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血脂水平与华支睾吸虫致病性的初步研究被引量：2: 2014年; 目的比较高血脂小鼠和正常血脂小鼠感染华支睾吸虫后的肝脏病理变化及炎症因子水平,以研究血脂水平对华支睾吸虫致病性的影响。方法通过向BALB/c小鼠投食高脂饲料建立高血脂小鼠模型,用相同囊蚴数感染高血脂小鼠和正常血脂小鼠,比较感染1个月后小鼠相关病理指标。通过Masson染色(Masson′s trichrome staining)判断肝胆纤维化程度,使用免疫组化和实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝脏α-平滑肌蛋白(α-SMA)定位情况和转录水平,用流式细胞术检测小鼠脾细胞在刀豆素(ConA)刺激48 h培养上清中细胞因子表达水平。结果与正常血脂感染组小鼠相比,高血脂感染组小鼠出现较显著的肝胆管扩张、肝实质及汇管区出现大量的胶原纤维增生、小胆管增生等病变。高血脂感染组α-SMA转录水平升高,并在肝脏组织汇管区及增生的纤维间隔内表达。高脂感染组脾细胞培养上清中白介素6(IL-6)和IL-10表达水平比正常血脂小鼠高(P<0.05),高脂感染组IFN-γ水平比高脂未感染组低(P<0.05)。结论高血脂可能使华支睾吸虫感染所致的肝脏胶原纤维增生、胆管扩张更明显,血脂水平高低还可影响华支睾吸虫感染后宿主的免疫应答。; 林金思陈桂珊孙恒昌屈红伶何蕾谢芝芝尚梅陈雪晴余新炳黄艳; 关键词：华支睾吸虫高血脂肝纤维化白介素6

恶性疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白突变株的建立及其在疟原虫体内的表达分析: 2014年; 目的构建恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)信号肽肽酶(PfSPP)基因转染载体,筛选可在体内表达疟原虫信号肽肽酶-绿色荧光蛋白(PfSPP-GFP)的疟原虫。方法提取Trager-Jensen法培养的恶性疟原虫3D7株基因组DNA,PCR扩增PfSPP C端不含终止密码子的883 bp基因片段,克隆构建重组转染载体pSPPcGT。重组载体经PCR和双酶切鉴定后送测序。电转化法将重组载体转染入恶性疟原虫体内,采用5 nmol/L恶性疟原虫二氢叶酸还原酶抑制剂WR99210筛选转染后,恶性疟原虫经无水乙醇固定、4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色后,荧光显微镜下观察PfSPP-GFP在其体内的表达分布情况。提取筛选后恶性疟原虫全蛋白,Western blotting分析虫体内PfSPP-GFP蛋白的表达情况。结果 PCR扩增获得PfSPP基因C端不含终止密码子的DNA片段,大小为883 bp。构建的重组转染载体pSPPcGT经PCR鉴定、双酶切鉴定和测序鉴定均正确。荧光显微镜观察结果显示,筛选后恶性疟原虫细胞内有绿色荧光蛋白表达,主要位于细胞质中,表明PfSPP-GFP已成功转染至恶性疟原虫并表达。Western blotting分析结果显示,转染的恶性疟原虫可表达含PfSPP-GFP融合蛋白,与预期相对分子质量(Mr)64 000大小一致。结论构建了恶性疟原虫PfSPP-GFP重组转染载体,筛选获得了能在疟原虫体内表达PfSPP-GFP的突变株。; 李学荣吴银娟尚梅李晔徐劲余新炳ATHAR Chishti; 关键词：恶性疟原虫绿色荧光蛋白

