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宫颈癌中HPV感染分型与EGFR靶向治疗药物敏感突变、EGFR启动子甲基化的研究被引量：4: 2014年; 目的检测并分析宫颈癌组织标本中感染HPV病毒型别与EGFR基因启动子甲基化状态、EGFR靶向治疗药物敏感相关基因突变状态的分布与关联性，为指导宫颈癌的个体化治疗提供新思路和分子诊断技术方法。方法分别提取180例宫颈癌组织DNA，GP5＋／GP6＋非对称扩增荧光偏振检测方法检测每例宫颈癌标本组织DNA的HPV16、18、58、52型。非对称扩增荧光偏振检测方法检测每例宫颈癌标本组织的亚硫酸氢盐转变DNA的EGFR启动子甲基化状态：测序法检测每例宫颈癌标本组织DNA的EGFR基因18、19、21外显子突变状态；统计分析检On,0结果。结果本研究成功检测了宫颈癌标本组织DNA中HPV16、18、58、52型和EGFR基因18、19、21外显子突变状态，成功检测了宫颈癌标本组织亚硫酸氢盐转变DNA的EGFR启动子甲基化状态。EGFR启动子甲基化阳性65例，阳性率为36．1％。单纯HPV16阳性54例，其中EGFR启动子甲基化34例，占63．0％。HPV16阳性样本中EGFR启动子甲基化阳性比率最高。结论本研究中，宫颈癌标本中HPV感染率为100％，宫颈癌标本中未发现EGFR药物敏感相关基因EGFR18、19、21外显子突变，宫颈癌标本中EGFR启动子甲基化阳性率较高，其中，HPV16感染的宫颈癌标本中EGFR启动子甲基化阳性率较其他病毒型显著增高，提示HPV16感染与EGFR启动子甲基化有一定关联．; 姜英浩张潍俞青苗强少盈梁平程红高艳娥赵星烨郭晏海张菊; 关键词：宫颈癌表皮生长因子受体甲基化

靶向CD19嵌合抗原受体载体的构建及其稳转细胞体外活化效应的研究: 2017年; 目的构建靶向CD19嵌合抗原受体载体并通过建立稳转细胞系检测其在体外的活化效应。方法合成获取CD19的CAR片段，转入pCMV6-Entry质粒，构建pCMV6-Entry—CAR载体。通过重组酶的作用将pCMV6一Entry—CAR载体和pLenti6．3／V5-DEST载体进行重组。形成pLenti6．3／V5．DEST．CAR载体，将其包装入慢病毒并感染Jurkat细胞建立稳转细胞系。将稳转的Jurkat细胞和Raji细胞共孵育后，利用ELISA检测上清IL-2的含量，判断Jurkat细胞的活化状况。结果成功构建了pLenti6．3／V5-DEST-CAR载体，感染筛选后的Jurkat细胞可稳定表达CD19的CAR，与Raji细胞共孵育后细胞上清中IL-2的浓度增加至22pg/ml。结论实验中构建的pLenti6．3／V5-DEST—CAR载体能够稳定转染并表达于Jurkat细胞系中，并能有效促进其激活效应。为下一步优化CART细胞提供基础。; 王振禹姜英浩许承明阮班军叶子晨翟东昇卢兹凡; 关键词：CD19 增殖

肺癌患者EGFR基因启动子甲基化状态研究被引量：5: 2012年; 目的:探讨肺癌组织中EGFR基因启动子的甲基化水平及甲基化状态与EGFR外显子突变的关系。方法:应用聚合酶链技术、基因克隆测序技术和荧光偏振技术,检测肺癌患者病理组织中EGFR基因启动子的甲基化水平。结果:76例肺癌组织中EGFR基因启动子甲基化阳性者23例,检出率为30.3%,甲基化状态与肺癌患者的性别、年龄、吸烟史、淋巴结转移、浸润程度和TNM分期均无明显相关性,与患者的病理类型密切相关,吸烟对甲基化的相对危险度(OR)为1.88,40例NSCLC患者中,29例未检测到敏感突变的患者中有10例甲基化为阳性,甲基化率为34.5%,而11例TKI敏感突变的患者中均未检测到甲基化。结论:肺癌患者EGFR基因存在启动子甲基化,EGFR外显子的突变状态与启动子甲基化有密切关系。; 强少盈张菊姜英浩刘文超; 关键词：肺癌表皮生长因子受体甲基化突变

肺癌中EGFR外显子突变丰度的荧光偏振检测: 2015年; 目的:建立一种基于荧光偏振技术快速、特异的检测体系,并将该体系用于检测肺癌标本中EGFR基因19、21外显子的突变丰度,以便更加全面、准确地预测靶向药物疗效以及指导临床靶向药物选择。方法:应用Primer premier 5.0软件在EGFR基因19、21号外显子突变区域上下游处设计19、21外显子各自的通用PCR引物,并设计覆盖各自突变区域的两对荧光标记探针(突变型和野生型)。以包含野生型(19、21)和突变型(19、21)的质粒分别为4种阳性标准品,空载体为阴性标准品,分别作为模板进行PCR扩增反应,将扩增结果应用荧光偏振仪进行检测,以建立突变丰度测量体系。最后,对51例肺腺癌标本进行检测,并计算出各自的突变丰度。结果:荧光偏振检测EGFR基因19、21外显子突变结果与直接测序法结果无统计学差异,且最低检测浓度为40拷贝/μl,最低检测含量可达10%。本法可提供更全面的瘤内基因变异丰度分析,有利于指导临床用药。结论:荧光偏振检测EGFR基因19、21外显子突变结果不仅灵敏度与特异性高,还能提供全面的瘤内异质性分析指标,可为临床肺癌个体化治疗效果提供预测依据。; 杨阳姜英浩陈亚楠强少盈郑智坤张菊刘文超; 关键词：肺癌表皮生长因子受体

干细胞伦理之争的“终结者”——谈诺贝尔生理学与医学奖获得者山中伸弥: 2013年; 2012年诺贝尔生理学与医学奖得主日本学者山中伸弥在发现诱导多能干细胞(iPS)之前没有显赫的学术地位,但是他独特的思维方式,敢于挑战科学大问题的胆量,使他在最短时间内一跃成为生命领域的领跑者,开启了再生医学的全新篇章。探寻这位快速登上科学之巅的学者,回顾他的成长经历和伟大科学发现背后的故事,思维灵感会被点燃,创新之奥秘和乐趣也会渗透于心。; 姜英浩张菊卢兹凡

宫颈癌中EGFR启动子甲基化荧光偏振技术检测方法研究被引量：1: 2014年; 目的:建立一种基于荧光偏振技术的宫颈癌组织标本中EGFR启动子甲基化检测的新方法。方法:设计通用引物,在封闭管中同时扩增EGFR启动子甲基化与非甲基化等位基因片段,再同时用序列特异的FAM或TAMRA荧光标记探针对扩增产物进行杂交检测,利用荧光偏振仪检测扩增杂交反应的荧光偏振值,确定EGFR启动子甲基化状态。应用荧光偏振法检测63例宫颈癌组织样本,并与直接测序法进行对比验证。结果:本方法检测EGFR启动子甲基化结果与直接测序法结果无统计学差异,且最低检测浓度为50拷贝/μl,最低检测含量可达10%,敏感度高。结论:本方法检测EGFR启动子甲基化灵敏度与准确度较高,为临床宫颈癌个体化治疗相关检测提供了新技术。; 姜英浩张潍俞青苗强少盈梁平程红高艳娥赵星烨张菊; 关键词：宫颈癌表皮生长因子受体甲基化

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姜英浩

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