孟凡亮
- 作品数：61 被引量：74H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 基于颜色判定的环介导等温扩增检测人型支原体的研究被引量：4
- 2018年
- 目的建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的人型支原体环介导等温扩增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5软件设计针对人型支原体MHO_2540基因保守区域的4条特异等温扩增引物,用羟基萘酚蓝(HNB)作为结果判读指示剂并优化体系中dNTPs、MgSO_4浓度,建立人型支原体LAMP检测方法,进行灵敏度、特异度等的检测并与普通PCR比较。结果LAMP对标准浓度人型支原体核酸的检测限约为10^(2 )CFU,与普通PCR相同,但比实时荧光定量PCR差一个数量级。人型支原体阳性临床标本拷贝数>10^(3 )CFU者LAMP阳性率100%,与普通PCR检出率(100%)一致,拷贝数10~1~10^(3 )CFU的弱阳性标本LAMP检出率为63.6%(14/22),普通PCR检出率为31.8%(7/22),差异有统计学意义(χ~2=4.46,P<0.05)。结论LAMP检测人型支原体敏感、特异且操作简便,可在基层推广应用。
- 龚杰冉梦龙吴伟伟刘立雍何利华孟凡亮赵飞
- 关键词：人型支原体环介导等温扩增技术临床标本分子诊断
- 346份临床呼吸道标本中肺炎支原体感染情况研究被引量：7
- 2014年
- 目的了解肺炎支原体菌株培养特点及其引起疾病的临床特点,提高对肺炎支原体感染疾病的认识,为国内临床肺炎支原体的诊治提供数据支持。方法对346份临床咽拭子标本进行肺炎支原体分离培养与实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测,了解临床标本中肺炎支原体分离培养特点,对不同年龄段和不同类型临床标本中肺炎支原体感染率比对分析。结果 346份标本肺炎支原体的分离培养和real-time PCR检测阳性率分别为28.6%和32.1%;其中205例社区获得性肺炎病例中肺炎支原体感染率为52.2%,141例上呼吸道感染病例标本中肺炎支原体检测阳性率仅为4.2%,两组感染率差异存在统计学意义。肺炎支原体人群感染率有随年龄段增加而降低的趋势,但感染率在<14岁的儿童组中与40岁以下的成年人组中差异无统计学意义。结论本研究表明肺炎支原体是引起社区获得性肺炎的重要病原,但在上呼吸道感染病例中少见;相比儿童病例而言,成人病例中肺炎支原体感染率也非常高,需引起临床更多关注。
- 何利华顾一心孟凡亮张建中赵飞
- 关键词：肺炎支原体社区获得性肺炎上呼吸道感染年龄组
- 利用基因芯片技术分析空肠弯曲菌的遗传特征被引量：1
- 2016年
- 目的为分析我国弯曲菌遗传特征,本研究根据已发表多株弯曲菌的全基因组测序特征及比对结果自行设计基因芯片,利用芯片对我国不同宿主来源菌株进行遗传特异性分析。方法根据前期基因组水平比对分析的结果,利用Combimatrix tiling Custom ArrayTM90K芯片,设计DNA芯片。芯片包含已测序菌株ICDCCJ07001、269.97、NCTC11168、81-176、81-116和RM1221共3384个CDS的探针序列,以及空肠弯曲菌耐药及致病性相关2个质粒共80个CDS的探针序列,与脂寡糖的合成相关基因簇16种共219个CDS的探针序列、荚膜多糖合成相关基因簇7种共160个CDS的所有序列。对我国不同宿主来源27株分离菌株提取DNA,利用芯片进行杂交,获得杂交信息并分析不同菌株CDS分布特征分析及聚类特点。结果中国菌株的主要变异区域主要存在于与脂寡糖、荚膜多糖合成相关的基因簇、鞭毛修饰相关的基因簇、DNA限制/修饰相关的基因簇以及空肠弯曲菌Mu样噬菌体基因簇。基因组水平不同来源菌株CDS分布的聚类结果没有发现显著的宿主归因特点,但GBS相关菌株脂寡糖合成相关基因组成具有共性特征。结论通过验证以及与过去研究的比较,本次研究中的基因芯片技术结果准确可信,本研究所用基因芯片在分析空肠弯曲菌基因多态性方面具有很好的优势,可用于弯曲菌遗传特征和重要毒力因子的分析和检测。