华支睾吸虫重组14-3-3ε蛋白对胆管癌CCLP-1细胞迁移侵袭的作用研究被引量：2: 2015年; 目的探讨华支睾吸虫重组14-3-3ε蛋白(r Cs14-3-3ε)对肝内胆管癌细胞株CCLP-1细胞波形蛋白(vimentin)表达的影响,观察该过程中CCLP-1细胞侵袭和迁移能力的变化。方法用不同浓度(1、5、10μg/ml)r Cs14-3-3ε与CCLP-1细胞共孵育24、48、72 h后,通过Q-PCR、Western blot等实验方法检测vimentin的表达水平。用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测r Cs14-3-3ε对CCLP-1细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 Q-PCR实验表明5μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP-1细胞72 h后及10μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP-1细胞24、48、72 h后,vimentin m RNA水平显著上调;Western blot实验显示,10μg/ml r Cs14-3-3ε刺激CCLP1细胞48、72 h后,vimentin蛋白水平显著上调。划痕实验表明,r Cs14-3-3ε(10μg/ml)能够促进细胞的迁移能力,处理后的细胞迁移率增大(P<0.01);Transwell小室检测显示,r Cs14-3-3ε(10μg/ml)处理组中穿膜细胞数为对照组的1.78倍,显著增加(P<0.05)。结论 r Cs14-3-3ε可以通过上调vimentin蛋白的表达,从而促进肝内胆管癌细胞株CCLP-1的侵袭和迁移能力。; 谢芝芝毛强余金芸林金思尚梅宁丹黄艳余新炳; 关键词：华支睾吸虫波形蛋白胆管癌迁移

恶性疟原虫信号肽肽酶原核表达载体的构建及融合表达蛋白的鉴定: 2014年; 目的构建恶性疟原虫PfSPP基因pMAL-p2x的原核表达载体,并鉴定表达,为其功能研究奠定基础。方法体外培养恶性疟原虫(3D7株和FCR3株),提取虫体总RNA,进行反转录后,采用RT-PCR扩增PfSPP的全编码区基因,将其克隆入原核表达载体pMAL-p2x,PCR、双酶切鉴定重组质粒,并进行序列测定,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌进行表达获得MBP-PfSPP融合蛋白,采用Western blotting对表达产物进行鉴定。结果成功构建pMAL-PfSPP,转化菌经诱导表达出分子量约为77 000Mr的MBP-PfSPP融合蛋白,抗MBP多克隆抗体可特异性地识别表达的融合蛋白。结论成功表达具有多个跨膜结构的膜蛋白PfSPP,从而为深入研究PfSPP的酶活性及生物学功能奠定基础。; 李学荣尚梅吴银娟李晔徐劲余新炳ATHAR H.Chisthi; 关键词：恶性疟原虫膜蛋白原核表达

华支睾吸虫已糖激酶的生物信息学分析、克隆表达及表达特性分析: 目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫已糖激酶(CsHK)全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,初步了解其重组产物的免疫学功能。方法利用BLAST等生物信息学软件分析CsHK蛋白的基本理化特征和...; 陈庭金尚梅李然黄艳宁丹邓传欢徐劲余新炳; 关键词：华支睾吸虫已糖激酶克隆表达免疫原性免疫组化; 文献传递

华支睾吸虫成虫总蛋白(CsTP)通过抑制mTOR/AKT信号通路调控细胞凋亡、迁移以及肝脏的炎症和自噬的发生: 目的：研究华支睾吸虫成虫总蛋白(CsTP)调控细胞增殖和肝脏中的炎症反应,并进一步探讨自噬是否激活及潜在的信号通路.方法：通过体内外实验方法,将CsTP处理的Balb/c小鼠及人肝星状细胞LX-2作为实验组,对照组使用相...; 尚梅吴银娟王彩琴孙恒昌赵璐林志鹏周心怡黄艳余新炳李学荣; 关键词：炎症自噬

华支睾吸虫颗粒蛋白在虫体及宿主中的表达: 2017年; 目的探讨华支睾吸虫颗粒蛋白(CsGRN)在虫体和宿主中的表达。方法使用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测华支睾吸虫成虫、囊蚴和虫卵及猫的肝脏、胆管组织和全血CsGRN基因mRNA表达水平;免疫组化检测CsGRN在成虫及宿主猫、人和实验感染的Balb/c小鼠肝脏中的定位。结果 CsGRN基因mRNA在虫体的各阶段都有表达,在感染的猫肝和胆管组织中高表达;CsGRN主要定位在成虫的睾丸、外膜和虫卵,在宿主人、猫和小鼠中主要分布在胆管上皮和肝细胞。结论 CsGRN可能参与虫体的生长发育,它作为分泌排泄抗原之一可能损害肝胆管组织,有进一步研究价值。; 王彩琴雷华丽田艳丽尚梅吴银娟李晔陈庭金黄艳余新炳李学荣; 关键词：华支睾吸虫颗粒蛋白宿主免疫定位致病机制

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尚梅

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