尹立伟
- 作品数：12 被引量：32H指数：3
- 供职机构：安庆师范学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程生物学更多>>
- 灰树花的系统发育分析和主要木质素降解酶的测定被引量：13
- 2010年
- 对灰树花菌株迁西二号进行了ITS序列扩增与测序(GenBank登录号为GU584099),并对灰树花及相关白腐菌进行了基于ITS序列的系统发育分析,结果表明灰树花与Grifola sordulenta (Mont.) Singer等白腐菌的亲缘关系较近。采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加4种不同底物,对菌株迁西二号在25℃恒温下静置培养,得到了不同时间内的培养液,用紫外可见分光光度计分别检测了在470、420、310 nm处对于2,6-二甲氧基苯酚(2,6-DMP)、2,2’-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)、3,4-二甲氧基苯甲醇/藜芦醇(VA)的氧化作用后光密度值的变化情况,作为锰过氧化物酶(MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(LiP)产生和活性大小的依据,从而获得了灰树花木质素降解酶系统的主要酶系及其与培养基的成分和酶作用底物的基本关系。结果表明,灰树花可产生MnP和漆酶,但不产生LiP;对比4种成分不同的培养液酶活力测定结果,未添加底物的培养液MnP最大酶活仅为2.96 U.L-1,漆酶最大酶活仅为4.49 U.L-1。添加底物木屑和2,6-DMP后MnP最大酶活为8.06 U.L-1,漆酶最大酶活为9.85 U.L-1,表明在培养液内添加酶的底物木屑后能轻微地提高两种酶的分泌量。
- 尹立伟池玉杰王雪童
- 关键词：灰树花ITS序列锰过氧化物酶漆酶
- 不同添加剂对玉米淀粉老化度的影响被引量：6
- 2015年
- [目的]研究不同食品添加剂对玉米淀粉老化性能的影响。[方法]试验以玉米淀粉为原料,通过添加氯化钠、柠檬酸、黄原胶、蔗糖、单甘酯和糖化酶6种添加剂研究各添加剂对玉米淀粉的老化性的影响。[结果]试验表明,玉米淀粉的老化度随氯化钠浓度的增大而有所增大,而随着柠檬酸、黄原胶、蔗糖、单甘酯、糖化酶浓度的增大而有所减小。[结论]研究可为使用添加剂来适当延长食品的货架期提供参考依据。
- 朱玉尹立伟郭丽
- 关键词：添加剂玉米淀粉
- 猴头菌CB1染料脱色及其相关木质素降解酶的研究被引量：2
- 2015年
- [目的]探索猴头菌CB1木质素降解酶系统对4种染料脱色降解的研究。[方法]采用紫外/可见分光光度计,检测猴头菌木质素降解酶活性及4种染料不同浓度的脱色率。[结果]猴头菌可同时产生Mn P和Laccase,但不产生Li P。随着Mn2+的浓度变化,Mn2+对Mn P的酶活性起到诱导/限制作用;猴头菌在72 h对不同浓度的茜素红和中性红染料的脱色率分别为100.00%和68.75%,而5 mg/L浓度的刚果红在24 h的最大脱色率为74.61%,5 mg/L结晶紫在72 h的最大脱色率为66.86%。[结论]猴头菌的胞外酶液对不同浓度的茜素红和中性红染料表现为易脱色底物,刚果红次之,结晶紫最难被脱色降解。
- 尹立伟杨春成池玉杰
- 关键词：猴头菌木质素降解酶染料脱色降解
- 猴头菌菌株CB1的系统发育分析与木质素降解酶的检测被引量：2
- 2013年
- 首先对猴头菌菌株CB1进行培养特性观察,表明菌株能产生较多的厚垣孢子;对其ITS序列进行扩增(GenBank登录号为GU584100),并与猴头菌属5个种的17个不同地域菌株进行基于ITS序列的系统发育分析,结果表明菌株CB1与猴头菌同种其他菌株遗传距离较近并聚类在一起。明确该菌株的分类地位后,对其进行木质素降解酶系统的检测,结果表明猴头菌可产生锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(laccase),但不产生木质素过氧化物酶(LiP)。MnP和漆酶的酶活性变化是有规律的,Mn2+是猴头菌产生MnP的必要因子,而漆酶的产生则不受该条件的制约。在含Mn2+的LNAS培养基中加入木屑为底物的条件下,猴头菌MnP最大酶活性为45.56U·L-1,漆酶最大酶活性为61.85U·L-1。
- 尹立伟池玉杰
- 关键词：猴头菌ITS序列锰过氧化物酶
- 猴头菇CB1锰过氧化物酶全长cDNA的基因主序列分析
- 白腐菌具有三种重要的木质素降解酶:锰过氧化物酶(Manganese Peroxidase/MnP)、漆酶(Laccase)和木质素过氧化物酶(Lignin Peroxidase/LiP)。因此,白腐菌对木质素具有很强的降...