- 梁昊刘红莹尤元海顾一心张艾煜王敏何利华孟凡亮张建中张茂俊
- 关键词：空肠弯曲菌基因芯片
- A族链球菌基因组数据库建设及前噬菌体分布分析
- 2024年
- 目的通过对已报道的A族链球菌(GAS)全基因组数据进行梳理和生物信息学分析, 从基因组大数据中提取前噬菌体信息, 并对其在基因组中的存在状态及部分前噬菌体的基因组成进行分析, 了解GAS种群内前噬菌体分布特点。方法回顾性研究。收集下载GenBank数据库中截至2020年5月发布的GAS基因组组装序列, 整理菌株重要背景信息建立本地化基因组数据库。利用生物信息学软件构建GAS全基因组系统发生树, 进行核心基因组分析, 并对基因组中潜在的前噬菌体及其完整性进行预测, 获得前噬菌体分布特征。统计数据库中基因型种类、核心基因数量及前噬菌体的数量、长度和携带率。结果建立了包含2 529株GAS基因组序列的数据库, 涵盖140种血清型(emm基因型)。分离地点主要包括东亚、欧洲、美洲、大洋洲19个国家和地区。分离菌株疾病背景主要分为侵袭性感染、非侵袭性感染和免疫继发症3类;共鉴定出1 005个核心基因, 这些基因在95%以上菌株中均存在;对其中1 798条序列分析发现, 有1 366条序列存在1个或以上完整的前噬菌体, 携带率为76.0%。每株菌携带完整前噬菌体的数量范围为0~6个, 长度范围为32.8~62.6 kb, 主要分布在30~40 kb。中国菌株近些年优势克隆中存在的前噬菌体主要为phiHKUssa、phiHKUvir和phiHKU488, 主要携带speC、spd1和ssa 3种毒力基因。结论前噬菌体在GAS基因组中分布广泛, 可能在其种群优势克隆演变和扩张过程中发挥重要作用, 进而重塑特定emm基因型内部种群结构。GAS基因组数据库的建立为GAS病原监测提供了重要数据支撑。
- 孟凡亮向才鑫张建中尤元海
- 关键词：基因组A族链球菌种群结构噬菌体
- 幽门螺杆菌对AGS细胞蛋白激酶C同工酶表达的影响被引量：1
- 2007年
- 目的研究PKC同工酶在H.pylori感染引起胃癌发生中起作用。方法将幽门螺杆菌和人胃上皮腺癌细胞系AGS细胞共培养(细菌∶细胞=200∶1),在幽门螺杆菌攻击AGS细胞后的0h、0.5h、1h、4h、6h、12h、24h时间点分别提取AGS细胞的总RNA,同时提取相对应时间点平行培养的未受幽门螺杆菌攻击的AGS细胞的总RNA作为对照组,以Beta-actin为内参照,应用Taq-Man实时荧光定量RT-PCR技术研究这些样品的PKC同工酶的mRNA变化情况。结果与对照组相比,PKCε、PKCγ、PKCι、PKCζ、PKCα mRNA水平呈现增高趋势;PKCθ mRNA水平呈现持续下降趋势;PKCδ mRNA水平与对照组呈现一致表达趋势。结论H.pylori可能通过上调具有肿瘤增殖活性的PKCα、ε、γ、ι、ζ,下调了具有凋亡活性的PKCθ,参与H.pylori引起胃癌的发生过程。H.pylori对PKCδ mRNA水平没有影响。
- 姜媛媛李建生何利华孟凡亮张建中
- 关键词：幽门螺杆菌蛋白激酶C胃癌AGS细胞
- 实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测肺炎支原体被引量：15
- 2013年
