张庆霞 作品数:8 被引量:48 H指数:4 供职机构: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 更多>> 发文基金: “十一五”国家科技支撑计划 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
中国2000-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析 被引量:12 2006年 对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化关系显示55株IBV毒株分属于9个群。第Ⅰ-Ⅲ群主要包括美国、日本、荷兰等国家以及中国的部分IBV分离株和疫苗株。其中本研究中的CK/CH/LHN/00I可能为一株分离的疫苗毒,CK/CH/LSD/03I、CK/CH/LDL/01I可能为重组毒。而中国近十年来分离的IBV毒株主要分布在第Ⅵ-Ⅷ群中,此3群内IBV毒株之间N蛋白推导氨基酸同源性为88.3%~100%,与其他各群之间同源性为62.3%~95.1%。因此,此基因型的IBV毒株可能在中国已有较长时期的存在且发生了较大程度的变异。其中第Ⅵ群中两株韩国分离株与中国IBV分离株具有较近的亲缘关系。以上结果表明,中国大多数IBV分离株在N基因进化关系上较为独立,与国外毒株相比,和韩国毒株进化关系密切。此外,中国IBV毒株基因重组现象更加普遍,尤其是疫苗毒和野毒之间的重组。 张庆霞 韩宗玺 邵昱昊 陈建飞 荣骏弓 刘胜旺 孔宪刚关键词:传染性支气管炎病毒 核蛋白基因 鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LDL97Ⅰ/97株S基因特征 被引量:2 2006年 The spike gene(S)of Infectious bronchitis virus(IBV)CK/CH/LDL97Ⅰ/97 isolate was amplified,cloned,sequenced and analyzed.Results showed that the S gene was 3501 bp encoding a polypeptide of 1167 amino acids.The precursor of the S protein was cleaved into S1 and S2 fragments,which comprised 541 and 626 amino acid residues,respectively.The cleavage site sequence was RRTGR.The homologies of nucleotide and amino acid sequences of S1 gene between CK/CH/LDL97 Ⅰ/97 and 27 reference IBV strains ranged from 60.6% to 99.6%,and 50.5% to 99.1%,respectively.The CK/CH/LDL97Ⅰ/97 S1 was most similar to that of three proventriculus IBV isolates,Q1(99.1%),J2(98.9%),T3(98.9%),which were isolated in China.Phylogenetic analysis of S1 proteins indicated that CK/CH/LDL97Ⅰ/97,Q1,J2 and T3 formed a separated cluster,which might belong to a novel genotype of IBV. 刘昕 刘胜旺 孔宪刚 张庆霞 荣骏弓 韩宗玺 邵昱昊关键词:传染性支气管炎病毒 基因特征 鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LDL05Ⅱ的分离鉴定及生物学特性 被引量:3 2008年 采取2005年大连某鸡场发病鸡群萎缩的输卵管进行处理,经鸡胚尿囊腔接种SPF鸡胚,分离到1株病毒。通过致SPF鸡胚病变特征、病毒对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征、对SPF鸡致病性及死亡率等方面的研究,发现病毒经鸡胚传毒至第3代可致鸡胚生长发育障碍(侏儒胚)、胚体严重卷曲且大腿及尾部有点状出血;病毒囊液不凝集鸡的外周血红细胞;在电镜下呈球形,病毒囊膜表面有疏松排列的棒状纤突,具有冠状病毒粒子的形态特征;以105.5×EID50/0.1mL的病毒接种15日龄的SPF雏鸡,鸡群发病率为22/22(100%),死亡率为12/22(54.5%)。根据以上结果确定该病毒为冠状病毒,命名为CK/CH/LDL05Ⅱ。在此基础上,用RT-PCR对CK/CH/LDL05Ⅱ的核蛋白基因进行了克隆、测序和分析。与GenBank中26株IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较分析,发现该毒株与我国2004年分离IBV毒株CK/CH/LDL/04Ⅱ的N基因推导氨基酸同源性最高(97.5%),表明两者具有较近的亲缘关系。