张晓玲
- 作品数：6 被引量：58H指数：3
- 供职机构：暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调被引量：3
- 2018年
- 目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。
- 张晓玲陈剑姚敏刘小勇周清
- 关键词：小发夹RNA
- 人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究被引量：3
- 2013年
- 目的探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制。方法体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液。根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium,DMEM)组(DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液1∶1混合组(混合组)、HAEC培养液组(HAEC组)。传代的角膜上皮细胞贴壁24h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48h后收集细胞。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HAEC培养液中白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的含量。采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素(IL)-1β信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达,采用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8)法检测3组细胞的增殖情况。结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征。HAEC培养液中IL-1Ra的含量为(153.56±0.36)ng/L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra。3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-1β mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1β mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组(均为P<0.05)。结论 HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1β的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖。
- 李彬斌周清周清姚敏姚敏张晓玲
- 关键词：羊膜上皮细胞角膜上皮细胞白介素-1白介素-1受体拮抗剂炎症
- 人羊膜上皮细胞的体外培养及标志分子的检测分析被引量：4
- 2014年
- 目的进行人羊膜上皮细胞(HAEC)的体外培养,观察其生物学特性,检测其分子特征。方法取剖宫产术后人羊膜,应用酶消化法获得HAEC,倒置显微镜下观察细胞生长变化;CCK-8法检测HAEC的生长曲线;Giemsa染色观察HAEC的克隆形成率;流式细胞术检测HAEC的细胞周期;取第2代HAEC,流式细胞术检测其CD29、CD31、CD44、CD59、CD105、CD117、CD133、HLA-DR的表达。免疫荧光法检测其CD9、上皮性钙黏素(E-cadherin)、足糖萼素样蛋白(PODXL)、阶段特异性胚胎表面抗原4(SSEA-4)、性别决定区Y相关因子2蛋白(SOX2)、SSEA-1、Nanog蛋白、八聚体结合蛋白3/4(Oct-3/4)的表达情况。结果酶消化法可以获得较纯的HAEC,细胞呈贴壁生长,呈多角形,核呈圆形。细胞在贴壁后第3天进入指数生长期。细胞周期分析显示66%处于G0/G1期,S期细胞占31.69%,G2/M期细胞占2.31%。HAEC的克隆形成率为(9.33±2.00)%。流式细胞仪检测显示HAEC阳性表达CD44、CD29、CD105、CD59,不表达CD31、CD117、CD133、HLA-DR。免疫荧光法检测显示HAEC表达胚胎干细胞相关分子CD9、E-cadherin、PODXL、SSEA-4、SOX2、SSEA-1、Nanog、Oct-3/4。结论HAEC可以在体外培养生长并在一定时期内保持其增殖活性;HAEC表达胚胎干细胞相关的表面标志分子。
- 刘小勇周清张晓玲秦晓艳王雯婕王黎孟晶陈剑
- 关键词：羊膜上皮细胞细胞培养胚胎干细胞
- 自体角膜缘干细胞移植和羊膜移植治疗翼状胬肉的疗效及安全性被引量：41
- 2014年
- 目的系统评估翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植和胬肉切除联合羊膜移植两种手术方式治疗原发性或复发性翼状胬肉的有效性和安全性。方法数据库检索辅以手工检索国内外相关文献,采用Jadad量表对纳入研究进行质量评价,RevMan5.0软件进行异质性检验和Meta分析、敏感性分析,并评价是否存在发表偏倚。结果原发性翼状胬肉纳入24篇文献,共2 592只眼。复发性翼状胬肉纳入17篇文献,共1 294只眼。Meta分析结果显示:与羊膜移植相比,角膜缘干细胞移植在原发性翼状胬肉术后复发方面,差异有统计学意义〔RR=0.45,95%CI(0.35,0.58),P<0.01〕。在复发性翼状胬肉术后复发方面,差异有统计学意义〔RR=0.36,95%CI(0.27,0.49),P<0.01〕。在术后并发症方面,原发性翼状胬肉角膜缘干细胞治疗组总体的并发症发生率为10.3%(18/174只眼),羊膜移植组总体的并发症发生率为11.8%(19/161只眼),两组间并发症的发生率差异无统计学意义(Z=0.40,P=0.69)。复发性翼状胬肉角膜缘干细胞移植组总体的并发症发生率为11.8%(8/68只眼),羊膜移植组总体的并发症发生率为10.6%(7/66只眼),两组间并发症的发生率差异无统计学意义(Z=0.20,P=0.84)。结论翼状胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植在原发性或复发性翼状胬肉的术后效果优于胬肉切除联合羊膜移植,可减少复发率。
- 刘小勇张晓玲周清姚敏陈剑
- 关键词：翼状胬肉自体角膜缘干细胞移植羊膜移植META分析
- 体外诱导人羊膜上皮细胞分化为角膜上皮样细胞的初步研究
- 2012年
- 目的探索以人永生化角膜上皮细胞( immortalized human corneal epithelial cells,ihCEC) 培养液体外模拟角膜上皮细胞微环境,诱导人羊膜上皮细胞( human corneal epithe-lial cells,hAEC) 分化为角膜上皮样细胞的可行性。方法取( 37 ± 1) 周剖宫产人羊膜组织,酶消化法提取 hAEC; 流式细胞仪测 CD29、CD90、CD105、CD34、HLA-DR 的表达。复苏培养 ihCEC,以 0 mg·L- 1、10 mg·L- 1、20 mg·L- 1、30 mg·L- 1、40 mg·L- 1丝裂霉素 37℃作用 2 h,吸去丝裂霉素,继续培养 72 h 后 CCK8 测吸光度并计算增殖抑制率。10 mg·L- 1、20 mg·L- 1丝裂霉素处理细胞后 12 h、24 h 收集细胞培养液培养 hAEC,CCK8 测吸光度绘制生长曲线; 收集 ihCEC 细胞培养液,制备条件培养基( CM) 培养 hAEC 10 d,倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光检测 CK12 的表达。结果 hAEC 可表达 CD29、CD90、D105,不表达 CD34、HLA-DR; 各浓度丝裂霉素组增殖抑制率分别为 10 mg·L- 1( 65. 48% ±1. 03) 、20 mg · L- 1( 77. 01% ± 0. 99) 、30 mg · L- 1( 75. 25% ± 0. 71) 、40 mg · L- 1( 76. 90% ±0. 97) ;20 mg·L- 1丝裂霉素培养 12 h 收集的细胞培养液对 hAEC 具有明显促增殖作用; 诱导分化后 hAEC 可表达 CK12。结论以 ihCEC 细胞培养液模拟的角膜上皮细胞微环境可诱导 hAEC 分化为角膜上皮样细胞。
- 姚敏陈剑王文娟张晓玲杨筱曦周清徐锦堂
- 关键词：人羊膜上皮细胞丝裂霉素微环境
- 氧化应激与眼表疾病关系的研究进展被引量：7
- 2014年
- 氧化应激日益受到关注,氧化应激是由体内氧化与抗氧化系统不平衡引起的,其参与各种急性、慢性病理过程甚至年龄相关性疾病。大量证据表明氧化应激存在于许多眼表疾病发病机制中,并对疾病的发生发展起着放大加速作用。本文介绍氧化应激与眼表疾病的关系,以期在临床治疗眼表疾病时重视抗氧化治疗。
- 王雯婕陈剑王园园刘小勇张晓玲曲艺欣秦晓艳
- 关键词：氧化应激眼表疾病活性氧