- 目的建立一种快速、灵敏、特异的肺炎支原体实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)检测方法,以期用于临床肺炎支原体感染检测。方法通过测序分析和序列比对,选取肺炎支原体p1基因中保守区域设计特异性引物和荧光探针,建立和完善此real-time PCR检测方法,并进行扩增效率、灵敏度及特异度评价。与已报道的肺炎支原体常规聚合酶链反应(PCR)方法进行150份临床标本检测能力比较。结果建立的real-time PCR方法对肺炎支原体的检测限约为10 cfu。使用该方法对9株肺炎支原体ATCC标准株和30株临床分离株核酸扩增均为阳性;对10种其他支原体、13种常见呼吸道病原菌染色体及人类染色体扩增结果均为阴性。同时,临床标本的检测结果显示该方法检测灵敏度优于常规PCR。结论本研究建立的real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测标本中肺炎支原体核酸,可适用于临床肺炎支原体诊断。
- 孟凡亮何利华顾一心张建中赵飞
- 关键词：肺炎支原体REAL-TIMEPCR
- 2014年北京地区社区获得性肺炎病例中肺炎支原体感染与耐药检测
- 目的 了解2014年北京地区社区获得性肺炎(CAP)病例中肺炎支原体感染及耐药情况.方法 使用肺炎支原体选择性培养基对2014年采集的47份CAP标本分离培养并使用real-time PCR方法对分纯菌株进行鉴定.所有分...
- 刘立雍何利华孟凡亮张建中赵飞
- 幽门螺杆菌作用后AGS细胞内钙离子的动态变化研究被引量：2
- 2010年
- 背景幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生密切相关,但致病机制尚未清晰。细胞毒素相关蛋白A(CagA)是Ⅰ型Hp的主要毒力因子,在Hp诱导的疾病特别是胃癌的发展中起重要作用。前期的研究发现,Hp作用后人胃腺癌上皮细胞(AGS)的钙离子相关蛋白钙网织蛋白CRT以及钙离子结合蛋白CALNUC磷酸化程度发生改变,提示Hp可能会影响AGS细胞的钙稳态,通过钙离子通路影响细胞的增殖或凋亡。目的研究Hp作用于人胃腺癌上皮细胞后,AGS细胞内钙离子的时序性变化,以及CagA对AGS细胞内钙离子的影响,进一步揭示Hp的致病机制。方法采用钙离子荧光标记示踪法,AGS细胞以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,特异性地活体标记AGS内的钙离子,采用激光共聚焦显微镜观察分析Hp26695及其CagA缺失株(Hp26695△CagA)分别作用于AGS细胞1h、2h、3h、4h、5h、6h后,AGS细胞内钙离子的变化情况。结果幽门螺杆菌与AGS细胞相互作用1h,胞内Ca2+部分流失,5h胞内Ca2+大量流失。1～6h内,Hp26695与Hp26695△CagA作用的AGS细胞荧光强度没有显著差异。结论Hp作用会导致AGS细胞内Ca2+剥夺,且与CagA的存在无明显关联性。
- 肖迪陶晓霞孟凡亮王海滨乔博何利华李培京张建中
- 关键词：幽门螺杆菌荧光标记
- 肺炎支原体基因型快速分型试剂盒
- 本发明提供一种肺炎支原体基因型快速分型试剂盒，涉及蛋白质指纹图谱检测技术领域。本发明基于质谱技术，构建了针对肺炎支原体进行快速分型鉴定的特异性多肽质谱模型，以及使用质谱技术进行分型的试剂盒。本发明试剂盒能够通过特异性指纹...
- 赵飞张建中肖迪张慧芳张永婵胡源陶晓霞何利华顾一心孟凡亮
- 文献传递
- 一种检测空肠弯曲菌抗体的特异抗原及其应用
- 本发明提供了一种用于检测空肠弯曲菌的特异抗原，为空肠弯曲菌烷基过氧化氢还原酶AhpC(Alkyl Hydroperoxide Reductase，AhpC)重组蛋白抗原，该抗原的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编...
- 张茂俊张建中孟凡亮曹芳芳
- 文献传递
