张小琼
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：华中农业大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 利用DNA shuffling技术构建含5个cry基因的突变体库以筛选高毒力杀虫蛋白被引量：1
- 2011年
- 以改造合成的5个Bt基因(cry1C*、cry2A*、cry1Ab、cry1Ac和cry9C*)为材料,利用DNAshuff-ling的体外分子进化技术构建1个含有1 000个重组基因克隆的大肠杆菌表达库;通过诱导表达重组蛋白,ELISA方法测定蛋白表达量,以棉铃虫(Helicoverpa armigera)为试验昆虫进行毒性试验。结果显示:重组克隆的蛋白毒性与阳性对照Cry1Ac相比,增强的有122个,持平的有38个,有毒性但毒性降低的有232个,失去毒性的有608个;对这1 000个重组克隆进行了测序,比较了重组基因与原始基因的序列同源性,除去55个克隆未能找到其原始基因来源,将其余的945个重组克隆从5个Cry蛋白的核苷酸编码序列的同源性出发,划分为源于cry1Ab,cry1Ac,cry1C*,cry2A*和cry9C*的5个重组克隆类型。根据毒力变化分为毒力上升、持平、下降3组。对1 000个重组基因的氨基酸序列进行分析后发现,相对于毒力上升和持平组,5个毒力下降组的重组克隆间的氨基酸序列同源性最低。
- 张小琼林拥军
- 关键词：DNASHUFFLING突变体库
- DNA shuffling技术改造Bt基因的水稻转化研究被引量：2
- 2008年
- 本试验挑选了以cry1Ab、cry1Ac、cry9C、cry1C和cry2A等5个基因经DNA family-shuffling改造后的不同组的14个杀虫活性有显著提高的重组Bt基因,通过农杆菌介导法转入水稻品种中花11中。各基因均获得80棵以上独立转化植株,通过对转化植株的PCR阳性检测,获得了约75%的阳性单株。Southern结果显示转化植株的拷贝数分别是1～12不等,单拷贝率为12%;Northern分析其表达量,结果显示除了很少发生基因沉默外其余单株均表达了Bt基因,但是植株间表达量差异较大;随机挑选阳性植株喂食一龄的二化螟进行生测实验,与原始基因相比,14个重组Bt基因均表现出了较高的毒性。
- 王娟张小琼林拥军
- 关键词：BT基因水稻转基因植株分子检测
