尹志伟
- 作品数：9 被引量：23H指数：3
- 供职机构：天津医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：天津市科技攻关项目天津市卫生局科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 野生型P53转染DC诱导性抗肺癌免疫应答
- 任秀宝刘虹尹志伟李慧于津浦张澎
- 该研究以PCR、免疫组化、SSCP方法筛选P53突变型肺癌细胞系Calu-6，证实wt-p53载体转染后可90.6%地抑制Calu-6生长，用12例肿瘤病人外周血单个核细胞在IL-4、GM-CSF联合培养下诱导DC细胞，...
- 关键词：
- 关键词：树突状细胞肺癌
- MUC1/Y基因体外冲击树突状细胞诱导抗瘤免疫反应被引量：2
- 2004年
- 目的 :制备含MUC1 YcDNA质粒转染的树突状细胞 (DC) ,体外诱导杀伤细胞 ,研究其治疗消化道肿瘤的效果。方法 :构建MUC1 YcDNA真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1 Y、pcDNA3 1 MUC1 Y。以pcDNA3 1 MUC Y电转染 8例HLA A2 ( + )消化道肿瘤患者单个核细胞衍生的DC后 ,与自体T细胞混合培养 ,诱导CTL(T pcDAN3 1 MUC1 Y)。以SW6 2 0细胞 [HLA A2 ( + ) 、MUC1 Y( + ) ]为特异性靶细胞 ,Raji细胞 [HLA A2 ( - ) 、MUC1 Y( - ) ]和Lovo细胞 [HLA A2 ( - ) 、MUC1 Y( + ) ]为非特异性靶细胞 ,通过乳酸脱氢酶 (LDH)释放实验测定杀伤活性 ,ELISA法检测基因修饰后DC刺激自体T细胞产生IFN γ的能力 ,并以AN NEXINV FITC试剂盒检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡情况。结果 :pIRES2 EGFP MUC1 Y转染效率为 8%左右。T pcDAN3 1 MUC1 Y诱导的杀伤作用显著高于T pcDNA3 1[pcDNA3 1(+)修饰DC诱导的CTL]和T IL 2 (IL 2刺激外周血单个核细胞产生的CTL) ,P <0 0 5。而且T pcDNA3 1 MUC1 Y对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于对照组。基因修饰后的DC能刺激自体T细胞分泌高水平IFN γ ,与未转染的DC相比具有显著差异 (P <0 0 5 )。结论 :成功构建MUC1 Y全长cDNA真核表达载体。pIRES2 EGFP MUC1 Y可用于真核细胞转染 ,通过观察转?
- 尹志伟刘虹任秀宝郝希山
- 关键词：消化道肿瘤MUC1/Y基因疫苗
- mRNA疫苗冲击树突状细胞诱导抗肿瘤免疫反应的研究被引量：4
- 2003年
- 目的 :以消化道肿瘤组织mRNA冲击自体DC ,诱导特异性免疫应答。方法 :20例消化道肿瘤患者外周血分离PBMC(外周血单核细胞 ) ,在IL -4、GM -CSF联合作用下诱导DC ,从消化道肿瘤组织中提取mRNA并分别在有脂质体或无脂质体介导下冲击DC ,与未经纯化的T细胞混合培养 ,诱导CTL(细胞毒性T淋巴细胞 )。以CTL作为效应细胞 ,以胃癌细胞系803为靶细胞 ,LDH释放实验检测杀伤活性。结果 :细胞表面标记检测显示诱导前后CD3、CD4、CD14显著下降 ,CD40、CD86、CD1a、CD83、HLA -DR显著升高 ,表明IL -4、GM -CSF联合作用下有效诱导出DC ,混合淋巴细胞增殖实验表明该DC具有抗原递呈 ,刺激淋巴细胞增殖的功能。经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应与未经脂质体介导的mRNA冲击DC诱导的特异性杀伤反应比较 ,其杀伤率经统计学分析无显著性差异。而二者与单纯经IL -2诱导的未经纯化的T细胞产生的非特异性杀伤比较均有显著性差异。结论:以肿瘤细胞mRNA冲击DC诱导CTL可有效杀伤肿瘤细胞 。
