张克斌
- 作品数：58 被引量：180H指数：8
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市科技攻关计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 大型医院综合科研实验室人员生物安全教学的实践与体会被引量：3
- 2014年
- 目前，国内大型医院特别是各医科大学教学医院，纷纷建立自己的中心实验室，为医学科研和研究生培养提供场所，保证大型仪器和专职科研人员等资源的集约式使用，易于形成良好的学术交流氛围，有益于科研产出。但大型实验室由于人员流动性大，所涉及试剂、动物和各种生物标本种类繁多，容易造成各类安全特别是生物安全事件。实验室生物安全是指为避免微生物和医学实验室各种活动中生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施、人员培训及管理措施，以达到对人、环境和社会的安全防护目的的一种综合行为。但目前，在国内进行系统生物安全教学的实验室非常有限，近期，本实验室将实验室生物安全教育作为研究生入室后的培训课程，对研究生们的生物安全和自身防护意识的培养起到了很好效果，现将本实验室的教学实践和体会总结如下。
- 张克斌盛哈蕾何晓梅
- 关键词：实验室生物安全研究生培养自身防护意识
- 人再生肝脏蛋白磷酸酶-3基因的克隆与测序
- 2006年
- 目的:从人结肠癌肝转移病灶标本中提取染色体RNA,PCR扩增及克隆人PRL-3基因。方法:收集人结肠癌肝转移标本,提取总RNA,逆转录为cDNA,PCR扩增PRL-3序列,A-T克隆于pMD-18T载体中,转化大肠杆菌JM109株,提取质粒,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果:通过酶切、PCR与测序三种方法证实所获得的基因片断为PRL-3基因。结论:克隆到序列正确的人源性PRL-3基因,为实现PRL-3基因的高效表达及制备相应抗体奠定了基础。
- 徐旭新燕李志伟张克斌张朝军于水情
- 关键词：PRL-3基因克隆
- 末端酶介导的双链DNA病毒核酸组装
- 2006年
- 病毒是一类非细胞结构的微生物,专性宿主细胞内寄生,以复制方式进行增殖。在病毒复制的过程中,组装是其特有的过程。不同类型病毒之组装的机制有很大差异,目前对双链DNA(dsDNA)病毒的组装机制研究较多,包括位点特异性组装和满头组装两种方式,采用何种方式进行组装与其基因组编码的末端酶有关。该文介绍末端酶介导的dsDNA病毒组装的有关进展。
- 陈志瑾申晓冬张克斌饶贤才
- 关键词：双链DNA病毒
- 利用废水液体发酵生产单细胞蛋白的实验研究被引量：11
- 2001年
- 利用工厂废水或动物血制作培养基 ,以液体发酵方式培养产朊假丝酵母NCTC 35 76菌及甘饲 85 0 1菌。离心分离菌体 ,测定菌体生物生长量 ,并观察蔗糖、温度、酸碱度、发酵时间、种子液接种量对生物生长量的影响。生化方法分析NCTC 35 76菌单细胞蛋白的品质 ,氨基酸分析仪分析单细胞蛋白的氨基酸组成。结果表明 ,玉米淀粉厂废水 ,不必调pH ,不用添加其它任何组分 ,即可直接用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC 35 76菌 ;pH 4.0～ 7.0均对生长量无明显影响 ;2 4h培养已达到最好生长量 ,再延长时间已不能提高产量 ;2 8℃及 37℃培养无明显差别 ,在3 %～ 17%种子液接种量范围内 ,接种量与生长量有正相关关系。研究表明 ,玉米淀粉厂废水单一成分即可用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC 35 76菌 ,原料成本低 ,且易于产品分离纯化和工业化生产中的连续培养 ,是单细胞蛋白生产的良好途径。
- 刘启富陈志谨金晓琳张克斌饶贤才胡晓梅胡福泉
- 关键词：废水利用发酵产朊假丝酵母单细胞蛋白
- 人源肽抗生素hPABβ突变体及其重组杆状病毒的构建被引量：2
- 2002年
- 确定人工合成的人肽抗生素hPAB β的抗菌活性。利用已知肽抗生素hBD 2的晶体结构坐标进行hPAB β的同源模建 ;设计hPAB β突变体 ;用PCR法生成hPAB β突变体基因 ,分别构建转移载体和重组杆状病毒。结果表明 ,合成肽hPAB β在正确复性后具有较好的杀菌活性 ,将 4种突变体基因插入转移载体pFASTHTa ,筛选阳性重组子pFAST hPAB β并转化DH10Bac大肠杆菌 ,获得了重组杆状病毒 ,为筛选活性强而结构更为简单的hPAB
- 饶贤才陈志瑾金晓琳胡晓梅朱军民张克斌胡福泉