- 尹立伟
- 关键词：猴头菇ITS序列锰过氧化物酶基因克隆
- 文献传递
- 猴头菌锰过氧化物酶基因克隆及在构巢曲霉中的表达
- 本研究对猴头菌Hericium erinaceum(Bull.:Fr.) Pers.菌株CB1进行了系统发育分析和分类鉴定，对其主要木质素降解酶系统进行了的检测，用其酶液对4种不同类型的染料茜素红、中性红、刚果红、结晶紫...
- 尹立伟
- 关键词：猴头菌锰过氧化物酶基因克隆构巢曲霉原生质体转化
- 猴头菌MnP1基因全长cDNA克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2015年
- 【目的】克隆猴头菌CB1锰过氧化物酶(Mn P)基因,用于分析He-mnp1基因及蛋白序列、基因的结构与功能,为研究猴头菌Mn Ps基因功能、转录调控和构建优良工程菌株提供参考。【方法】根据Gen Bank中已报道的白腐菌Mn Ps基因c DNA序列的保守区域设计引物,采用简并PCR、逆转录RT-PCR、c DNA末端的快速扩增(RACE)等方法扩增出全长c DNA基因序列,命名为He-mnp1(Gen Bank登录号为HM116841.3),并对其猴头菌He-mnp1基因进行生物信息学的分析。通过NCBI数据库进行BLAST同源搜索;ORF Finder查找该基因的完整开放阅读框(ORF);利用Expasy数据库和Bio Edit软件预测He-mnp1蛋白质的理化特性及氨基酸的组成;同时进行亲/疏水性及跨膜区的分析;采用Signal P 4.1软件进行蛋白信号肽的预测;并利用Clustal W和MEGA 5.1软件对He-mnp1蛋白序列同源性比对和构建白腐菌Mn Ps系统发育树;利用数据库Conserved Domain Database(CDD)蛋白保守结构域的预测,查看He-mnp1血红素、基质及锰、钙等结合位点;采用Predict Protein软件和SWISS-MODEL软件进行He-mnp1蛋白二级结构的预测和同源三维建模。【结果】该基因He-mnp1的c DNA全长1 279 bp,完整开放阅读框1 080 bp,起始密码子ATG,终止密码子TAA,5'端非翻译区有68个核苷酸,3'端非翻译区有131个核苷酸,编码蛋白359 aa;生物信息学分析表明,猴头菌He-mnp1氨基酸组成中丙氨酸含量最高,无酪氨酸,分子量为38.18 k Da,等电点为4.35,He-mnp1的蛋白有明显的亲水区,存在81-105、121-141间有2处疏水区域,此蛋白为亲水蛋白。He-mnp1蛋白质多肽前体包含1个18 aa的信号肽及1个5 aa的中间前导短肽。【结论】蛋白系统进化分析表明He-mnp1分布在第2组群,与平菇侧耳、冬生多孔菌、变色栓菌的Mn Ps亲缘关系最为接近。He-mnp1基因存在1个保守结构域,分析显示为ClassⅡ类的真菌血红素过氧化物酶蛋白家族。He-mnp1蛋白二级结构预测α-螺�
- 尹立伟池玉杰
- 关键词：猴头菌锰过氧化物酶基因克隆生物信息学
- 猴头菌锰过氧化物酶1基因在构巢曲霉的异源转化与表达被引量：1
- 2013年
