张涛
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
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- 发文基金：转基因生物新品种培育专项国家自然科学基金国家基础科学人才培养基金更多>>
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- 构建LEF1基因毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞
- 2011年
- 旨在构建内蒙古白绒山羊(Capra hircus)淋巴样增强因子-1(Lymphoid enhancer factor,LEF1)基因真核表达载体并转染胎儿成纤维细胞,获得稳定表达红色荧光蛋白及毛囊特异性表达LEF1的转基因细胞克隆。以pCDsRed2载体为基本骨架将LEF1基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,连接红色荧光蛋白表达元件,构建LEF1基因毛囊特异表达载体pCDsRed-KL。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。测序显示构建的表达载体pCDsRed-KL序列中,LEF1基因正确连接在KAP6-1启动子下游,顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因,载体构建正确。脂质体介导的稳定转染效率约为14.0%,经G418筛选得到高效表达红色荧光蛋白转基因细胞克隆。PCR检测显示外源KAP6-1启动子和LEF1基因整合到胎儿成纤维细胞基因组中。
- 李彬鲍文蕾张涛侯鑫郭旭东王潇王志钢刘东军
- 关键词：稳定转染
- 内蒙古白绒山羊LEF1基因皮肤特异性表达载体的构建及转基因细胞系的筛选
- 本研究以皮肤特异性小鼠超高硫启动子(UHS启动子)为前导区,构建了LEFI的皮肤特异性表达载体pCDsRed-UL,筛选稳定转染的细胞系作为核供体,为即将通过核移植和克隆技术获得高产绒量的转基因绒山羊打下基础.
- 李彬鲍文蕾张涛郭旭东王潇侯鑫王志钢刘东军
- 内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析被引量：3
- 2011年
- 【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM_001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的S_TKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。
- 杨娇馥史偈君梁燕郑旭张涛秦毅王志钢刘东军
- 关键词：AKT基因克隆
- 内蒙古白绒山羊TSC2基因克隆与表达模式分析
- 2012年
- 旨在克隆内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA并分析其特性及基本表达模式。利用RT-PCR分段克隆TSC2基因cDNA片段并测序,将得到的cDNA各片段核苷酸序列拼接后获得绒山羊TSC2基因编码区全长序列(HQ684023)并进行生物信息学分析。半定量RT-PCR方法检测TSC2基因在不同组织中的表达特异性。结果表明内蒙古白绒山羊TSC2基因cDNA编码区核苷酸序列为5 184 bp,包含了编码1 727个氨基酸残基的全长ORF。核苷酸序列与牛、猪、马、大熊猫、犬、恒河猴、人、小鼠及大鼠的同源性分别为97%、90%、89%、88%、87%、87%、87%、86%和86%。NCBI CDD程序预测该基因编码的蛋白质有一个Tuberin结构域和一个Rap-GAP结构域;Psite程序分析有5个N糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖蛋白激酶磷酸化位点、16个蛋白激酶C磷酸化位点、25个酪蛋白激酶磷酸化位点。PSORT程序预测其定位于胞内体膜。TSC2基因在内蒙古白绒山羊的睾丸、脑、肝脏、肺、乳腺、脾和肾脏等组织中都有表达,mRNA丰度在睾丸中较高,乳腺中较低。
- 史偈君杨娇馥张涛秦毅谢鸿云李树裕郝喜燕王志钢
