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廖梭蕾
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
供职机构:
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆市重点实验室
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发文基金:
重庆市教育委员会科学技术研究项目
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
阮雄中
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆...
陈昱杨
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆...
赵蕾
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆...
李青
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆...
陈压西
重庆医科大学脂糖代谢性疾病重庆...
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中华肝脏病杂...
年份
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2012
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沉默胆固醇调节原件结合蛋白2基因对炎症因子所致HepG2细胞内胆固醇异常积聚的影响
被引量:4
2012年
目的探讨沉默胆固醇调节原件结合蛋白(SREBP)2对炎症因子所致HepG2细胞内脂质异常积聚的影响。方法通过脂质体转染SREBP2-shRNA质粒、G418抗性筛选HepG2细胞,建立沉默SREBP2的HepG2稳定细胞株(SREBP2 shRNA-HepG2)及阴性对照质粒HepG2稳定细胞株(NC shRNA—HepG2)。对两种细胞分别给予无血清培养处理(对照组)、炎症因子[肿瘤坏死因子(TNF)α 20ng/ml]、高脂[低密度脂蛋白(LDL)100μg/ml]和联合干预(20ng/ml TNFα+100μg/ml LDL)处理。油红O染色及酶法检测细胞中脂质积聚情况,实时定量PCR和Western blot分别检测SREBP2及其下游靶基因低密度脂蛋白受体(LDLr)和3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶的基因和蛋白表迭隋况。对数据用单因素方差分析及2×2×2析因设计方差分析比较。结果成功建立阴性对照稳定细胞株NC shRNA—HepG2及抑制SREBP2表达的稳定细胞株sREBP2 shRNA—HepG2。在NC shRNA—HepG2细胞中,TNFα处理使细胞内胆固醇积聚增加,并能上调SREBP2下游靶基因LDLr、HMGCoA还原酶基因和蛋白的表达,其mRNA相对表达量分别为1.68±0.03、1.31±0.05,F值分别为107.42,59.08,P值均〈0.01;其蛋白相对表达量分别为1.49±0.10、1.54±0.06,F值分别为46.24,247.10,P值均〈0.01。而在SREBP2 shRNA—HepG2细胞中,TNFα对胞内胆固醇沉积的作用可以被明显减弱,进一步基因和蛋白检测结果显示,炎症因子TNFα对LDLr、HMGCoA还原酶的上调作用亦被明显抑制。结论炎症因子通过促进SREBP2及其下游靶基因表达致HepG2细胞内胆固醇异常积聚,而通过RNA干扰抑制SREBP2的表达,可以明显减轻炎症因子所致的细胞内胆固醇的异常积聚。
廖梭蕾
赵蕾
陈曜
李青
陈昱杨
阮雄中
陈压西
关键词:
脂肪肝
胆固醇
肿瘤坏死因子
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