这一结果不但从分子水平证实毒株CK/CH/LDL05Ⅱ是鸡传染性支气管炎病毒,而且表明该血清型的毒株最近连续2年存在于大连市的不同鸡场。 马亚珍 李晓华 韩宗玺 邵昱昊 聂磊 龚利洋 张庆霞 孙怀刚 冉多良 刘胜旺 孔宪刚关键词:鸡传染性支气管炎病毒 核蛋白基因 鸡传染性支气管炎病毒CK/CH/LHLJ/04V的分离鉴定及致弱的初步研究 被引量:4 2007年 从黑龙江省某鸡场发病鸡群的肾脏中分离到一株病毒,通过病毒致SPF鸡胚病变特征、对鸡外周血红细胞凝集特性、病毒粒子形态学特征以及RT-PCR鉴定等方面的研究,表明该病毒为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为CK/CH/LHLJ/04V。通过对该病毒基因型分析以及对SPF鸡致病性试验发现该病毒为我国近年来流行的一类重要IBV的代表。将该毒株在SPF鸡胚连续传代110代(P110),取不同代次毒进行动物实验。结果显示,该毒株对SPF雏鸡的致病力随鸡胚传代次数的增加而逐渐降低。P110代毒以105.0 EID50/0.1 mL的剂量通过点眼滴鼻接种15日龄SPF雏鸡,鸡群发病率和死亡率均为0。不同代次毒接种SPF鸡对同源毒株P3代强毒的攻击均具有100%保护性。实验表明,IBV毒株CK/CH/LHLJ/04V P110对SPF雏鸡已无致病性,但仍具有良好的免疫原性,可作为研制IB弱毒疫苗的候选毒株。 龚利洋 张庆霞 韩宗玺 马亚珍 聂磊 邵昱昊 刘胜旺 孔宪刚关键词:鸡传染性支气管炎病毒 弱毒疫苗 中国1995-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株膜蛋白基因的遗传变异分析 被引量:15 2007年 应用RT-PCR方法扩增到了我国1995-2004年20株IBV现地分离株的膜蛋白(Membrane,M)基因片段。序列测定表明,20株IBV分离株M基因开放阅读框由672-681bp组成,编码由223-226个氨基酸残基组成的多肽。与我国分离株LX4相比,M基因推导氨基酸序列的变异主要发生在2-17位、221-223位,其中4-6位存在氨基酸的插入和缺失,导致IBV毒株间M蛋白糖基化位点的差异。与GenBank中34株IBV参考毒株M蛋白基因推导氨基酸序列进行比较和分析,系统进化关系显示54株IBV毒株分属于5个进化群。我国IBV分离株M基因在进化关系上较为独立,主要分布在第Ⅱ群和第Ⅳ群,其中第Ⅱ群分离株和中国台湾毒株进化关系密切。此外,参考IBV国内分离株S1基因及N基因系统发育进化树的研究结果,并与M基因进行比较,表明我国IBV也存在着基因重组现象,尤其是疫苗毒和流行毒之间的重组。 聂磊 张庆霞 韩宗玺 邵昱昊 荣骏弓 刘胜旺 孔宪刚关键词:传染性支气管炎病毒 膜蛋白基因 基因重组 中国2005年~2006年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析 被引量:7 2008年 本研究应用RT-PCR方法扩增到我国2005年~2006年8个省市12株IBV病毒核蛋白基因,并将其进行了克隆、序列测定及分析。以疫苗株H120作为参考毒株,对12株IBV分离株核蛋白基因序列进行分析。结果发现我国分离株的N基因及其局部功能区序列存在广泛的氨基酸替代现象。同时还发现毒株CK/CH/LSD/05Ⅰ与疫苗株H120同源性最高(93.4%)。与GenBank中的11个IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,发现本研究分离的大部分毒株(9株)分布于第Ⅰ群中,可见我国主要的IBV分离株在N基因进化关系上形成了自己独立的进化群。通过与S1基因系统发育进化树比较发现,毒株CK/CH/LSD/05Ⅰ存在基因重组现象。以上结果表明我国2005年~2006年IBV毒株存在基因突变和基因重组现象。 马亚珍 韩宗玺 邵昱昊 张庆霞 刘胜旺 孔宪刚关键词:传染性支气管炎病毒 核蛋白基因 基因重组 中国1995~1999年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析 被引量:13 2006年 应用RT-PCR方法扩增到了我国1995~1999年10株IBV现地分离株的核蛋白基因片段,并将其进行了克隆、序列测定及分析。结果发现,10株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,编码由409个氨基酸残基组成的多肽,末发现碱基的插入和缺失。与GenBank中的20个IBV参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,发现本研究分离的毒株主要分布于3个群中,该3群病毒主要包括我国IBV现地分离株。对n基因及其局部功能区序列比较发现,我国分离株与H120疫曲株N蛋白存在广泛的氨基酸变异。通过与s1基因系统发育进化树比较发现,我国IBV分离株存在基因重组现象。以上结果表明我国1995~1999年IBV毒株存在基因突,变和基因重组现象。 张庆霞 陈建飞 韩宗玺 周玉长 邵昱昊 荣骏弓 刘胜旺 孔宪刚关键词:传染性支气管炎病毒 核蛋白基因 基因重组