张海清
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：徐州医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-383增强SLE患者外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达被引量：2
- 2011年
- 目的初步探讨microRNA-383（miR-383）对IL-2信号介导的系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中Foxp3mRNA转录的影响。方法采用Westernblot方法检测14例SLE患者PBMCs中SOCS3蛋白表达水平，通过相关microRNA软件预测和Westernblot鉴定靶向SOCS3的microRNA，RT—PCR方法检测miR-383转染SLE患者的PBMCs中转录因子Foxp3mRNA的转录水平。结果Westernblot结果发现，SLE患者的PBMCs中SOCS3蛋白表达水平显著增加，miR-383抑制SOCS3蛋白表达。SLE患者PBMCs转染miR-383后Foxp3mRNA的转录水平显著增高。结论miR-383靶向抑制SOCS3，上调IL-2信号介导的SLE患者的PBMCs中Foxp3mRNA的转录水平。
- 史震张庆张海清李小翠郑葵阳周峰
- 关键词：系统性红斑狼疮SOCS3外周血单个核细胞FOXP3MRNA
- β-catenin在IL-24抑制肝癌细胞的血管生成和肿瘤生长中的作用被引量：1
- 2011年
- 目的研究IL-24对肝癌细胞在鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)上的血管生成和肿瘤生长的影响及其机制的初探。方法实验采用病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)为5的重组慢病毒IL-24和慢病毒空载体Mock分别感染肝癌细胞HepG2,24 h后接种于CAM,4 d后观察CAM上形成的肿瘤背面血管数目,并剥离肿瘤组织称其重量,继而进行Western blot检测肿瘤组织中β-catenin的表达。结果 CAM实验显示,与Mock感染的HepG2细胞相比,慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤背面血管分支数目和肿瘤重量明显下降。Western blot结果发现慢病毒IL-24感染的HepG2细胞形成的肿瘤组织中β-catenin显著低于Mock组。结论 IL-24能够抑制肝癌细胞的肿瘤血管生成和肿瘤生长,这种作用可能是通过下调β-catenin的表达来实现的。
- 周峰王杰张海清史震裴冬生郑骏年
- 关键词：IL-24肝癌细胞血管生成肿瘤生长Β-CATENIN
- 特异性siRNA沉默LASP-1对HepG2细胞增殖和迁移的影响被引量：1
- 2012年
- 目的应用RNA干扰技术沉默细胞内LASP-1蛋白的表达,探讨LASP-1蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的作用。方法根据LASP-1 mRNA编码序列设计RNA干扰靶点并构建特异性小干扰RNA(siRNA),通过脂质体转染入HepG2细胞,采用Western blot法检测LASP-1蛋白的表达。采用CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验、Transwell和划痕愈合实验方法,观察HepG2细胞增殖及迁移情况。结果 (1)LASP-1 siRNA对LASP-1蛋白表达水平有显著的下调作用(P<0.05)。(2)体外实验结果显示,与HepG2组及阴性对照组相比,siRNA组HepG2细胞增殖和克隆形成率明显被抑制(P<0.05),其迁移能力也下降(P<0.05)。结论下调LASP-1蛋白表达可显著抑制HepG2细胞的增殖和迁移能力,提示LASP-1在肝癌细胞恶性增殖和转移过程中具有重要作用,为临床上寻找抑制肝癌增殖转移的靶点提供新的思路和方法。
- 孔凡运胡丽娜张海清李向阳尤红娟汤仁仙郑葵阳
- 关键词：RNA干扰HEPG2细胞增殖迁移
- 融合型自杀基因系统Fcy：：Fur／5-FC对人肝癌细胞株HepG2体外杀伤作用的初步研究
- 2011年