- 黄宗堂尹志伟刘虹
- 关键词：树突状细胞肿瘤免疫
- MUC1/Y基因在胃肠道肿瘤中的表达及诱导抗肿瘤免疫被引量：1
- 2004年
- 目的 研究MUC1/Y基因异常表达在消化道肿瘤中的临床意义 ;构建MUC1/YcDNA全长载体 ,修饰树突状细胞 (DC)诱导杀伤细胞治疗消化道肿瘤。方法 采用RT PCR方法检测标本中MUC1/YmRNA表达。选取 8例HLA A2 + 消化道肿瘤患者 ,体外诱导DC ,以构建的MUC1/YcDNA真核表达载体pcDNA3.1 MUC1/Y修饰DC诱导CTL。通过检测对靶细胞SW6 2 0和Raji的杀伤作用和诱导靶细胞凋亡的能力来评价抗肿瘤免疫反应。结果 93.88%肿瘤组织表达较高水平的MUC1/Y。分析表明 :消化道肿瘤中MUC1/YmRNA表达与组织学分型、肿瘤生长方式、浸润程度及TNM临床分期有关 ;与性别、肿瘤发生部位及分化程度无关。pcDNA3.1 MUC1/Y修饰DC诱导的CTL对特异性靶细胞的杀伤活性显著高于对照组 ,并能有效诱导靶细胞凋亡。结论 MUC1/YmRNA表达在消化道肿瘤组织具有重要意义 ;经pcDNA3.1
- 尹志伟刘虹任秀宝郝希山
- 关键词：消化道肿瘤MUC1/Y基因疫苗
- 头颈部神经鞘瘤275例临床分析被引量：14
- 2004年
- 目的:对头颈部神经鞘瘤进行临床分析。方法:1969年7月～2002年9月共收治头颈部神经鞘瘤342例,占全身神经鞘瘤的58.6%(342/584),随访275例,随访率80.4%。结果:术前诊断为神经鞘瘤者仅为184例,误诊率为33.1%(91/275)。本组7例复发(包括3例恶性),肿瘤发生最多的神经为交感神经、臂丛神经和迷走神经。结论:神经鞘瘤60.0%左右发生在头颈部。绝大部分为良性,恶性极少(3/275)。主要治疗方法为手术,恶性神经鞘瘤对放、化疗不敏感,预后差。
- 徐本义尹志伟钱海兵周博
- 关键词：头颈部神经鞘瘤脑神经颈丛神经臂丛神经恶性
- p53基因修饰树突细胞诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验研究
- 2003年
- 目的 探讨含p5 3基因的质粒pC5 3 SN3转染的树突细胞 (DC)体外诱导特异性抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)。方法 应用脂质体介导将质粒pC5 3 SN3转染肺癌患者单个核细胞 [HLA A2 + ]衍生的DC ,然后与未经纯化的自体T细胞混合培养以诱导CTL(T pC5 3 SN3) ,并通过乳酸脱氢酶(LDH)释放实验测定其对p5 3基因突变的HLA A2 + 人肺癌细胞系Calu 6的杀伤活性。结果 用质粒pC5 3 SN3转染DC后 ,发现CD1a、CD83显著升高 ,转染前表达率分别为 (5 .4 5± 0 .89) %、(3.2 6± 0 .4 7) % ,转染后分别为 (5 2 .15± 11.5 6 ) %、(2 5 .78± 12 .35 ) %。但CD86 、CD4 0 、HLA DR等DC相关标志与转染前无明显改变。LDH释放实验显示 ,以Calu 6作为靶细胞 ,T pC5 3 SN3诱导的杀伤作用显著高于T IL 2(IL 2 10 0U ml刺激外周血单个核细胞产生的CTL) ,效靶比为 10∶1时其杀伤活性分别为 (5 6 .79±15 .6 7) %和 (39.33± 9.88) %。同时细胞表面标记检测可见T pC5 3 SN3细胞中以CD8+ 细胞为主 ,且CD6 9、CD4 5RO CD8表达均显著升高。结论 p5 3基因修饰的DC对p5 3突变的人肺癌细胞系可有效诱导HLA A2限制的特异性CTL。