- 为提高猴头菌菌株CB1锰过氧化物酶(MnP)基因的表达产量,采用PEG/CaCl2介导的原生质体转化方法,将携带有He-mnp1的重组质粒pLB01/He-mnp1转入到构巢曲霉尿嘧啶尿苷营养缺陷菌株TN02A7的原生质体中,获得了转化子菌株TN02A7-He-mnp1,并在乙醇脱氢酶启动子alcA(p)控制下实现了异源表达。将TN02A7-He-mnp1、TN02A7、构巢曲霉野生型菌株WJA01、猴头菌菌株CB1在相同的木质素环境下进行培养并检测MnP酶活性,结果表明:转化子菌株TN02A7-He-mnp1在0.05 g.L-1血红素的情况下、诱导96 h后酶活性最高为38.31 U.L-1,比不添加血红素的酶活力高8.64倍,但比猴头菌菌株CB1的酶活力低,而TN02A7与WJA01始终无MnP酶活性,说明基因He-mnp1已经成功地被转化到TN02A7-He-mnp1中,并在木质素环境下得到表达,血红素是重组MnP基因异源表达的限制性因素之一。本文为生产MnP和提高MnP产量提供了新的途径。
- 尹立伟池玉杰
- 关键词：猴头菌锰过氧化物酶构巢曲霉
- 《普通植物病理学》实验教学改革被引量：4
- 2014年
- 为了促进实验教学质量的提高,对《普通植物病理学》实验教学进行改革。结合安徽安庆植物病害的特点和实地教学情况,针对植物病害的普遍性和地域性,着重于培养学生的综合能力和解决实际问题的能力,在激发学生学习兴趣的前提下,结合现代化教学手段,调整实验教学内容,提出新的实验教学模式。
- 尹立伟杨春成
- 关键词：普通植物病理学实验教学教学模式教学改革
- 紫孢侧耳Ps-mnp1基因克隆与蛋白结构预测
- 2015年
- 克隆紫孢侧耳PS1菌株锰过氧化物酶基因Ps-mnp1,具有生物降解木质素的活性,可用于分析锰过氧化物酶的蛋白功能与结构,并对深入了解紫孢侧耳Ps-mnp1基因功能和转录调控具有重要意义。基于ITS序列分析,明确了该菌株的分类地位。根据Gen Bank中白腐菌Mn Ps保守序列设计引物,采用染色体步移法和逆转录PCR法获得Ps-mnp1基因,Gen Bank登录号为(KP189358.1)。在克隆Ps-mnp1基因并分析蛋白结构时,采用多种现代生物信息学技术,经染色体步移法克隆的DNA全长序列后,利用contigexpress拼接软件预测Psmnp1基因的c DNA全长序列;使用Bio Edit分析软件对DNA和c DNA核苷酸序列比对;通过Augustus网站预测RNA的剪接位点并在NCBI上进行同源序列比对校正;采用基因结构软件对比了解白腐菌Mn Ps基因的内含子/外显子的组成。序列分析表明Ps-mnp1的DNA全长序列1 854 bp,具有外显子14条和内含子13条。从Ps-mnp1与其它白腐菌Mn Ps基因的内含子/外显子组成分析来看,紫孢侧耳和糙皮侧耳同属于侧耳属,但它们之间的Mn Ps基因结构完全不同。Ps-mnp1开放阅读框为1 095 bp,起始密码子ATG,终止密码子TAA,编码364 aa,含有20 aa残基构成的信号肽序列。采用MEGA 5.1软件构建的蛋白系统进化树表明Ps-mnp1与6株白腐菌蛋白聚类在短枝Mn Ps,区分了含有5个二硫键组成的长枝Mn Ps组群;此外,构建的蛋白同源模型表明,与刺芹侧耳多功能过氧化物酶相似度为72.51%,蛋白配体中结合位点有1个含铁血红素、2个钙离子、1个锰离子等,这些结合位点为不守恒。该研究为紫孢侧耳锰过氧化物酶的结构,蛋白功能Ps-mnp1奠定了基础,并进一步为Ps-mnp1的蛋白质工程改造提供借鉴作用。
- 尹立伟杨春成朱玉伦志明张静
- 关键词：紫孢侧耳锰过氧化物酶蛋白结构生物信息学同源模建
