:克隆人抗血管生成基因Endostatin,利用病毒重组技术将该基因插入肿瘤特异性增殖腺病毒CNHK200的基因组中,扩增并纯化CNHK200-hEndo病毒。建立裸鼠肺癌细胞移植瘤模型,观察CNHK200-hEndo抗肿瘤的效果,并与非增殖病毒Ad-hEndo对照。结果:成功构建一种新型的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo,其E1b55kDa蛋白表达缺失。CNHK200-hEndo能在肿瘤细胞内大量增殖并高效表达Endostatin蛋白,表达量明显高于非增殖病毒Ad-hEndo(P<0.05)。动物实验证实,CNHK200-hEndo对人类肺癌细胞的裸鼠移植瘤模型具有抑制肿瘤生长的疗效,与Ad-hEndo和空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:构建的基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndo能在肺癌细胞中增殖复制,提高Endostatin蛋白的表达,明显抑制肺癌细胞移植瘤的生长。
- 施军霞苏长青李林芳钱其军
- 关键词：腺病毒肺癌内皮抑素基因
- 腺病毒CNHK200-hEndostatin质量控制方法的研究被引量：3
- 2007年
- 目的:建立基因-病毒治疗系统CNHK200-hEndostatin的质量控制方法。方法:分别建立腺病毒蛋白鉴定、腺病毒基因组鉴定、人内皮抑素(hEndostatin)基因鉴定、人内皮抑素表达量检测、腺病毒颗粒数测定、腺病毒滴度和比滴度测定、纯度测定、野生型腺病毒(AdWT)检测、残余宿主DNA含量检测和牛血清蛋白残余量检测等腺病毒质量控制项目的方法,并对纯化的腺病毒样品进行初步检测。结果:建立用SDS-PAGE方法对腺病毒进行蛋白鉴定,用限制性内切酶图谱分析的方法对腺病毒进行基因组鉴定,用PCR方法鉴定人内皮抑素基因,用ELISA方法检测人内皮抑素表达量,用D260法和HPLC方法进行腺病毒颗粒数测定,用D260/D280方法和HPLC方法进行纯度检测,用PCR方法进行野生型腺病毒检测,用杂交方法进行残余宿主DNA含量检测,用反向间接血凝实验测定牛血清蛋白残余量。结果表明建立的方法可有效应用于腺病毒样品检测,并且我们制备的纯化腺病毒样品均符合要求。结论:基本建立了腺病毒CNHK200-hEndostatin的质量控制方法,改良的应用HPLC对腺病毒颗粒数进行定量检测的方法准确迅速,优于传统方法。应用建立的方法对纯化的腺病毒样品进行检测,基本符合临床应用要求。
- 薛惠斌施军霞朱文川陈敏钱其军
- 关键词：腺病毒科内皮抑素类基因疗法
- 检测人端粒酶活性的端粒酶TRAP-ELISA法的建立被引量：61
- 1998年
- 目的为改进端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）存在定量困难、应用同位素及每次检测标本数受限等缺点，研究建立及评价端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法。方法端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法是将ＴＲＡＰ与ＰＣＲＥＬＩＳＡ系统结合。与常规ＴＲＡＰ法相比较，应用端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ法检测端粒酶阳性的２９３细胞和阴性对照标本（加热或ＲＮａｓｅ处理和正常人内皮细胞）。结果２９３细胞端粒酶阳性，对１０，１０２，１０３及１０４个细胞检测均为阳性，所测到的吸光度值（Ａ，曾称光密度ＯＤ）依赖于被检２９３细胞数。ＲＮａｓｅ或加热处理标本和正常人内皮细胞均阴性。该方法可在当日观察结果，不需放射性同位素。结论端粒酶ＴＲＡＰＥＬＩＳＡ是一种非放射性同位素、快速及可定量的人端粒酶活性检测方法。
- 卫立辛郭亚军闫振林施军霞沈锋谢天培崔贞福吴孟超
- 关键词：端粒酶聚合酶链反应ELISATRAP肿瘤
- 神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡被引量：4
- 2002年
- 目的 :观察 C2 -神经酰胺诱导肝癌细胞凋亡 ,为进一步研究肝癌细胞凋亡信号的传导提供实验依据。 方法 :将 C2 -神经酰胺作用于肝癌细胞 SMMC- 772 1及 BEL- 740 2后 ,分别行 H- E染色、荧光染色、TU NEL 方法检测及流式细胞仪 Sub- G1法 ,检查细胞的凋亡。结果 :10 μm ol/ L C2 -神经酰胺作用肝癌 SMMC- 772 1细胞 ,48h后发生凋亡 ,H- E染色及荧光染色检测可见典型的细胞凋亡表现 ,细胞核固缩、碎裂 ,以及碎裂的细胞核浓染成为凋亡小体。经流式细胞仪检测可见典型的 Sub- G1凋亡峰 ,凋亡细胞占细胞总数 (9.2 0± 0 .73) %。在 BEL- 740 2细胞也观察到相似的结果。 结论 :C2 -神经酰胺可诱导肝癌SMMC- 772 1及 BEL- 740 2细胞的凋亡。
- 阎振林卫立辛施军霞陈汉吴孟超
- 关键词：神经酰胺类肝肿瘤细胞凋亡流式细胞术
- 腺病毒载体的细菌内同源重组系统的建立和初步应用被引量：9
- 2001年
- 杨庆杨广顺卫立辛覃林花黄永生贾凤歧施军霞吴孟超郭亚军
- 关键词：绿色荧光蛋白腺病毒DNA
- 高效毛细管电泳法测定甘草酸注射液中甘草酸含量被引量：5
- 2001年
- 目的 :建立一种测定甘草酸注射液中甘草酸含量的高效毛细管电泳法。方法 :10 mmol.L- 1 磷酸缓冲液 (p H 7.0 )中含12 .5 mm ol.L- 1十二烷基硫酸钠 (SDS)为电泳电解质 ,电压 30 k V,检测波长 2 5 4 nm,毛细管有效长度 5 0 cm,管径 5 0 μm。氨茶碱为内标。结果 :甘草酸与氨茶碱的迁移时间分别为 4 .8和 2 .8m in。甘草酸浓度为 6 2 .5～ 10 0 0 mg.L- 1时 ,其浓度与峰面积呈良好线性关系 ,相关系数 (r)为 0 .9997。日内、日间变异系数均小于 5 .0 %。结论 :该方法简单、快速、灵敏 ,重现性良好 。
- 施军霞罗明卫立辛贺平李琳芳郭亚军
- 关键词：高效毛细管电泳法甘草酸药物含量测定
- 应用银染端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞系端粒酶活性的研究被引量：7
- 1998年
- 观察人肝癌细胞的端粒酶活性。应用非放射同位素银染的端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ），检测６株人肝癌细胞株（ＢＥＬ－７４０２，ＨｅｐＧ２，ＱＧＹ－７７０１，ＱＧＹ－７７０３，ＳＭＭＣ－７７２１，ＰＬＣ／ＰＲＦ／５）的端粒酶活性，同时检测ＲＮａｓｅ处理的阴性标本。６株人肝癌细胞的端粒酶均为阳性。
- 卫立辛吴孟超沈锋谢天培施乐华施军霞崔贞福钱其军郭亚军
- 关键词：肝肿瘤端粒酶