- 王长利尹志伟任秀宝刘虹
- 关键词：P53基因修饰树突细胞特异性抗肿瘤免疫应答
- 野生型P53抑制肺癌细胞生长的研究
- 2003年
- 目的 :观察外源性野生型P53对有P53基因突变的肺癌细胞系的生长抑制作用 ,研究P53调控细胞生长分化的作用。方法 :以PCR、免疫组化、SSCP方法筛选P53突变型细胞系 ,在脂质体介导下转染野生型P53质粒pC53 -SN3 ,并以空质粒pCMV -neo做对照。用G418筛选稳定表达的细胞克隆 ,以生长曲线和集落形成实验观察所转染的野生型P53质粒对细胞生长分化的影响。结果 :经筛选发现Calu -6细胞系为P53第六外显子突变株 ,204处密码由谷氨酸突变为天冬氨酸 ,经野生型P53质粒 pC53-SN3转染后 ,发现细胞生长明显减慢 ,而转染空质粒的Calu -6细胞与未转染的细胞生长无差异 ,同时发现 pC53-SN3转染后集落形成抑制率达90.6 %。结论 :表明野生型P53基因可对肿瘤细胞细胞周期进行负调控 。
- 黄宗堂尹志伟刘虹
- 关键词：P53肺癌基因转染
- MUC1/Y基因真核表达载体构建及MUC1、MUC1/Y体外修饰DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答被引量：4
- 2004年
- 目的 构建MUC1 Y全长cDNA真核表达载体 ,并以MUC1及MUC1 Y真核表达载体修饰树突状细胞 (DC)诱导特异性抗肿瘤免疫。方法 构建MUC1 YDNA真核表达载体 ,选取 10例HLA A2乳腺癌患者 ,体外IL 4、GM CSF联合诱导DC ,并以pCDNA3.1 MUC1和pCDNA3.1 MUC1 Y转染DC ,同时以空载体为对照 ,以pIRES2 EGFP MUC1 Y观察转染效率 ,转染后DC与自体T细胞混合培养 ,诱导CTL。以MCF 7为特异性靶细胞 ,Raji为非特异性靶细胞 ,通过乳酸脱氢酶释放实验检测杀伤活性 ,以annexinⅤ FITC检测特异性CTL诱导靶细胞凋亡的情况。以ELISA法测定基因修饰后DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力。结果 酶切鉴定及测序结果表明成功构建了MUC1 Y真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1 Y和pCDNA3.1 MUC1 Y。pIRES2 EGFP MUC1 Y转染效率基本为 10 %左右 ,DC中MUC1表达率为 8%。杀伤实验表明T DC pCDNA3.1 MUC的杀伤活性为 6 4 % ,T DC pCDNA3.1 MUC1 Y为 4 6 %。这两组间差异有显著性 ,同时与对照组比较差异均有显著性。annexinⅤ FITC标记实验显示 ,T DC pCDNA3.1 MUC1对靶细胞的杀伤和诱导凋亡的能力显著高于T DC pCDNA3.1 MUC1 Y及对照组。基因修饰DC刺激自体T细胞分泌IFN γ的能力显著升高。结论 构建的真核表达载体pIRES2 EGFP MUC1
- 刘虹任秀宝魏枫尹志伟郝希山
- 关键词：MUC1基因真核表达载体DC诱导特异性抗肿瘤免疫应答
- 消化道肿瘤组织MUC1/Y基因表达及其临床意义
- 2004年
- 刘虹任秀宝尹志伟
- 关键词：消化道肿瘤基因疫苗