- 关键词：抗生素突变体杆状病毒
- 人源肽抗生素hBD-2表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2001年
- 为了构建人源肽抗生素hBD 2的表达质粒并在大肠杆菌中表达 ,将化学合成的hBD 2全基因插入原核融合蛋白表达质粒 pinpointXa 3的多克隆位点构建成表达质粒 ,按常规方法转化大肠杆菌JM10 9,筛选阳性重组子并诱导融合蛋白的表达。结果经酶切鉴定获得 7个阳性克隆 ,序列分析表明其中 4个克隆的插入序列与hBD 2基因完全一致 ,另 3个克隆插入序列的 39位由C突变为T ,89位多了一个G。正确的阳性克隆子在大肠杆菌中产生了约 18kD的特异性诱导蛋白。hBD 2的成功表达为进一步研究hBD 2的抗菌活性、抗菌机理打下了一定的基础。
- 饶贤才胡晓梅张克斌金晓琳朱军民刘启富张光明胡福泉
- 关键词：肽抗生素HBD-2原核表达质粒
- 铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究被引量：14
- 2004年
- 目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法 电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果 噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1～ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论 PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3
- 黄建军胡晓梅饶贤才张克斌金晓琳周莹冰李明申晓冬朱军民胡福泉
- 血浆八因子相关抗原与慢支缺氧性损害
- 1999年
- 目的比较血浆八因子相关抗原（ⅧＲ：Ａｇ）和动脉血氧分压（ＰａＯ２）在反映机体缺氧性损害方面何者更为准确。方法同步测定２４例老年人慢性支气管炎（慢支）患者急性期、缓解期血浆ⅧＲ：Ａｇ和ＰａＯ２，并对两者间的关系进行统计分析。结果急性期血浆ⅧＲ：Ａｇ平均含量（３１９．９±１４．８）％与对照组（１０９．３±３０．１）％比较差异非常显著（Ｐ＜０．００１），并与ＰａＯ２呈显著负相关，ｒ＝－０．４２９，Ｐ＜０．０５。缓解期血浆ⅧＲ：Ａｇ平均含量（１２７．１±５０．７）％与对照组比较无差异（Ｐ＞０．０５），但部分病例ＰａＯ２仍小于８．０ｋＰａ且ＰａＯ２与ⅧＲ：Ａｇ无相关性，ｒ＝－０．１８４，Ｐ＞０．０５：缓解期血浆ⅧＲ：Ａｇ比急性期有非常显著的降低（Ｐ＜０．００１）。结论测定血浆ⅧＲ：Ａｇ比ＰａＯ２更能准确地反映机体缺氧性损害的严重程度。
- 谢崧钱桂生张克斌
- 关键词：动脉血氧分压支气管炎
- 人源性exCAR蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定
- 2009年
- 目的在大肠杆菌中表达人源性柯萨奇病毒-腺病毒受体胞外区蛋白(exCAR),纯化表达蛋白并进行Western-blot-ting鉴定。方法从Hela细胞株中扩增exCAR基因片段,连接至表达质粒pET-28a(+)构建为重组质粒pET-28a-exCAR,转化至大肠杆菌BL21株中,筛选高表达株,诱导表达,利用Ni+株亲和纯化表达蛋白,SDS-PAGE后,转印PVDF膜后,进行Western-blotting鉴定。结果获得纯化的大肠杆菌表达蛋白exCAR,表达形式为包涵体,经Western-blotting鉴定为人源性exCAR蛋白。结论本研究获得了纯化的exCAR表达蛋白,为下一步的蛋白复性和腺病毒感染的阻断实验提供了基础。
- 张克斌周小波光丽霞周世文何晓梅盛哈蕾钱桂生
- 关键词：腺病毒柯萨奇-腺病毒受体胞外区
- 一对检测肺炎衣原体的新引物被引量：1
- 2001年
- 为建立一种更敏感的肺炎衣原体PCR检测方法 ,根据肺炎衣原体种特异性 5 3kDa蛋白基因序列设计一对引物5 3A、5 3B ,用PCR进行肺炎衣原体的检测研究。结果该引物仅能扩增肺炎衣原体DNA ,而与沙眼衣原体 ,鹦鹉热衣原体不反应 ,且对呼吸道常见病原菌之DNA的扩增亦为阴性 ,它能扩增出少至 10fg的肺炎衣原体DNA ,比我们以前合成的一对肺炎衣原体 16srRNA基因检测引物Cpnl、Cpn2更敏感 ,分别用这两对引物检测 30例有呼吸道疾患病人的鼻咽拭子标本 ,PCR的阳性符合率为 86 7%。表明 5 3A、5 3B是一对有效、实用。
- 饶贤才俞树荣胡福泉张光明胡晓梅张克斌金晓琳刘启富
- 关键词：肺炎衣原体PCR引物
