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NT3的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定: 2005年; 构建和转化神经营养素3(neurotrophin 3,NT3)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究NT3的功能及作用机制奠定基础。用PCR扩增NT3基因cDNA中编码完整开放读框的基因片段;将该基因片段与pLexA载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op LacZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA NT3重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的二种EGY48[p8op LacZ]酵母都能在SD Gal Raf His Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD His Leu Ura培养基中生长,在SD His Ura液中培养16h后,OD600均值均为0.8±0.1。这表明,重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用。因此,构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星孔雪徐坚于娜张峪涵仙玲玲杨磊黄瑾; 关键词：NT3 酵母双杂交

构建人类neuritin真核表达系统被引量：3: 2005年; 目的:构建人类neuritin基因真核表达载体,并观察其转染的PC12细胞中neuritin的表达。方法:用基因重组技术,将人类NeuritincDNA的开放阅读框克隆到真核表达载体pcDNA4.0中,经酶切鉴定及测序分析、并以脂质体介导转染PC12细胞,了解其在细胞内的表达。结果:酶切鉴定及测序分析,表明重组pcDNA4.0-neuritin表达质粒克隆成功,neuritin基因在PC12细胞中获得表达。结论:以脂质体介导pcDNA4.0-neuritin质粒转染真核细胞,为基因治疗神经系统退行性病变奠定实验基础。; 张峪涵罗星黄瑾于娜黄延红唐娟仙玲玲杨磊; 关键词：NEURITIN PC12细胞转染

人Neuritin原核、真核表达系统的构建以及表达产物的纯化、鉴定和功能研究: 神经营养因子是一类促进神经细胞存活、生长、分化的多肽分子,在神经系统发育、分化和损伤修复过程中起着非常重要的作用.neuritin是一种新近发现的与神经可塑性相关的神经营养因子.研究表明neuritin在神经再生的领域中...; 罗星李新丽张树军唐娟于娜张峪涵黄瑾; 关键词：神经营养因子神经再生神经修复; 文献传递

人类神经突起因子真核表达系统的构建及功能的初步研究: 本课题组在国内率先克隆了人类neuritin基因[11]，并采用生物信息学手段较全面的分析了Neuritin的结构和可能的功能。在已有工作的基础上，本研究着手构建人类neuritin基因真核表达系统，并进行其功能的初步研...; 张峪涵; 关键词：真核表达载体 PC12细胞; 文献传递

BDNF的酵母双杂交诱饵载体的构建和初步鉴定: 2005年; 目的：构建和转化脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究BDNF的功能及作用机制奠定基础。方法：用PCR扩增BDNF基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段；将该基因片段与plexA载体定向重组；用酶切和测序鉴定重组质粒；将核苷酸序列正确的重组质粒转化人EGY48(p8op-LacZ)酵母菌株。结果：成功构建pLexA-BDNF重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的两种EGY48(p8Op—LacZ)酵母都能在SD／Gal／Raf／-His／-Ura培养基中长成白色菌落(同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落),但都不能在SD／-His／-Leu／-Ura培养基中生长,在SD／-His／-Ura液中培养16h后,OD_(600)均值均为0.9±0.1。这表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,电没有酵母毒性作用。结论：构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星何玲张峪涵孔雪于娜徐坚杨磊黄瑾; 关键词：BDNF

神经突起因子酵母双杂交诱饵质粒构建和转化被引量：10: 2006年; 目的构建和转化神经突起因子(Neuritin)的酵母诱饵重组质粒,为通过酵母双杂交研究Neuritin的功能及作用机制奠定基础。方法用PCR扩增neuritin全长cDNA中编码开放读框的基因片段;将该基因片段与pLex-A载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;将核苷酸序列正确的重组质粒转化入EGY48[p8op-LacZ]酵母菌株。结果成功构建pLexA-neuritin重组质粒。转化有重组质粒和pLexA空载体的2种EGY48[p8op-LacZ]酵母都能在SD/Gal/Raf/-His/-Ura培养基中长成白色菌落,同时,转化pLexA-pos阳性对照质粒的酵母菌在相同条件下长成蓝色菌落,但都不能在SD/-His/-Leu/-Ura培养基中生长,在SD/-His/-Ura液中培养16 h后,A600均值均为0.9。表明重组质粒表达的融合蛋白没有激活LEU2和lacZ酵母报告基因表达的活性,也没有酵母毒性作用。结论构建的诱饵重组质粒可以用于下一阶段的人胎脑cDNA文库筛选。; 罗星张峪涵于娜孔雪徐坚顾少华杨磊黄瑾; 关键词：酵母双杂交

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张峪涵