- 目的研究融合型自杀基因Fcy：：Fur联合5-氟胞嘧啶（5-Fc）对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用。方法应用脂质体介导法将Fcy：：Fur基因转染人人肝癌细胞株HepG2，经G418筛选2周后行有限稀释法获得稳定表达Fcy：：Fur基因的单克隆细胞。5-Fc处理后，通过MTF法和AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法，检测Fcy：：Fur／5～FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的细胞增殖及凋亡的影响。结果MqT法检测显示稳定表达Fcy：：Fur基因的HepG2单克隆细胞经5-Fc处理后，在1、2、3、4、5天时对细胞的增殖有明显抑制作用。AnnexinV—FITC＋PI双标记染色法检测细胞凋亡率：1天为5．74％，2天为11．04％，3天为17．56％；PBS处理的细胞凋亡率：1天为3．67％，2天为3．68％，3天为4．42％，凋亡率无明显改变。结论Fcy：：Fur／5-FC自杀基因系统对人肝癌细胞株HepG2的增殖有明显的抑制作用，并可促进肿瘤细胞凋亡。
- 张海清周峰孔凡运李向阳史震孙伟郑葵阳汤仁仙
- 关键词：肝癌
- 小鼠抗GBM肾炎模型的复制与鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的 为研究人类新月体性肾炎的发病机制,建立小鼠抗肾小球基底膜（GBM）肾炎的动物模型.方法 60只健康昆明小鼠随机分为肾炎模型组和正常对照组.肾炎模型组小鼠一次性尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清（16 ml/kg）,正常对照组注射等量正常兔血清.肾炎模型组小鼠尾静脉注射兔抗小鼠GBM血清前1周,背部皮内注射正常兔血清进行预免疫.于兔抗小鼠GBM血清注射后第7、14、21、28天取尿液、血清、肾组织标本,检测尿蛋白、血肌酐、血尿素氮含量,观察肾组织病理变化.结果 肾炎模型组小鼠注射兔抗小鼠GBM血清后,第2天蛋白尿、血肌酐和血尿素氮含量均明显升高,于第14天尿蛋白浓度达到高峰,而血肌酐和血尿素氮含量仍持续上升.肾炎模型组肾组织病理表现为：第7天大量炎症细胞浸润;第21天 GBM增宽增厚,足突融合,大量免疫复合物沉积,内皮细胞及系膜细胞显著增生,新月体形成.结论 成功建立了小鼠抗GBM肾炎模型.
- 李向阳孔凡运张海清汤仁仙郑葵阳
- 关键词：抗GBM肾炎小鼠
- 含IL-24基因重组慢病毒表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨白细胞介素(IL)24基因表达目的蛋白IL-24的方法,检测IL-24对肝癌细胞生长的影响。方法自经5μg/ml植物血凝素(PHA)刺激的正常人单个核细胞(PBMCs)中提取总RNA,RT-PCR扩增出IL-24cDNA,插入到pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen中构建成慢病毒转移载体pHAGE-IL-24,转染HEK293T细胞。荧光显微镜观察293T细胞中绿色荧光蛋白(GFP)表达;梯度稀释法测定病毒滴度,感染HEK293T细胞48h后进行RT-PCR和Westernblot检测IL-24的基因和蛋白表达;MTT法检测细胞的增殖。结果限制性内切酶检测和基因测序证实成功构建了携带IL-24基因的慢病毒表达载体,滴度为5×106TU/ml。以MOI为5.0的重组慢病毒感染靶细胞HepG248h后,能够检测到外源基因IL-24的蛋白表达。IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。结论成功构建了含IL-24基因的慢病毒表达载体,获得的病毒能够有效感染HepG2细胞,并在其中大量表达目的蛋白;IL-24能够抑制肝癌细胞的生长。
- 周峰张海清史震孙伟汤仁仙郑葵阳
- 关键词：慢病毒载体白细胞介素24肝癌
- 携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达被引量：4
- 2011年
- 目的包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响。方法将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383。将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK 293T细胞进行重组慢病毒包装。进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平。结果定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×107 TU/ml。以MOI为5的慢病毒感染HEK 293T细胞后miR-383表达明显增多。RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结论成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础。
- 周峰张庆张海清刘晓梅史震郑葵阳
- 关键词：慢病毒PBMCS
