宋世斌
- 作品数：11 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 藏獒犬IFNγ基因的克隆表达及其生物学活性测定被引量：2
- 2018年
- 通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆IFNγ全基因,其大小为501bp,编码167个氨基酸,前23个AA为信号肽,与GenBank上发表的犬IFNγ((NM001003174.1)比较,序列的同源性为99.4%。构建了原核表达载体pET-30a-IFNγ,转化BL2L,IPTG诱导后表达约23Kd的重组蛋白,经镍琼脂糖凝胶层析柱纯化后,纯度达90%以上;利用抑制病毒噬斑法测定重组藏獒犬γ干扰素的生物学活性,结果显示纯化的蛋白具有一定的抗病毒活性,本研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性奠定基础。
- 宋世斌宋世斌陈国华胡永浩贾怀杰何小兵景志忠
- 关键词：藏獒犬IFNΓ原核表达活性测定
- 藏獒犬白介素18基因的克隆及原核表达
- 2018年
- 通过RT-PCR技术从刺激的藏獒犬外周血淋巴细胞中成功克隆白介素18基因全长,其大小为582bp,编码194个氨基酸。与GenBank上发表的犬IL-18(NM001003305)比较,序列的同源性为100%,与犬、猫、猪,牛、羊、人的IL-18基因核苷酸同源性分别为100%、91.2%、91.1%、88.5%、89.3%、84.4%。系统进化树可以看出,藏獒犬基因与犬的亲缘关系最近,与猫的其次,与人是较远的。然后构建-IL18去信号肽的原核表达载体pET-30a-IL18,转化BL2L,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达出25kd融合蛋白而且目的蛋白主要以包涵体的形式存在,westbloting验证表达的蛋白正确。
- 宋世斌宋世斌胡永浩何强敬淑燕
- 关键词：藏獒犬白介素18原核表达
- 猪白细胞介素-4重组蛋白的纯化及其生物学特性分析被引量：4
- 2007年
- 用已构建好的重组表达载体pGEX-4T-IL-4转染E.coli,在最适条件下诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析,表达出38 ku的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的25%,表达产物主要以包涵体的形式存在;对表达产物经变性、复性及初步纯化后再结合饱和硫酸铵沉淀和Sephadex-G100凝胶层析柱进一步纯化,所得蛋白的纯度约在90%以上。在体外利用MTT法检测其生物学特性,结果表明其具有较好的生物学活性,本试验为获得猪IL-4重组蛋白奠定了基础。
- 陈国华景志忠窦永喜蒙学莲张巧颖宋世斌
- 关键词：纯化活性分析
- 猪IL-18在毕赤酵母中的表达及活性分析被引量：4
- 2007年
- 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中扩增出IL-18基因并构建真核融合表达载体pPIC9K-IL-18,电激法转化入毕赤酵母GS115,采用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达,应用SDS-PAGE分析重组蛋白的表达情况,并将表达蛋白用凝胶层析柱纯化后,用MTT法检测其生物学活性。实验结果表明重组的GS115酵母菌株可表达分泌pIL-18,其表达在72h时达高峰,分泌量可达160mg/L,纯化的重组pIL-18蛋白具有显著的促进淋巴细胞增殖的活性,说明本试验已在毕赤酵母中在国内首次成功表达了具有生物学活性的pIL-18。
- 宋世斌景志忠陈国华王笑笑宗瑞谦
- 关键词：毕赤酵母基因表达纯化生物活性
- 猪IL-18在毕赤酵母中的分泌表达及生物学活性分析
- 白细胞介素-18是新近发现的一种细胞因子,它具有诱导T细胞和NK细胞产生IFN-γ,诱导GM-CSF的分泌,增强T细胞和NK细胞的细胞毒作用等免疫调节功能;能发挥显著的免疫佐剂作用;在抗肿瘤、病原微生物感染及抗超敏反应等...
- 宋世斌
- 关键词：毕赤酵母纯化生物活性分析
- 文献传递
- 猪白介素4在CHO-K1细胞中的重组表达及生物学活性分析被引量：2
- 2008年
- 将猪白介素4（Porcine interleukin4，PIL-4）基因亚克隆到真核表达载体pEGFP～N1中，构建重组表达质粒pEGFP—PIL-4，利用脂质体法转染CHO-K1细胞，采用荧光显微镜实时观察、RT—PCR和Western-blot分别检测CHO细胞转录表达目的分子的情况，通过MTT法检测所表达蛋白的生物学活性。结果在将重组质粒转染CHO-K1细胞中24、48h后的均观察到绿色荧光；经G418筛选14～20d后转染的细胞形成了阳性细胞集落，用RT-PCR扩增出约339bp的目的基因片段；经Western—blot检测到约为39000的特异蛋白分子条带，并证明在转染重组质粒的细胞中表达了高生物活性的重组蛋白。
- 陈国华景志忠房永祥王笑笑窦永喜蒙学莲宋世斌
- 关键词：白介素4真核表达CHO细胞生物活性
- 一种羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库及构建方法
- 本发明提供了一种羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库的制备方法，包括制备羊睾丸成纤维细胞；提取羊睾丸成纤维细胞RNA；合成cDNA，进行cDNA文库均一化；cDNA与pPR3‑N载体连接，连接产物转化宿主细胞DH5α，...
- 陈国华景志忠贾怀杰何小兵房永祥宋世斌
- 文献传递
- 猪白介素18基因在BHK细胞中的表达被引量：1
- 2007年
- 将猪白介素18(Porcine interleukin18,PIL-18)基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,构建了重组表达质粒pEGFP-PIL-18,利用脂质体法转染BHK细胞,采用荧光显微镜实时观察和RT-PCR检测技术确定目的蛋白的表达情况.结果在转染重组质粒24 h4、8 h后的BHK细胞中均观察到绿色荧光,转染的BHK细胞经G418筛选14 d后,用RT-PCR法检测目的基因,并扩增到长576 bpd的目的cDNA片段。表明在BHK细胞中成功地表达了PIL-18与EGFP的融合蛋白,这为下一步建立稳定表达PIL-18的细胞系奠定了基础.
- 王笑笑宗瑞谦吕转萍窦永喜宋世斌景志忠
- 关键词：转染BHK细胞真核表达
- 藏獒犬IFN-γ,IFN-α和IL-18基因克隆、表达及产物活性鉴定
- 干扰素(Interferon,IFN)是机体细胞受到病毒等生物诱导剂刺激而产生的一类分泌型糖蛋白类细胞因子,而白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是一种具有促炎作用的细胞因子,由机体活化的单核细胞、...
- 宋世斌
- 关键词：藏獒犬IFN-ΓIFN-ΑIL-18基因克隆活性鉴定
- 文献传递
- 猪IL-18在毕赤酵母中分泌表达条件的优化被引量：1
- 2008年
- 采用PCR方法从pGEM-IL-18重组质粒中亚克隆出IL-18基因并完成了真核融合表达载体pPIC9K-IL-18的构建和IL-18在毕赤酵母中的表达,在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化,进一步探索了酵母菌表达猪IL-18的发酵工艺.结果表明,摇瓶发酵时,诱导最佳时间为72 h,甲醇最适浓度为20 g/L,最适pH范围为6.0-8.0,最适接种量1∶1.与单纯甲醇诱导相比,甘油/甲醇诱导后的表达量明显提高.
- 宋世斌陈国华王颖王笑笑宗瑞谦景志忠
- 关键词：毕赤酵母摇瓶发酵
